王木蘭，許　溪，龔　琴，黃何松，陳蘭英,，羅穎穎，楊世林，李　俊,*

(1.中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心，南昌　330006；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，南昌　330004)

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藏藥十五味乳鵬丸抗痛風(fēng)藥效學(xué)研究

王木蘭1，許溪1，龔琴1，黃何松2，陳蘭英1,2，羅穎穎2，楊世林2，李俊1,2*

(1.中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心，南昌330006；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，南昌330004)

摘要：目的研究藏藥十五味乳鵬丸抗痛風(fēng)作用。方法采用氧嗪酸鉀致小鼠高尿酸血癥實(shí)驗(yàn)觀察十五味乳鵬丸的降尿酸作用；采用醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加、二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)觀察十五味乳鵬丸的抗炎作用；采用醋酸致小鼠扭體反應(yīng)觀察十五味乳鵬丸的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果藏藥十五味乳鵬丸能顯著性降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸(P<0.05)明顯抑制醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加及二甲苯致小鼠耳腫脹，并能明顯減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。結(jié)論藏藥十五味乳鵬丸具有明顯的抗痛風(fēng)作用。

關(guān)鍵詞：藏藥十五味乳鵬丸；高尿酸血癥；痛風(fēng)；抗炎；鎮(zhèn)痛

藏藥十五味乳鵬丸由決明子、乳香、訶子、寬筋藤、鐵棒錘、渣馴膏、藏菖蒲等十五味藏藥材組成，藏醫(yī)主要用于治療關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、關(guān)節(jié)腔積水等證[1]。藏藥十五味乳鵬丸用藥歷史悠久，療效確切，在《四部醫(yī)典》、《藏醫(yī)札記》中早有記載，現(xiàn)代臨床主要用于治療痛風(fēng)，療效顯著。查閱相關(guān)研究文獻(xiàn)，大多集中在臨床療效觀察[2-3]，實(shí)驗(yàn)研究資料缺乏，本實(shí)驗(yàn)對(duì)十五味乳鵬丸抗痛風(fēng)藥效作用研究，為其臨床應(yīng)用和推廣提供科學(xué)依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器UV-1800型紫外分光光度計(jì)，北京瑞利分析儀器公司生產(chǎn)。

1.2試藥十五味乳鵬丸，由甘肅省中藥現(xiàn)代制藥工程研究院有限公司提供，批號(hào)20140513；別嘌醇，上海信宜萬(wàn)象藥業(yè)，批號(hào)111102；復(fù)方乙酰水楊酸，遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國(guó))有限公司，批號(hào)131006；吲哚美辛腸溶片，山西云鵬制藥有限公司，批號(hào)A130803；所有受試藥物臨用前用Millipore純水配成所需濃度。氧嗪酸鉀，Sigma公司，批號(hào)STBC1486V，用5 g·L-1的羧甲基纖維素鈉配制；伊文思藍(lán)，Sigma公司，E2129-10G，批號(hào)00801KHV，生理鹽水配制；二甲苯，分析純，批號(hào)20131202，天津市福晨化學(xué)試劑廠；冰醋酸，分析純，批號(hào)20140609，廣東光華科技股份有限公司，生理鹽水配制；尿酸試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào)20140528。

1.3動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，16～18 g，購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)：SCXK(滬)2012-0002，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，用于實(shí)驗(yàn)。

2方法

2.1對(duì)氧嗪酸鉀致高尿酸血癥小鼠的影響40只雄性KM小鼠，隨機(jī)分為4組：正常組、模型組、別嘌醇組(15 mg·kg-1)和十五味乳鵬丸組(400 mg·kg-1)，每組10只，正常組和模型組灌胃生理鹽水，給藥組灌胃相應(yīng)的藥液，20 mL·kg-1，每天給藥1次，連續(xù)5 d。末次給藥前1 h，除正常組外，其余各組動(dòng)物腹腔注射450 mg·kg-1氧嗪酸鉀建立高尿酸血癥模型[4]，正常組注射等體積的5 g·L-1羧甲基纖維素鈉，給藥后1 h，小鼠眼眶靜脈取血0.5 mL，室溫放置1 h，以3 500 r·min-1離心，取血清，按照尿酸試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清尿酸(SUA)水平。

