郭春陽(yáng) 林少珍 鞏建華 邱成功 趙 淳 徐善良①

(1. 寧波大學(xué)海洋學(xué)院 寧波 315211; 2. 浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所 溫州 325000)

魚(yú)類胚胎和仔魚(yú)的質(zhì)量與卵子的生化組成密切相關(guān), 在魚(yú)類胚胎發(fā)育和仔魚(yú)發(fā)育早期階段, 營(yíng)養(yǎng)來(lái)源于魚(yú)類卵黃所儲(chǔ)存的內(nèi)源性物質(zhì)(常青, 2006)。早期仔魚(yú)從內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)橥庠葱誀I(yíng)養(yǎng)后, 造成早期仔魚(yú)大量死亡主要因?yàn)樗鶖z取餌料營(yíng)養(yǎng)不能滿足仔魚(yú)發(fā)育需求; 另有研究表明, 海水魚(yú)類仔魚(yú)發(fā)育中的代謝強(qiáng)度與仔魚(yú)開(kāi)口時(shí)營(yíng)養(yǎng)需要量密切相關(guān)(馮隆峰, 2012)。因此, 對(duì)魚(yú)類胚胎期及仔魚(yú)開(kāi)口攝食前后營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的供給模型研究, 有助于了解開(kāi)口仔魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)需要量(王金燕, 2011)。

褐菖 鲉 (Sebastiscus marmoratus)又稱石狗公,在我國(guó)產(chǎn)于南海、東海、黃海、渤海, 分布于北太平洋西部沿岸。為卵胎生, 因其肉質(zhì)細(xì)嫩、放流回捕率高, 是海洋牧場(chǎng)、垂釣漁業(yè)的最佳品種之一(吳瑩瑩等, 2006)。 目前國(guó)內(nèi)外對(duì)褐菖 鲉 已開(kāi)展了較為廣泛的研究(Nakanishi, 1986; 石戈等,2007; Konishi et al, 2009; 邱成功等, 2014), 但對(duì)褐菖 鲉 受精卵、前仔魚(yú)、后仔魚(yú)各個(gè)階段的氨基酸和脂肪酸變化尚未見(jiàn)研究報(bào)道。本文分析胚胎發(fā)育期以及仔魚(yú)期褐菖 鲉 的氨基酸、脂肪酸組成變化和含量變化, 旨 在明確褐菖 鲉 在母體內(nèi)胚胎發(fā)育及開(kāi)口仔魚(yú)、后仔魚(yú)期對(duì)氨基酸和脂肪酸營(yíng)養(yǎng)的需求模式, 為 今后褐菖 鲉 人工培苗中提高育成率提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)所用材料取自浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所洞頭基地。按受精卵、初產(chǎn)仔魚(yú)、前仔魚(yú)和后仔魚(yú)4個(gè)不同發(fā)育階段分別采樣。受精卵樣品采用解剖已受精的鲉褐菖雌魚(yú)而獲得; 初產(chǎn)仔魚(yú)為剛產(chǎn)出6h內(nèi)的仔魚(yú); 產(chǎn)出后24h仔魚(yú)開(kāi)口攝食, 前期仔魚(yú)取開(kāi)口后72h的仔魚(yú); 5d后進(jìn)入后仔魚(yú)期, 取開(kāi)口后10d的仔魚(yú)作為后仔魚(yú)期樣品。各期樣品分別取 10—20g, 前仔魚(yú)與后仔魚(yú)取樣前需饑餓 12h, 所有樣品取樣后立即用蒸餾水沖洗, 濾紙吸去水分, 放入液氮中冷凍,–80℃下保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 總氨基酸的測(cè)定 樣品用6 mol/L鹽酸110℃封管水解24h , 然后用超純水定容, 取2mL減壓蒸干并在干燥之后加0.02 mol/L的鹽酸溶液2mL, 將全部氨基酸溶解, 用日立 835-50型氨基酸自動(dòng)分析儀進(jìn)行測(cè)試。

1.2.2 游離氨基酸的測(cè)定 準(zhǔn)確稱取樣品 1.0g,加入 5%三氯乙酸 15mL, 定容至 25mL, 在振蕩器上充分混合, 沉淀結(jié)合態(tài)蛋白質(zhì), 然后 10000 r/min 離心10min, 用日立835-50型氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定樣品中游離氨基酸。

