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        瑤藥暖骨風(fēng)薄層色譜檢測(cè)方法研究

        2016-01-20 03:00:58劉元,文志云,梁威
        藥學(xué)研究 2015年6期
        關(guān)鍵詞:瑤藥

        瑤藥暖骨風(fēng)薄層色譜檢測(cè)方法研究

        劉元1,2,文志云1,2,梁威1,2

        (1.廣西中醫(yī)藥研究院,廣西 南寧 530022;2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西 南寧 530022)

        摘要:目的建立瑤藥暖骨風(fēng)的薄層色譜鑒別。方法瑤藥暖骨風(fēng)經(jīng)甲醇提取后,以冰乙酸∶水(4∶6)為展開劑,對(duì)瑤藥暖骨風(fēng)進(jìn)行薄層鑒別。結(jié)果在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn),色譜清晰,無雜質(zhì)斑點(diǎn)干擾。結(jié)論本方法專屬性強(qiáng),可更好地控制藥材質(zhì)量。

        關(guān)鍵詞:瑤藥;暖骨風(fēng);薄層色譜鑒別

        基金項(xiàng)目:廣西科技攻關(guān)項(xiàng)目(No.桂科攻1346008-7);廣西衛(wèi)醫(yī)療衛(wèi)生適宜技術(shù)研究與開發(fā)課題(No.S201308-06);廣西瑤族習(xí)用藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)研究項(xiàng)目(No.MZY2012025)

        作者簡(jiǎn)介:劉元,女,主任藥師,研究方向:中藥藥理學(xué)研究與新藥開發(fā),E-mail:Liuyuan0821@vip.163.com

        中圖分類號(hào):R927.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

        Experimental research on TLC identification of Yao medicine Nuangufeng

        LIUYuan1,2,WENZhi-yun1,2,LIANGWei1,2

        (1.GuangxiKeyLaboratoryofTraditionalChineseMedicineQualityStandards,Nanning530022,China;

        2.GuangxiInstituteforChineseMedicine&PharmaceuticalScience,Nanning530022,China)

        Abstract:ObjectiveTo establish a TLC method for the identification of Nuangufeng.MethodsExtraction with methanol from Nuangufeng,glacial acetic acid-water (4∶6)as developing solvent and identified by TLC.ResultsWith the control medicinal chromatography corresponding in position on the same color spots,chromatography was clear,and had no interference.ConclusionThis method was specific,can preferably control the quality of medicinal materials.

        Key words:Yao medicine;Nuangufeng;TLC

        瑤藥暖骨風(fēng)系瑞香科瑞香屬植物毛瑞香[DaphnekiusianaMiq.var.atrocaulis(Rehd.)F.Maekawa]的全株,別名一身保暖,具有祛風(fēng)除濕、調(diào)經(jīng)止痛、解毒之功效,民間主要用于風(fēng)濕骨痛、手足麻木、月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、產(chǎn)后風(fēng)濕、跌打損傷、骨折、脫臼[1,2]。本品歷代本草未見記載,現(xiàn)時(shí)散見于我國(guó)一些中草藥專著和南方地區(qū)中草藥手冊(cè)或植物學(xué)專著中,如《廣西藥用植物名錄》、《貴州中草藥名錄》、《全國(guó)中草藥匯編》等。目前國(guó)內(nèi)對(duì)瑤藥暖骨風(fēng)的藥材標(biāo)準(zhǔn)研究基本空白,為了保護(hù)我區(qū)特色藥材資源,建立可控瑤藥暖骨風(fēng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),在瑤藥質(zhì)量評(píng)估、監(jiān)管等方面,為大眾用藥安全提供技術(shù)標(biāo)準(zhǔn),本試驗(yàn)建立了瑤藥暖骨風(fēng)的薄層色譜鑒別(TLC)方法。

        研究表明瑞香屬植物中發(fā)現(xiàn)的60多種物質(zhì)具有不同作用的生物活性。相關(guān)的藥理學(xué)和毒理學(xué)研究表明 ,這些活性物質(zhì)具有抗HIV、白血病、血栓形成和動(dòng)脈粥樣硬化、抑制銅綠假單孢菌、細(xì)菌和瘧原蟲感染等作用。說明這是一個(gè)具有開發(fā)前途的植物類群[3]。而根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[4,5],暖骨風(fēng)的全草中含有降香萜醇乙酸酯、β-谷甾醇、胡蘿卜苷、傘型花內(nèi)酯、7-甲氧基-8-羥基香豆素、西瑞香素、芹菜素、木犀草素、對(duì)羥基苯甲酸乙酯等。其中西瑞香素為雙香豆素類衍生物,在抗腫瘤、抗炎、抗真菌、抗病毒、抗焦慮等諸多方面均有顯著的藥理作用[6]。因此選擇西瑞香素作為毛瑞香質(zhì)量控制是比較可行的。