2.2對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響30只雄性KM小鼠隨機(jī)分為模型組、復(fù)方乙酰水楊酸組(405 mg·kg-1)和十五味乳鵬丸組(400 mg·kg-1)，共3組，每組10只，模型組灌胃等體積的生理鹽水，給藥組灌胃相應(yīng)的藥液，20 mL·kg-1，每天給藥1次，連續(xù)5 d。末次給藥前禁食16 h，給藥1 h后，每只小鼠尾靜脈注射5 g·L-1伊文思藍(lán)10 mL·kg-1量，隨即腹腔注射0.2 mL體積分?jǐn)?shù)為0.6%的冰醋酸溶液，20 min后立即處死小鼠，用6 mL生理鹽水分2次清洗腹腔，收集洗液，置于紫外分光光度計(jì)590 nm處測(cè)量洗液的A值[5]。

2.3對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的影響30只雄性KM小鼠隨機(jī)分為模型組，吲哚美辛組(20 mg·kg-1)和十五味乳鵬丸組(400 mg·kg-1)，共3組，每組10只，各組灌胃相應(yīng)的藥液，20 mL·kg-1，模型組灌胃等體積的生理鹽水，十五味乳鵬丸每天給藥1次，連續(xù)給藥5 d，陽(yáng)性藥僅在最后1 d給藥1次。最后一次給藥前禁食16 h，給藥后1 h，將二甲苯涂于小鼠右耳前后兩面，50 μL·只-1；1 h后將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用6 mm打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱質(zhì)量，計(jì)算腫脹度[5-6](以兩耳質(zhì)量之差為腫脹度指標(biāo))。

2.4對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響30只雄性KM小鼠隨機(jī)分為模型組、復(fù)方乙酰水楊酸組(405 mg·kg-1)和十五味乳鵬丸組(400 mg· kg-1)，共3組，每組10只，各組灌胃相應(yīng)的藥液，20 mL·kg-1，模型組灌胃等體積的生理鹽水，十五味乳鵬丸每天給藥1次，連續(xù)給藥5 d，陽(yáng)性藥僅在最后1 d給藥1次。末次給藥前動(dòng)物禁食16 h，給藥后1 h，腹腔注射體積分?jǐn)?shù)為0.6%醋酸，0.2 mL·只-1，記錄動(dòng)物造模后20 min內(nèi)扭體次數(shù)[5，7]。

3結(jié)果

3.1對(duì)氧嗪酸鉀致高尿酸血癥小鼠的影響十五味乳鵬丸400 mg·kg-1可顯著性降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1十五味乳鵬丸對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸的影響

Tab.1 Effects of Shiwuweirupeng Pills on the serum uric acid levels in the hyperuricemic mice

組別劑量/mg·kg-1UA/μmol·L-1正常組-126.43±26.37**模型-225.69±73.09十五味乳鵬丸400153.11±34.79*別嘌醇15155.74±54.80*

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。

3.2對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加的影響十五味乳鵬丸800 mg·kg-1可明顯抑制醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高(P<0.05)，提示十五味乳鵬丸有抑制炎癥早期毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)的作用，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2十五味乳鵬丸對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響

Tab.2 Effects of Shiwuweirupeng Pills on acetic acid-induced the permeability of abdominal capillary in mice

組別劑量/mg·kg-1A模型組-0.27±0.09十五味乳鵬丸8000.13±0.05*4000.27±0.16復(fù)方乙酰水楊酸4050.14±0.08*

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。

3.3對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響十五味乳鵬丸400 mg·kg-1對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹有明顯的抑制作用(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)表3。

3.4對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響十五味乳鵬丸400 mg·kg-1能明顯減少醋酸刺激引起的扭體次數(shù)(P<0.05)，提示十五味乳鵬丸對(duì)外周化學(xué)性刺激引起的疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用，結(jié)果見(jiàn)表4。

表3十五味乳鵬丸對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的影響

Tab.3 Effects of Shiwuweirupeng Pills on dimethylbenzene-induced swelling of ear in mice

±s，n=10)

組別劑量/mg·kg-1腫脹度/mg模型組-7.11±1.53十五味乳鵬丸4005.44±1.61*吲哚美辛205.10±1.14**

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。

表4十五味乳鵬丸對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

Tab.4 Effects of Shiwuweirupeng Pills on acetic acid-induced writhing in mice

±s，n=10)

