顧瑩 黃歡 孫麗洲

(1.連云港市婦幼保健院 生殖遺傳科，江蘇 連云港 222006；2. 江蘇省婦幼保健院 產(chǎn)科，江蘇 南京 210036)

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染色體微陣列分析技術(shù)在胎兒遺傳病診斷中的應(yīng)用

顧瑩1黃歡2孫麗洲2

(1.連云港市婦幼保健院 生殖遺傳科，江蘇 連云港 222006；2. 江蘇省婦幼保健院 產(chǎn)科，江蘇 南京 210036)

染色體微陣列分析(chromosomal microarray analysis,CMA)技術(shù)是一種通過(guò)對(duì)染色體進(jìn)行全基因組掃描，發(fā)現(xiàn)染色體組的數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常的檢測(cè)技術(shù)。CMA以其高分辨率、高效率、高自動(dòng)化操作等優(yōu)點(diǎn)，不僅能有效檢測(cè)傳統(tǒng)核型分析技術(shù)所能檢測(cè)的染色體數(shù)目異常及非平衡性結(jié)構(gòu)異常，還能檢測(cè)染色體組亞顯微結(jié)構(gòu)水平上不平衡重排引起的拷貝數(shù)變異(copy number variation,CNV)，成為現(xiàn)代臨床遺傳學(xué)常規(guī)診斷工具，并被引入到產(chǎn)前胎兒遺傳疾病檢測(cè)中。本文將就產(chǎn)前胎兒遺傳病、胎兒遺傳病檢測(cè)的技術(shù)回顧、CMA技術(shù)的發(fā)展及在胎兒遺傳病檢測(cè)中的應(yīng)用、優(yōu)勢(shì)和面臨的挑戰(zhàn)等做一個(gè)詳細(xì)的綜述。

染色體微陣列分析；產(chǎn)前診斷；遺傳??；遺傳咨詢

遺傳病指人體遺傳物質(zhì)(包括細(xì)胞核DNA和核外線粒體DNA)發(fā)生變異或可遺傳性修飾而導(dǎo)致的疾病，可由親代遺傳給子代，故稱遺傳病。在產(chǎn)前胎兒檢測(cè)的遺傳性疾病中主要包括染色體病、基因病、線粒體病等。目前已發(fā)現(xiàn)的人類染色體異常超過(guò)10 000種[1]，主要包括數(shù)目異常，如唐氏綜合征21號(hào)染色體比正常多一條，女性先天卵巢發(fā)育不全缺少一條X染色體；部分染色體大片段結(jié)構(gòu)變異，羅氏易位等；染色體亞顯微結(jié)構(gòu)的微缺失或重復(fù)，如17q21.31微缺失綜合征和22q1l.2微重復(fù)綜合征。染色體病對(duì)胎兒的危害尤其巨大，除極少數(shù)三體和性染色體異?？梢源婊钕聛?lái)，大多數(shù)的染色體數(shù)目異常均以流產(chǎn)、死胎而告終，而染色體結(jié)構(gòu)異常則是引起新生兒出生缺陷非常重要的原因，包括智力低下、發(fā)育遲緩、多器官畸形等[2]，而目前尚無(wú)有效的治療措施，因此需要及早準(zhǔn)確檢測(cè)和積極干預(yù)。目前產(chǎn)前胎兒遺傳病的檢測(cè)主要集中在染色體病的檢測(cè)，本文將就最新的染色體病檢測(cè)技術(shù)染色體微陣列技術(shù)(chromosomal microarray analysis,CMA)在胎兒遺傳病檢測(cè)中的發(fā)展、應(yīng)用及問(wèn)題和前景進(jìn)行綜述。