        1儀器與材料

        1.1儀器YOKO-ZS紫外分析攝影儀;武漢藥科YOKO-BD薄層電動(dòng)點(diǎn)樣儀;硅膠G薄層預(yù)制板;浙江臺(tái)州聚酰胺薄膜。

        1.2材料暖骨風(fēng)對(duì)照藥材(批號(hào):130206,產(chǎn)地:金秀,由本院中藥所黃云峰同志采集,植物臘葉標(biāo)本經(jīng)廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所鑒定);西瑞香素對(duì)照品(批號(hào):111758-201101);瑤藥暖骨風(fēng)樣品(批號(hào):080405、100812、120725、121220,由本課題組在金秀、平南采集)。

        2方法與結(jié)果

        2.1溶液的制備

        2.1.1供試品溶液取暖骨風(fēng)藥材粉末1 g,加甲醇20 mL,超聲處理30 min,濾過,濾液作為供試品溶液。

        2.1.2對(duì)照藥材溶液取暖骨風(fēng)對(duì)照藥材1 g,加甲醇20 mL,超聲處理30 min,濾過,濾液作為對(duì)照藥材溶液。

        2.1.3對(duì)照品溶液取西瑞香素對(duì)照品,加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。

        2.2薄層條件的優(yōu)化

        2.2.1薄層板的選擇及展開劑的考察和比較考察了不同的薄層板:硅膠G薄層板、聚酰胺薄膜,結(jié)果采用硅膠G薄層板可以把暖骨風(fēng)藥材中的西瑞香素進(jìn)行分離,而采用聚酰胺薄膜,不僅可以把暖骨風(fēng)藥材中的西瑞香進(jìn)行分離,而且還可以把暖骨風(fēng)藥材中的其他斑點(diǎn)進(jìn)行分離,從而可提高暖骨風(fēng)藥材定性鑒別的專屬性和可控性;不同的展開劑:三氯甲烷-甲醇(20∶1)、環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶20∶1)、冰醋酸-水(5∶5)、冰醋酸-水(4∶6),結(jié)果采用環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開系統(tǒng),僅顯現(xiàn)一排斑點(diǎn),采用三氯甲烷-甲醇、冰醋酸-水為展開系統(tǒng),顯現(xiàn)兩排斑點(diǎn),但是冰醋酸-水毒性較小,因此采用冰醋酸-水為展開系統(tǒng),考察不同比例,以4∶6較為合適。所以暖骨風(fēng)藥材的鑒別我們采用分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上,以冰醋酸-水(4∶6)為展開劑,展開,取出,晾干。

        圖1 暖骨風(fēng)TLC摸索1 1.暖骨風(fēng)(批號(hào):120725,金秀);2.暖骨風(fēng)(批號(hào):121220,金秀);3.暖骨風(fēng)(批號(hào):130206,金秀,對(duì)照藥材);4.西瑞香素對(duì)照品(批號(hào):111758-201101) 色譜條件:①硅膠G薄層預(yù)制板(青島海洋化工廠,規(guī)格:10 cm×10 cm);②圓點(diǎn)狀點(diǎn)樣,點(diǎn)樣量:2 μL;③溫度:27 ℃;相對(duì)濕度:75%;④展開劑:三氯甲烷-甲醇(20∶1);⑤ 定位:在紫外燈(365 nm)下檢視

        圖2 暖骨風(fēng)TLC摸索2 1.暖骨風(fēng)(批號(hào):120725,金秀);2.暖骨風(fēng)(批號(hào):121220,金秀);3.暖骨風(fēng)(批號(hào):130206,金秀,對(duì)照藥材);4.西瑞香素對(duì)照品(批號(hào):111758-201101) 色譜條件:① 硅膠G薄層預(yù)制板(青島海洋化工廠,規(guī)格:10 cm×10 cm);② 圓點(diǎn)狀點(diǎn)樣,點(diǎn)樣量:2 μL;③ 溫度:27 ℃;相對(duì)濕度:75%; ④ 展開劑:環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶20∶1);⑤ 定位:在紫外燈(365 nm)下檢視

        圖3 暖骨風(fēng)TLC摸索3 1.暖骨風(fēng)(批號(hào):120725,金秀);2.暖骨風(fēng)(批號(hào):121220,金秀);3.暖骨風(fēng)(批號(hào):130206,金秀,對(duì)照藥材);4.西瑞香素對(duì)照品(批號(hào):111758-201101) 色譜條件:①聚酰胺薄層板(浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠,規(guī)格:10 cm×10 cm);②圓點(diǎn)狀點(diǎn)樣,點(diǎn)樣量:2 μL;③溫度:27 ℃;相對(duì)濕度:75%;④展開劑:冰醋酸-水(5∶5);⑤定位:在紫外燈(365 nm)下檢視

        圖4 暖骨風(fēng)TLC摸索4 1.暖骨風(fēng)(批號(hào):120725,金秀);2.暖骨風(fēng)(批號(hào):121220,金秀);3.暖骨風(fēng)(批號(hào):130206,金秀,對(duì)照藥材);4.西瑞香素對(duì)照品(批號(hào):111758-201101) 色譜條件:①聚酰胺薄層板(浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠,規(guī)格:10 cm×10 cm);②圓點(diǎn)狀點(diǎn)樣,點(diǎn)樣量:2 μL;③溫度:27 ℃;相對(duì)濕度:75%;④展開劑:冰醋酸-水(4∶6);⑤定位:在紫外燈(365 nm)下檢視