1.2.3 脂肪酸的測(cè)定 稱取經(jīng)冷凍干燥后的樣品0.1—0.2g, 根據(jù) Bligh-Dyer法(Bligh et al, 1959), 將樣品經(jīng)過(guò)超聲提取2min后并進(jìn)行漩渦振蕩5min, 在3000r/min下離心6—8min, 最后進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā), 直至恒重。用 Metcalfe的 BF3催化法制取脂肪酸甲脂(Metcalfe et al, 1996), 首先將以上所得脂質(zhì)用KOH-甲醇于60℃皂化2h, 之后加正己烷1min, 用QP2010氣相色譜-質(zhì)譜儀測(cè)定分析上清液。脂肪酸的百分含量用面積歸一法求出(汪正范, 2000)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析方法

所測(cè)數(shù)據(jù)采用“SPSS version 19.0”軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA); 統(tǒng)計(jì)間若有顯著差異,再用Duncan法進(jìn)行多重比較, P＜0.05表示差異顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 氨基酸組成及變化

2.1.1 總氨基酸組成 測(cè)得受精卵、初產(chǎn)仔魚(yú)和前、后期仔魚(yú)的氨基酸含量列于表 1, 包括必需氨基酸和非必需氨基酸各 9種。從總必需氨基酸含量看,以受精卵最高為 302.82mg/g, 至初產(chǎn)仔魚(yú)呈顯著下降(P＜0.05), 前期仔魚(yú)又顯著上升(P＜0.05), 至后期仔魚(yú)時(shí)再次呈顯著下降(P＜0.05); 其中甲硫氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸和亮氨酸含量的變化趨勢(shì)與總必需氨基酸變化趨勢(shì)完全一致; 而賴氨酸則以初產(chǎn)仔魚(yú)階段最高, 比受精卵顯著增加了3倍(P＜0.05), 至前、后期仔魚(yú)呈顯著下跌(P＜0.05); 纈氨酸、蘇氨酸和精氨酸的含量, 受精卵顯著高于各期仔魚(yú), 但仔魚(yú)期含量基本保持穩(wěn)定。

在非必需氨基酸中, 總非必需氨基酸在受精卵含量為 135.43mg/g, 至初產(chǎn)仔魚(yú)顯著下降(P＜0.05),仔魚(yú)開(kāi)口攝食后的前期仔魚(yú)又顯著回升至 136.73mg/g(P＜0.05), 后仔魚(yú)期再次顯著下降(P＜0.05)。丙氨酸、酪氨酸的含量以受精卵最高, 是仔魚(yú)的2倍左右, 仔魚(yú)階段無(wú)顯著變化。而羥基脯氨酸、天門(mén)冬氨酸的含量變化則相反, 受精卵中不含羥基脯氨酸, 天門(mén)冬氨酸含量最低, 仔魚(yú)顯著上升(P＜0.05), 是受精卵含量的1.5倍; 脯氨酸和絲氨酸的含量從受精卵至前期仔魚(yú)呈先顯著下降再上升的趨勢(shì)(P＜0.05), 甘氨酸和半胱氨酸則表現(xiàn)從受精卵至后期仔魚(yú)呈先顯著上升再下降的趨勢(shì)(P＜0.05)。 只有谷氨酸的含量在褐菖 鲉 早期發(fā)育各階段中無(wú)顯著變化(P＞0.05)。

2.1.2 游離氨基酸組成 從受精卵到后期仔魚(yú)各階段游離氨基酸的含量列于表2?？梢钥闯? 游離氨基酸含量在各發(fā)育階段的變化急劇程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于總氨基酸含量, 受精卵的游離氨基酸含量為6.31mg/g,初產(chǎn)仔魚(yú)驟升了10倍, 至前仔魚(yú)期又下降42%, 后仔魚(yú)期再次上升至54.85mg/g。在必需游離氨基酸中, 所有必需游離氨基酸從受精卵到初產(chǎn)仔魚(yú)階段均呈顯著升高(P＜0.05), 而從初產(chǎn)仔魚(yú)到前期仔魚(yú)階段有顯著下降的趨勢(shì)(P＜0.05), 前期仔魚(yú)至后期仔魚(yú)階段中除纈氨酸含量又呈顯著遞增(P＜0.05)。從受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú)階段中必需游離氨基酸的含量除纈氨酸外顯著升高(P＜0.05), 纈氨酸從初產(chǎn)仔魚(yú)至后期仔魚(yú)階段卻顯著下降(P＜0.05)。在非必需游離氨基酸中, 所有游離氨基酸的含量從受精卵到初產(chǎn)仔魚(yú)均顯著升高(P＜0.05); 除天門(mén)冬氨酸從初產(chǎn)仔魚(yú)至后期仔魚(yú)階段始終無(wú)顯著變化(P＞0.05), 其它氨基酸的含量從初產(chǎn)仔魚(yú)至前期仔魚(yú)階段都呈顯著降低(P＜0.05), 前期仔魚(yú)至后期仔魚(yú)階段, 谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸的含量也無(wú)明顯變化, 其余氨基酸的含量再次呈升高趨勢(shì)(P＜0.05)。表2中還可見(jiàn), 褐菖鲉游離氨基酸/總氨基酸的比值范圍為1.4%—20.0%。