1 產(chǎn)前遺傳病診斷技術(shù)發(fā)展的回顧及問(wèn)題

傳統(tǒng)產(chǎn)前診斷技術(shù)采用染色體G顯帶核型分析技術(shù)(karyotyping)。該技術(shù)始于20世紀(jì)70年代，可有效檢測(cè)出胎兒染色體的數(shù)目異常(如唐氏綜合征)和結(jié)構(gòu)異常(如平衡/不平衡易位和倒位)，近40年來(lái)一直被認(rèn)為是診斷染色體病的“金標(biāo)準(zhǔn)”。G顯帶核型分析技術(shù)需要細(xì)胞培養(yǎng)，需要較長(zhǎng)檢測(cè)周期才能得到最終報(bào)告，為受檢者及家人帶來(lái)等待焦慮及很大困擾。染色體核型技術(shù)依賴于顯微鏡的分辨率和傳統(tǒng)顯帶技術(shù)，約10Mbp以上的重排可被發(fā)現(xiàn)，即使應(yīng)用高分辨率的染色體顯帶技術(shù)也只能達(dá)到5Mb的分辨率。過(guò)低的分辨率無(wú)法對(duì)許多具有致病性的染色體亞顯微結(jié)構(gòu)變異包括染色體微缺失或微重復(fù)作出診斷。20世紀(jì)80年代后期，熒光原位雜交(fluorescent in situ hybridization，F(xiàn)ISH)被引入產(chǎn)前診斷，該技術(shù)探針?lè)€(wěn)定性好、技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單、診斷時(shí)間短、重復(fù)性好，檢測(cè)結(jié)果清晰直觀，不需培養(yǎng)細(xì)胞，能快速準(zhǔn)確檢測(cè)非整倍體異常。然而FISH技術(shù)也面臨著信號(hào)重疊及操作者經(jīng)驗(yàn)不足易導(dǎo)致誤判，因探針有限只能對(duì)部分而非全部染色體進(jìn)行檢測(cè)，只能檢測(cè)已知致病基因或可疑位點(diǎn)，不能區(qū)分正常和倒位、平衡易位攜帶者的胚胎[3,4]，無(wú)法很好地滿足產(chǎn)前診斷的需要。熒光定量PCR(quantitative fluorescent polymerase chain reaction,QF-PCR)與多重連接探針擴(kuò)增(multiplex multiplexligation-dependent probe amplification，MLPA)技術(shù)也能快速準(zhǔn)確分析小的染色體異常片段，如胎兒先心病時(shí)22q11.2微缺失的檢測(cè)，17p11.2區(qū)域的微重復(fù)和復(fù)制[5,6]。以上技術(shù)均針對(duì)特定的區(qū)域，在一定程度上解決了部分問(wèn)題，但因無(wú)法進(jìn)行全基因組基因檢測(cè)，應(yīng)用上受到很大限制。因此發(fā)展更新的能夠?qū)Ω鱾€(gè)層次的染色體疾病都能高分辨率、高通量、高自動(dòng)化、快速高效率而低費(fèi)用的檢測(cè)技術(shù)已成為時(shí)代的需求。