        2.2.2點(diǎn)樣量的比較供試品溶液及對(duì)照藥材溶液在點(diǎn)樣量為1 μL時(shí),斑點(diǎn)有時(shí)不清晰,超過3 μL時(shí),斑點(diǎn)拖尾,分離效果差,1~3 μL斑點(diǎn)均清晰,分離較好;西瑞香素溶液的點(diǎn)樣量1 μL,結(jié)果分離效果明顯,斑點(diǎn)清晰。故確定供試品溶液及對(duì)照藥材溶液在點(diǎn)樣量為1~3 μL,西瑞香素溶液的點(diǎn)樣量為1 μL。

        2.2.3檢視條件的選擇在日光條件下檢視:供試品溶液、對(duì)照藥材溶液及對(duì)照品溶液均無展開斑點(diǎn),噴以2%三氯化鋁甲醇溶液,只顯示一排與西瑞香素相對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn);在紫外條件下,254 nm處也均無展開斑點(diǎn),365 nm處供試品溶液與對(duì)照藥材溶液、西瑞香素對(duì)照品溶液對(duì)應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn),且斑點(diǎn)清晰,故選擇紫外光源365 nm處作為檢視條件。

        2.2.4層析條件的驗(yàn)證薄層板:聚酰胺薄膜;點(diǎn)樣:點(diǎn)狀點(diǎn)樣,供試品溶液及對(duì)照藥材溶液點(diǎn)樣量為1~3 μL,西瑞香素溶液的點(diǎn)樣量為1 μL;展開劑:冰醋酸-水(4∶6)為展開劑。上行展開8 cm。檢視光源:紫外光365 nm。結(jié)果如圖l。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和西瑞香素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)(Rf值分別為0.38、0.72)。

        圖5 暖骨風(fēng)TLC鑒別 1.暖骨風(fēng)(批號(hào):080405,金秀);2.暖骨風(fēng)(批號(hào):090311,金秀);3.暖骨風(fēng)(批號(hào):100812,平南);4.暖骨風(fēng)(批號(hào):120725,金秀);5.暖骨風(fēng)(批號(hào):121220,金秀);6.暖骨風(fēng)(批號(hào):130206,金秀,對(duì)照藥材);7.西瑞香素對(duì)照品(批號(hào):111758-201101)

        2.2.5系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)取供試品溶液及對(duì)照藥材溶液1~3 μL,西瑞香素溶液1 μL,點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上,以冰醋酸-水(4:6)為展開劑,放置于不同溫度(10、25、35 ℃)、濕度(30%、70%、90%)展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果展開溫度為10、25、35 ℃時(shí),供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和西瑞香素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);展開濕度為30%、70%、90%時(shí)展開結(jié)果亦同。表明不同溫度、濕度展開條件對(duì)本試驗(yàn)建立的方法無明顯影響。

        3討論

        瑞香屬部分種類的俗名多,異種同名,同種異名現(xiàn)象嚴(yán)重,這阻礙了瑞香屬植物的種質(zhì)資源研究和開發(fā)利用。據(jù)戴斌及羅金裕的報(bào)道[7~9],本品瑤藥俗稱“暖骨風(fēng)”,來源為瑞香科瑞香屬植物毛瑞香,其拉丁名為DaphneodoraThunb.var.atrocaulisRehd.,方鼎老師認(rèn)為其拉丁名為一個(gè)異名(不正確的名稱),應(yīng)按《中國(guó)植物志》52卷第1分冊(cè)380頁(yè)修訂毛瑞香拉丁名為DaphnekiusianaMiq.var.atrocaulis(Rehd.)F.Maekawa[10]。因此本試驗(yàn)人員首次對(duì)俗稱 “暖骨風(fēng)”的藥材為毛瑞香(瑞香科瑞香屬植物毛瑞香DaphneodoraThunb.var.atrocaulisRehd.)藥材拉丁學(xué)名提出修訂,應(yīng)為Daphnekiusianavar.atrocaulis(Rehd.)F.Maekawa.,確保了用藥安全有效。

        本試驗(yàn)建立的瑤藥暖骨風(fēng)薄層色譜檢測(cè)方法,在與西瑞香素對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)(Rf值分別為0.38、0.72),而且經(jīng)過系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn),不同溫度、濕度展開條件對(duì)本試驗(yàn)建立的方法無明顯影響。本方法專屬性強(qiáng),可更好地控制藥材質(zhì)量。

        參考文獻(xiàn):

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        [4] 賈靚,閔知大.毛瑞香化學(xué)成分的研究[J].中草藥,2005,36(9):35-36.

        [5] 張薇,張衛(wèi)東,李廷釗,等.毛瑞香化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中藥雜志,2005,30(7):513-515.

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        [8] 覃迅云,羅金裕,高志剛.中國(guó)瑤藥學(xué)[M].北京:民族出版社,2002:154-155.

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        [10] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志(第47卷第1分冊(cè))[M].北京:科學(xué)出版社,1985:91.

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