表1 總氨基酸含量的變化(mg/g干重)Tab.1 Changes in total amino acid content (mg/g DW)

表2 游離氨基酸含量及與總氨基酸的比值(mg/g干重)Tab.2 Changes in total free amino acid content (mg/g DW)

2.2 鲉褐菖早期發(fā)育各階段主要脂肪酸組成特點(diǎn)

表3 為 褐菖 鲉 各階段總脂的含量, 從 褐菖 鲉 受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú), 總脂的絕對(duì)含量由受精卵的332.52mg/g急劇跌至114.81mg/g, 這可能是因?yàn)橹咀鳛槠淠芰康闹饕獊?lái)源; 從初產(chǎn)仔魚(yú)至前期仔魚(yú)階段因攝食輪蟲(chóng)總脂的含量迅速升至274.24mg/g, 至攝食輪蟲(chóng)與豐年蟲(chóng)的后期仔魚(yú)階段升至366.85mg/g。

表3 褐菖鲉各階段總脂的含量(mg/g干重)Tab.3 S. marmoratus’s total lipid content in different developmental stages (mg/g DW)

表4 為 褐菖 鲉 各階段脂肪酸的百分比組成, 其中共檢測(cè)出脂肪酸26種, 這些脂肪酸的起始碳鏈長(zhǎng)度在14碳至24碳之間。在這些脂肪酸中, 飽和脂肪酸(SFA)有14種, 單不飽和脂肪酸(MUFA)和多不飽和脂肪酸(PUFA)均各有6種。前期仔魚(yú)的∑SFA最高, 為33.86%(P＜0.05), SFA中百分含量居前兩位的是C16:0(軟脂酸)和C18:0(硬脂酸), C16:0在受精卵含量最高, 為20.67%, 隨著仔魚(yú)發(fā)育百分含量不斷下降,至后期仔魚(yú)顯著下降為13.39%(P＜0.05); C18:0則不同,受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú)階段顯著下降, 但開(kāi)口后又顯著上升為受精卵含量的2倍; ∑MUFA表現(xiàn)為從受精卵至前仔魚(yú)期顯著降低, 后期仔魚(yú)又顯著升高(P＜0.05),其中以C18:1 n-9 (油酸)含量最高, 受精卵為12.4%,初產(chǎn)仔魚(yú)下降至11.4%, 前仔魚(yú)期開(kāi)始迅速上升, 后期仔魚(yú)含量是受精卵的1.5倍。∑PUFA比例占33.27%—51.27%, 在前三個(gè)階段占絕對(duì)優(yōu)勢(shì), 但后期仔魚(yú)階段∑SFA、∑MUFA和∑PUFA各占1/3。PUFA中DHA高達(dá)15.57%—37.31%, 其次是EPA保持在8.19%—9.58%, 第三位的是ARA(花生四烯酸), 占3.75%—6.27%。

表4 褐菖鲉各階段脂肪酸的組成百分比(%)Tab.4 Fatty acid composition of S. marmoratus in different stages (%)