2 CMA技術(shù)及優(yōu)勢(shì)

隨著分子技術(shù)的發(fā)展，一種全新的關(guān)于染色體變異檢測(cè)技術(shù)-染色體微陣列分析(chromosomal microarray analysis, CMA)技術(shù)，又稱為“分子核型”(molecular karyotyping)分析技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生?；谖㈥嚵械谋容^基因組雜交(arraybased comparative genomic hybridization,aCGH)技術(shù)和單核苷酸多態(tài)性微陣列(single nucleotide polymorphism array,SNP array)技術(shù)，CMA技術(shù)在染色體疾病的檢測(cè)中，尤其是對(duì)基因拷貝數(shù)變異(copy number variation,CNV)引起疾病的檢測(cè)中，顯示其巨大的優(yōu)勢(shì)。CMA的最大優(yōu)點(diǎn)在于其高分辨率，這不僅能夠如G顯帶技術(shù)一樣在全基因組范圍內(nèi)有效、同時(shí)地檢測(cè)出染色體數(shù)目及多種染色體不平衡導(dǎo)致的遺傳病，并準(zhǔn)確、客觀地界定亞顯微水平的CNV的區(qū)間及大小，而不用像核型分析那樣依賴對(duì)區(qū)帶強(qiáng)度的主觀觀察和判斷，其分辨率也比傳統(tǒng)核型分析高出近千倍。aCGH能識(shí)別200kb以下的微缺失及復(fù)制,而SNParray分辨率可達(dá)1.5kb，這是傳統(tǒng)染色體G顯帶核型分析無(wú)法做到的。同時(shí)，還可根據(jù)需求選擇或是訂制不同分辨率的芯片。其次是高效率，檢測(cè)范圍覆蓋整個(gè)基因組，aCGH檢測(cè)時(shí)間縮短至30小時(shí)內(nèi)[7]，SNParray技術(shù)分析甚至有報(bào)道可以<10小時(shí)，有望在1天內(nèi)完成檢測(cè)。SNParray可以追溯到胚胎額外的染色體來(lái)自父方或者母方，還可以明確非整倍體或單親二倍體(UPD，即同源染色體均來(lái)自同一個(gè)親本)的異常是由卵母細(xì)胞減數(shù)分裂期還是胚胎有絲分裂過(guò)程中的錯(cuò)誤造成的。SNParray還帶有SNP分型的信息，可用以檢測(cè)雜合缺失(loss of heterozygosity，LOH)及>10%比例的嵌合體，而臨床上利用LOH 的信息可以對(duì)部分隱性遺傳病及印記基因疾病進(jìn)行檢測(cè)。

CMA技術(shù)進(jìn)入產(chǎn)前胎兒遺傳疾病檢測(cè)領(lǐng)域以來(lái)，由于其諸多方面的優(yōu)勢(shì)，從開(kāi)始的質(zhì)疑，再到逐漸能夠接受，到現(xiàn)在在某些領(lǐng)域已經(jīng)成為一線的檢測(cè)手段。2009年，美國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)師協(xié)會(huì)(ACOG)首次推薦將aCGH作為產(chǎn)前超聲檢查顯示結(jié)構(gòu)異常、但染色體核型分析結(jié)果正常胎兒的產(chǎn)前檢測(cè)方法[8]。2013年ACOG及美國(guó)母胎醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)(SMFM)發(fā)表臨床指南，指出在產(chǎn)前超聲檢查顯示結(jié)構(gòu)異常的胎兒中，推薦CMA替代傳統(tǒng)的染色體核型分析技術(shù)[9]。在我國(guó)，染色體微陣列分析技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用協(xié)作組于2014年形成《染色體微陣列分析技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用專家共識(shí)》[10]，2016年7月，由中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)分會(huì)、中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)青春期醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)臨床遺傳學(xué)組、中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)內(nèi)分泌遺傳代謝學(xué)組多個(gè)權(quán)威機(jī)構(gòu)在《中華兒科雜志》發(fā)布了《染色體基因組芯片在兒科遺傳病的臨床應(yīng)用專家共識(shí)》[11]，為CMA在我國(guó)的應(yīng)用提供了指南。