組別劑量/mg·kg-1扭體次數(shù)/次模型組-17.2±10.8十五味乳鵬丸4006.2±5.3*復(fù)方乙酰水楊酸4054.1±4.4**

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

4討論

十五味乳鵬丸作為藏醫(yī)治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的重要成藥，其臨床療效確切。尕藏久美等[3]觀察藏藥賽志當(dāng)尼丸、十五味乳香散、風(fēng)濕止痛散聯(lián)合藏醫(yī)外治法治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的療效及免疫調(diào)節(jié)作用，結(jié)果治療組采用藏醫(yī)組方，總有效率為 90.62%；高嘉彬等[2]觀察藏藥十五味乳鵬丸治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的療效及免疫調(diào)節(jié)作用，結(jié)果94.9%的受試者治療后綜合療效為有效。另有研究結(jié)果顯示，十五味乳鵬丸對(duì)混合致炎劑引起小鼠的耳廓腫脹、肉芽組織增生有明顯的抑制作用[8]；寇毅英等[9]報(bào)道十五味乳鵬丸可延長(zhǎng)小鼠熱痛反應(yīng)閾值、減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)、對(duì)醋酸所致的小鼠毛細(xì)血管通透性增加及蛋清所致大鼠足趾腫脹有明顯的抑制作用。

以上研究資料表明，十五味乳鵬丸具有一定的鎮(zhèn)痛、抗炎作用，為其抗痛風(fēng)藥理作用奠定了研究基礎(chǔ)，但痛風(fēng)是一種由于嘌呤代謝紊亂、尿酸生成過(guò)多和(或)尿酸排泄減少引起的代謝性疾病，其臨床特點(diǎn)表現(xiàn)為高尿酸血癥、急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石沉積、特征性慢性關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)畸形，常累及腎引起慢性間質(zhì)性腎炎和腎尿酸結(jié)石形成。痛風(fēng)最重要的生化基礎(chǔ)是高尿酸血癥，本文在采用醋酸致小鼠扭體反應(yīng)、醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加及二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)觀察十五味乳鵬丸鎮(zhèn)痛、抗炎作用的基礎(chǔ)上，還采用了尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀致小鼠高尿酸血癥模型，觀察十五味乳鵬丸對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，十五味乳鵬丸可明顯減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)、抑制醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加及抑制二甲苯致小鼠耳腫脹，表現(xiàn)出明顯的鎮(zhèn)痛、抗炎作用，與文獻(xiàn)報(bào)道一致；對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸有明顯的降低作用，提示十五味乳鵬丸可從根本上防治痛風(fēng)，在降低血清尿酸的同時(shí)可緩解痛風(fēng)發(fā)作時(shí)的疼痛和炎癥反應(yīng)。

本研究結(jié)合痛風(fēng)的特點(diǎn)，通過(guò)十五味乳鵬丸抗高尿酸血癥、抗炎及鎮(zhèn)痛作用進(jìn)一步闡明了十五味乳鵬丸的抗痛風(fēng)藥理作用，為其臨床應(yīng)用和推廣提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但其抗痛風(fēng)機(jī)制和物質(zhì)基礎(chǔ)還有待進(jìn)一步研究。

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Study on the anti-gout effects of Tibetan medicine Shiwuweirupeng Pills

WANG Mulan1，XU Xi1，GONG Qin1，HUANG Hesong2, CHEN Lanying1,2，LUO Yingying2, YANG Shilin2，LI Jun1,2*(1.National Pharmaceutical Engineering Center for Solid Preparation in Chinese Herbal Medicine，Nanchang 330006，China；2.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China)

Abstract:Objective To study the anti-gout effects of the Tibetan medicine Shiwuweirupeng Pills. Methods The hypouricemic effect of Shiwuweirupeng Pills was investigated in oxonate-induced hyperuricemia mice. The serum urate levels were determined using the phosphotungstic acid method. The anti-inflammatory effect of Shiwuweirupeng Pills was evaluated by the permeability of abdominal capillary by injecting glacial acetic acid and the swelling of ear induced by dimethylbenzene in mice. The antinociceptive effect of Shiwuweirupeng Pills was tested in male mice using the acetic acid-induced writhing test. Results Tibetan medicine Shiwuweirupeng Pills significantly reduced the serum urate levels in hyperuricemia mice(P<0.05)，the capillary permeability by injecting glacial acetic acid，the swelling of ear induced by dimethylbenzene in mice and the number of stretches in acetic acid-induced writhing test. Conclusion Tibetan medicine Shiwuweirupeng Pills have significant anti-gout effects.

Key words:Tibetan medicine Shiwuweirupeng Pills；hyperuricemia；gout；anti-inflammatory；analgesia

收稿日期：(2015-05-06)

通信作者：*李俊，男，博士，副教授

作者簡(jiǎn)介：王木蘭，女，研究實(shí)習(xí)員，碩士研究生

中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：

文章編號(hào)：1004-2407(2016)01-0067-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.021