由總脂含量計(jì)算得到幾種重要脂肪酸的實(shí)際含量見(jiàn)表5。由表5可知, 在 褐菖 鲉 發(fā)育早期的各個(gè)階段, 這 17種重要的脂肪酸中 DHA的實(shí)際含量最高,在受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú)不斷下降, 而到了開(kāi)口攝食階段后立即呈顯著回升趨勢(shì)(P＜0.05), 多數(shù)脂肪酸升至峰值, 這與其它 10種脂肪酸變化規(guī)律完全相同。也有 C18:3n-6、C20:1n-9、C20:5n-3、C22:0、C22:1n-9和 C24:1n-9等 6種重要的脂肪酸從受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú)階段均無(wú)明顯變化, 但開(kāi)口攝食后立即出現(xiàn)顯著上升(P＜0.05), 且多數(shù)升至峰值。C16:1n-7從受精卵至前期仔魚(yú)階段均無(wú)明顯變化, 但從后期仔魚(yú)開(kāi)始顯著上升(P＜0.05)。

褐菖 鲉 受精卵中的脂肪酸以PUFA和SFA為主,分別為150.23 mg/g和105.40 mg/g, MUFA稍低, 為75.85 mg/g。就單個(gè)脂肪酸而言, 以DHA、C16:0兩者含量最高, 分別為104.88 mg/g和68.74 mg/g;C18:1n-9和EPA次之, 分別為41.23 mg/g和27.23 mg/g;初產(chǎn)仔魚(yú)尚未開(kāi)口攝食, 此時(shí)脂肪酸的實(shí)際含量急劇顯著下降(P＜0.05), ∑SFA、∑MUFA和∑PUFA分別跌至36.02、19.55和58.86 mg/g, 主要表現(xiàn)為DHA、C16:0、C18:1n-9、EPA、C18:0和C16:1n-7顯著下降(P＜0.05); 因?yàn)殚_(kāi)始攝食輪蟲(chóng), 前期仔魚(yú)脂肪酸的含量出現(xiàn)顯著回升(P＜0.05), ∑SFA、∑MUFA和∑PUFA分別比初產(chǎn)仔魚(yú)升高1.6倍、1.9倍和1.1倍, 其中C16:0、C18:0分別升高1.2倍和5.6倍, 同時(shí), DHA、EPA和ARA含量也迅速上升至72.76、26.27和17.20 mg/g; 后期仔魚(yú)以攝食鹵蟲(chóng)為主, ∑MUFA和∑SFA含量繼續(xù)顯著增加(P＜0.05), 尤其是∑MUFA含量比前期仔魚(yú)增加了1.3倍, 此時(shí), 17種重要脂肪酸中的∑SFA、∑MUFA和∑PUFA的實(shí)際含量分別是114.83、130.24、122.05 mg/g, 三者約各占1/3。

由表5計(jì)算得圖1、圖2?！芐FA、∑MUFA、∑PUFA之間的比值, 以及∑n-3 PUFA與∑n-6 PUFA比值變化見(jiàn)圖1, 鲉褐菖從受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú)階段, ∑SFA/∑MUFA及∑PUFA/∑MUFA 比值顯著升高(P＜0.05),說(shuō)明MUFA相對(duì)于SFA和PUFA被選擇性消耗, 又因?yàn)椤芇UFA/∑SFA比值也顯著升高(P＜0.05), 說(shuō)明SFA相對(duì)于PUFA被選擇性消耗, 所以在受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú)階段脂肪酸選擇性消耗次序?yàn)镸UFA ＞ SFA ＞PUFA。而從初產(chǎn)仔魚(yú)至后期仔魚(yú)階段, 上述三個(gè)比值卻呈顯著降低(P＜0.05), 說(shuō)明此階段利用次序?yàn)镻UFA ＞ SFA ＞ MUFA。在PUFA中, ∑n-3 PUFA/∑n-6 PUFA 在 褐菖 鲉 受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú)以及前期仔魚(yú)至后期仔魚(yú)階段無(wú)顯著變化(P＞0.05), 但在初產(chǎn)仔魚(yú)至前期仔魚(yú)階段卻顯著下降(P＜0.05)。說(shuō)明在這一階段中,∑n-3 PUFA相對(duì)∑n-6 PUFA被機(jī)體選擇性消耗。

表5 褐菖鲉各階段主要脂肪酸的實(shí)際含量(mg/g干重)Tab.5 Actual contents of main fatty acids in S. marmoratus of different stages (mg/g DW)

圖1 鲉褐菖胚胎及仔魚(yú)發(fā)育中幾類重要脂肪酸相對(duì)比值的變化Fig.1 Changes in relative ratio among essential fatty acids in developmental egg and larvae of S. marmoratus