3 CMA在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用

3.1 CMA在產(chǎn)前診斷中臨床適應(yīng)證及禁忌證 近年來(lái)，加拿大醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)會(huì)(Canadian College of Medical Geneticists，CCMG)、美國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)院(American College of Obstetricians and Gynecologists，ACOG)及母胎醫(yī)學(xué)會(huì)(Society for Maternal-Fetal Medicine，SMFM)都為CMA技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用發(fā)布了相關(guān)的指南[8,9,12]，而我國(guó)隨后于2014年底發(fā)布了《染色體微陣列分析技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用專家共識(shí)》[10]，2016年7月發(fā)布了《染色體基因組芯片在兒科遺傳病的臨床應(yīng)用專家共識(shí)》[11]，指導(dǎo)我國(guó)CMA技術(shù)的推廣和應(yīng)用。根據(jù)這兩份共識(shí)，CMA技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的臨床適應(yīng)證及禁忌證如下：①產(chǎn)前超聲檢查發(fā)現(xiàn)胎兒結(jié)構(gòu)異常是進(jìn)行CMA檢查的適應(yīng)證，建議在胎兒染色體核型分析的基礎(chǔ)上進(jìn)行，如核型分析正常，則建議進(jìn)一步行CMA檢查。②對(duì)于胎死宮內(nèi)或死產(chǎn)、需行遺傳學(xué)分析者，建議對(duì)胎兒組織行CMA檢測(cè)，以提高其病因的檢出率。③對(duì)于胎兒核型分析結(jié)果不能確定染色體畸變情況時(shí)，建議采用CMA技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步分析以明確診斷。④CMA應(yīng)用于評(píng)估早、中孕期胎兒丟失原因的研究數(shù)據(jù)積累不足，暫不推薦使用。⑤CMA技術(shù)(特指涵蓋SNP探針的平臺(tái))對(duì)于異常細(xì)胞比例>30%的嵌合體檢測(cè)結(jié)果比較可靠，反之，對(duì)異常細(xì)胞比例<30%的嵌合體結(jié)果不可靠。

3.2 基本流程 根據(jù)2014年及2016年我國(guó)相關(guān)全文機(jī)構(gòu)的兩份關(guān)于CMA使用的共識(shí)[10,11]及遺傳基因檢測(cè)的管理規(guī)范，產(chǎn)前CMA檢測(cè)的基本流程如下：

3.2.1 臨床醫(yī)生在開(kāi)具CMA檢查申請(qǐng)單前，應(yīng)對(duì)受檢者及家屬詳細(xì)告知檢測(cè)方法、芯片類型、可檢測(cè)的疾病、可能出現(xiàn)的檢測(cè)結(jié)果、檢測(cè)風(fēng)險(xiǎn)，在醫(yī)生與受檢者及家屬達(dá)成接受檢測(cè)的共識(shí)后，簽署知情同意書。

3.2.2 在具備相關(guān)資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)采集羊水、絨毛及臍血等獲得胎兒細(xì)胞樣本及父母雙方外周血樣本。

3.2.3 在具有CMA檢測(cè)資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室，根據(jù)檢測(cè)目的和要求選擇合適的芯片，進(jìn)行CMA檢測(cè)。

3.2.4 對(duì)于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，需要結(jié)合相關(guān)專業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)、已報(bào)道病例和專業(yè)文獻(xiàn)等，利用相關(guān)專業(yè)軟件進(jìn)行分析，出具檢測(cè)報(bào)告。

3.2.5 針對(duì)檢測(cè)后的遺傳咨詢，臨床醫(yī)生需針對(duì)檢測(cè)報(bào)告結(jié)果給家屬提供準(zhǔn)確的遺傳咨詢：①基因型與表型的關(guān)系，疾病的遺傳方式：將已報(bào)道的攜帶類似CNV的患者主要表型與先證者進(jìn)行對(duì)比，了解基因型與表型的關(guān)系；從CNV的來(lái)源，以及數(shù)據(jù)庫(kù)等綜合信息判斷，解釋先證者CNV的類型。②再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)以及其子代的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估：根據(jù)CNV是否來(lái)自父母，或源于父母的染色體平衡易位，評(píng)估再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)根據(jù)CNV的類型，評(píng)估先證者子代的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。③疾病的自然進(jìn)程以及必要的預(yù)防性措施：對(duì)已報(bào)道的類似CNV攜帶者文獻(xiàn)進(jìn)行回顧，將此類患者的疾病進(jìn)程，可能出現(xiàn)的疾病風(fēng)險(xiǎn)，以及應(yīng)采取的預(yù)防措施告知監(jiān)護(hù)人。④產(chǎn)前診斷的方法：對(duì)已知的致病性CNV，告知可通過(guò)何種方法進(jìn)行產(chǎn)前診斷及不同方法的優(yōu)缺點(diǎn)。⑤先證者確診對(duì)家族中其他成員的影響，是否有必要對(duì)家族中其他成員進(jìn)行遺傳學(xué)檢測(cè)，為家族中可能的攜帶者進(jìn)行遺傳咨詢和必要的遺傳學(xué)檢測(cè)。

3.3 芯片的類型及選擇 選擇合適的芯片是檢測(cè)成功的先決條件。目前可供選擇的CMA芯片已有多個(gè)系列，主要由Agilent、Affymetrix、Illumina3家公司生產(chǎn)，安宇等[4]在他們的綜述中詳細(xì)總結(jié)介紹了這3家公司目前主流的染色體陣列檢測(cè)芯片。根據(jù)2016年7月我國(guó)專家的共識(shí)[11]，可參照以下標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合實(shí)際需求選擇合適的芯片：①芯片探針應(yīng)涵蓋復(fù)發(fā)性基因組病(recurrent genomic disorders)及常見(jiàn)微缺失/微重復(fù)綜合征區(qū)域，并覆蓋亞端粒區(qū)域。②全基因組的芯片(非靶向芯片)應(yīng)可以檢出>400 kb的CNV。③芯片探針應(yīng)包括能檢出已知印跡區(qū)域的純合區(qū)(absence of heterozygosity，AOH)，及能評(píng)估血緣關(guān)系水平的全基因組SNP探針。④分辨率并非越高越好，需結(jié)合臨床設(shè)計(jì)合適的芯片。⑤對(duì)已知致病性基因，在全基因組檢測(cè)中需要針對(duì)這些基因增加探針密度以提髙診斷的敏感性和準(zhǔn)確性。⑥針對(duì)重復(fù)序列，良性的拷貝數(shù)多態(tài)位點(diǎn)和(或)會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性重復(fù)或缺失導(dǎo)致不能真實(shí)反映樣本CNV的區(qū)域，可不設(shè)計(jì)芯片探針。

3.3 檢測(cè)結(jié)果分析及判讀 CMA檢測(cè)結(jié)果可以通過(guò)軟件相對(duì)容易得到，但對(duì)檢測(cè)結(jié)果的分析及判讀卻是CMA檢測(cè)的難點(diǎn)。對(duì)結(jié)果分析主要依靠CNV相關(guān)的數(shù)據(jù)庫(kù)。自2006年第一張人類基因組CNV圖譜的1447個(gè)CNV及2010年Yim等[13,14]新增2077個(gè)CNV以來(lái)，已有多個(gè)CNV相關(guān)數(shù)據(jù)建立，如國(guó)際公共良性CNVs數(shù)據(jù)庫(kù)( database of genomic variants，DGVs) 、國(guó)際公共病理性CNVs 數(shù)據(jù)庫(kù)( database of chromosomal imbalance and phenotype in humans using ensembl resources，DECIPHER) 、人類遺傳學(xué)細(xì)胞遺傳學(xué)微陣列委員會(huì)在線數(shù)據(jù)庫(kù)(international standard cytogenomic array consortium，ISCA) 、人類孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)(online mendelian inheritance in man，OMIM)為主要代表，且其中CNV的的量及相關(guān)信息隨著研究的發(fā)展仍在不斷增長(zhǎng)中。這些數(shù)據(jù)庫(kù)提供了大量的CNV與相關(guān)表型的關(guān)聯(lián)信息，CMA檢測(cè)的結(jié)果可以對(duì)照這些數(shù)據(jù)庫(kù)中信息進(jìn)行分析并做出進(jìn)一步的判讀。

對(duì)檢測(cè)出來(lái)的CNV通過(guò)以上數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索分析其來(lái)源、大小、所包含基因及其功能以及CNV數(shù)據(jù)庫(kù)中有關(guān)該畸變的信息并參考各個(gè)臨床檢測(cè)中心的病例報(bào)道、病例分析、病例對(duì)照分析等資料，按照美國(guó)ACMG的指南，CNVs可分為致病的(pathogenic)CNVs、可能致病的(possibly pathogenic)CNVs、未知意義的(variant unknown significance，VUS)CNVs、可能良性的(likely benign)CNVs和良性的(benign)CNVs。一般簡(jiǎn)單的將新生、罕見(jiàn)、相對(duì)較大、含有臨床相關(guān)基因及與已確定的綜合征有關(guān)的CNV劃分為病理性CNV，遺傳自健康雙親，或者普遍存在于正常人中未表現(xiàn)出病理學(xué)表型的CNV被定義為良性CNV，其余CNV被認(rèn)為為VUS，VUS約占CNV總量的3.4%[15]。VUS為結(jié)果的分析和判讀帶來(lái)了很大問(wèn)題，為目前CMA檢測(cè)分析的一大難點(diǎn)。

3.4 應(yīng)用實(shí)例 CMA技術(shù)自誕生以來(lái)，在遺傳性疾病及腫瘤研究等諸多領(lǐng)域廣泛應(yīng)用并取得豐碩成果，但在產(chǎn)前胎兒遺傳病檢測(cè)領(lǐng)域，尤其在國(guó)內(nèi)起步相對(duì)較晚。早期的報(bào)道病例相對(duì)分散且樣本量少，更多是對(duì)該技術(shù)的驗(yàn)證探索。2005年Rickman等[16]采用包含600個(gè)大片段插入克隆的靶向診斷微陣列以不同的分辨率利用盲法研究30份從羊膜腔穿刺術(shù)(AC)和絨毛膜穿刺術(shù)(CVS)提取的胎兒DNA樣本，絕大多數(shù)樣本都獲得了與傳統(tǒng)G顯帶核型分析一致的結(jié)果，不一致的微缺失不能為G顯帶技術(shù)識(shí)別。Trilochan等[17]用57例孕婦樣本對(duì)aCGH與常規(guī)的G顯帶技術(shù)做了核型分析對(duì)比，一致度達(dá)到98%。這兩例報(bào)道表明CMA技術(shù)可以適用于胎兒的遺傳病檢測(cè)。Ignatia等[18]則用aCGH對(duì)超過(guò)100份樣本僅用7天時(shí)間就完成檢測(cè)并給出報(bào)告，顯示了CMA的高效率。國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道文獻(xiàn)較少，常亮等[19]采用SNP array及染色體核型分析對(duì)2012年7月至2013年12月在北京大學(xué)第三醫(yī)院婦產(chǎn)科就診的產(chǎn)前診斷為高危孕婦141例進(jìn)行的對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)染色體核型分析異常率為6.4%，SNP array異常率為11.3%，兩種方法聯(lián)合檢測(cè)異常率12.1%，兩種檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)出的異常核型率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.039)，染色體核型分析結(jié)合SNParray技術(shù)能有效提高遺傳病的產(chǎn)前診斷檢出率。同年，吳曉麗等[20]采用染色體微陣列技術(shù)對(duì)88離染色體核型分析正常的先天性心臟病(CHD)胎兒進(jìn)行了遺傳病學(xué)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)14例(16%)胎兒CNV結(jié)果為致病性CNV，取得了良好的效果。Hillman等[21,22]對(duì)近年一些CMA在胎兒產(chǎn)前檢測(cè)文獻(xiàn)做了Meta分析，結(jié)果表明CMA在產(chǎn)前胎兒遺傳病檢測(cè)中具有比常規(guī)G顯帶技術(shù)更高的檢出率、更高的分辨率和更高的效率。

近年來(lái)，大樣本(大于1000例)多中心的研究為CMA技術(shù)應(yīng)用于臨床產(chǎn)前診斷提供了科學(xué)依據(jù)。Shaffer等[23,24]對(duì)2004～2011年收集的5003例產(chǎn)前診斷樣本(包括羊水、絨毛、臍血和流產(chǎn)組織)采用aCGH技術(shù)進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)含有臨床產(chǎn)前診斷意義的病理性CNVs檢出率為5.3%，其中71%的CNVs都小于10Mb，這些變異通常無(wú)法通過(guò)染色體核型分析檢測(cè)出來(lái)。而如果單純考慮aCGH檢測(cè)的結(jié)果，則有臨床意義的CNVs檢出率上升為6.5%，產(chǎn)前超聲異常的樣本檢出率則增加到7.6%，死胎的檢出率高達(dá)8.2%，相比之下高齡妊娠婦女的檢出率只有0.3%。在染色體核型正常但在產(chǎn)前超聲檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)存在單個(gè)器官異?；蚨鄠€(gè)器官異常的病例中，有臨床產(chǎn)前診斷意義的病理性CNVs檢測(cè)率分別為5.6%和9.5%[24]。Wapner等[15]在美國(guó)國(guó)家兒童健康和人類發(fā)育研究所(NICHD)資助下，采用前瞻性雙盲試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)來(lái)源于29個(gè)產(chǎn)前診斷中心的4406個(gè)(樣本來(lái)源為CVS和羊水穿刺)進(jìn)行了aCGH檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)染色體核型正常但含有結(jié)構(gòu)異常的樣本中，有臨床意義的CNVs檢出率為6%，僅核型正常的個(gè)體CNVs檢出率為2.5%，高齡妊娠婦女檢出率為1.7%，唐氏綜合征篩查陽(yáng)性的檢出率為1.6%。其他一些研究組也取得了類似的結(jié)果[25-28]。大樣本多中心的前瞻性研究表明CMA可以作為產(chǎn)前診斷標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的一部分應(yīng)用于臨床，對(duì)于侵入性產(chǎn)前診斷，特別是超聲提示胎兒結(jié)構(gòu)異常者，CMA的應(yīng)用可以明顯提高有臨床意義的微缺失和微重復(fù)檢測(cè)率。

4 CMA的在產(chǎn)前診斷應(yīng)用中的局限和展望

任何新技術(shù)都有其自身的局限性，CMA也不例外。CMA無(wú)法檢出平衡性染色體重排如平衡易位、到位和大多數(shù)的基因內(nèi)點(diǎn)突變及DNA甲基化異常[29]。不同檢測(cè)平臺(tái)間檢測(cè)同一樣本的結(jié)果存在一些差異[30,31]，檢測(cè)中常有一些臨床意義不明的VUS難以判讀和解釋，這種情況往往會(huì)導(dǎo)致孕婦及其家屬的焦慮，甚至是錯(cuò)誤的終止妊娠。另外CMA對(duì)技術(shù)要求較高，需要昂貴的熒光顯微鏡和影像分析系統(tǒng)，同時(shí)芯片造價(jià)也比較昂貴，導(dǎo)致最后整體檢測(cè)價(jià)格較高，使得該技術(shù)的廣泛應(yīng)用受到限制。

相信通過(guò)醫(yī)療機(jī)構(gòu)、科研機(jī)構(gòu)的權(quán)威專家共同制定適合我國(guó)國(guó)情的CMA產(chǎn)前指南和技術(shù)規(guī)范及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)各數(shù)據(jù)庫(kù)資源進(jìn)行整合與共享，指導(dǎo)CMA技術(shù)在臨床科學(xué)合理規(guī)范化使用，探索臨床意義不明確的VOUS，建立中國(guó)人自己的CAN專業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)CMA檢測(cè)結(jié)果的分析與檢測(cè)前后的臨床咨詢制定科學(xué)合理的診療方案。

盡管CMA有其自身的局限性，也面臨著諸多的挑戰(zhàn)，但目前大量的研究顯示CMA在產(chǎn)前診斷尤其超聲異常的胎兒遺傳學(xué)診斷中成為優(yōu)先推薦的方法。

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編輯：熊詩(shī)詣

10.13470/j.cnki.cjpd.2016.03.011

R714.53

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2016-07-21)