由圖2可知, 從受精卵至后期仔魚(yú)的C16:0/C18:0比值下降, 反映了SFA中的C18:0相對(duì)得到保留, 而C16:0被選擇性消耗。同樣在主要的MUFA中,C16:1/C18:1變化反映出從受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú)階段,C16:1被選擇性大量消耗, 而從前期仔魚(yú)至后期仔魚(yú)階段, 比值顯著上升(P＜0.05), 則此階段C18:1被選擇性消耗。DHA/EPA比值在受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú)顯著升高, 此后比值顯著降低(P＜0.05)。從初產(chǎn)仔魚(yú)至前期仔魚(yú)階段, EPA/ARA與DHA/ARA顯著降低(P＜0.05),反映在此階段中EPA和DHA相對(duì)ARA被選擇性消耗,且DHA相對(duì)EPA消耗更甚。而前期仔魚(yú)至后期仔魚(yú)階段, EPA/ARA顯著升高(P＜0.05), DHA/ARA則變化不顯著(P＞0.05), 這說(shuō)明在此階段ARA相對(duì)EPA被選擇性消耗。

圖2 鲉褐菖胚胎及仔魚(yú)發(fā)育中幾種重要脂肪酸的相對(duì)比值變化Fig.2 Changes in relative ratio among essential fatty acids in developmental egg and larvae of S. marmoratus

3 討論

3.1 鲉褐菖發(fā)育早期的氨基酸組成及其變化規(guī)律

很多海水硬骨魚(yú)類的卵子中有一個(gè)或者數(shù)個(gè)油球, 為浮性卵, 林丹軍等(2002)卻 發(fā)現(xiàn)褐菖 鲉 卵子雖含有 1 個(gè)較大的油球, 但其為沉性卵。另?yè)?jù)研究認(rèn)為, 海洋魚(yú)類浮性卵的游離氨基酸含量為總氨基酸含量的20%—50%而沉性卵僅為2%—3% (R?nnestadet al, 1993)。由表2已知, 褐菖鲉的受精卵中游離氨基酸/總氨基酸值為1.4%, 因 褐菖 鲉 屬于卵胎生魚(yú)類,具有其特殊性, 故其比值接近沉性卵而低于沉性卵。

褐菖 鲉 從受精卵到初產(chǎn)仔魚(yú)時(shí)總氨基酸含量顯著下降了23.23% (P＜0.05), 必需氨基酸總和、非必需氨基酸總和也分別下降了30.13%和7.83%, 這與半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)的報(bào)道類似(常青等,2007)。褐菖鲉的受精卵在母體內(nèi)完成胚胎發(fā)育, 孵化出膜后繼續(xù)在卵巢液中發(fā)育至開(kāi)口, 當(dāng)卵黃囊將要耗盡時(shí)才由母體內(nèi)產(chǎn)出, 在母體內(nèi)的這個(gè)過(guò)程中胚胎和仔魚(yú)消耗了卵黃囊中的大量能量與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。因此, 初產(chǎn)仔魚(yú)所含的氨基酸總量呈顯著降低。隨著仔魚(yú)開(kāi)口攝食, 前期仔魚(yú)開(kāi)始獲得外源營(yíng)養(yǎng), 故其體內(nèi)的總氨基酸也迅速積累。但是隨著仔魚(yú)的快速生長(zhǎng),代謝活動(dòng)不僅要消耗大量的能量物質(zhì), 各個(gè)器官組織的發(fā)育也需要大量的氨基酸用于身體結(jié)構(gòu)蛋白的合成, 可能是由于攝入的蛋白質(zhì)跟不上魚(yú)體對(duì)氨基酸的需求, 因而出現(xiàn)了后期仔魚(yú)中的總氨基酸含量暫時(shí)下跌的現(xiàn)象。

從游離氨基酸總量看, 初產(chǎn)仔魚(yú)的含量是受精卵的 10倍, 前期仔魚(yú)又顯著下降了41.20%, 游離氨基酸占總氨基酸比值也表明, 在受精卵發(fā)育階段游離氨基酸被大量利用, 使游離氨基酸含量降到谷底。至初產(chǎn)仔魚(yú)隨著水解氨基酸總量下降, 但游離氨基酸迅速上升, 這與六帶牙(Pelates sexlineatus)、半滑舌鰨的游離氨基酸含量從受精卵到卵黃囊仔魚(yú)再到初產(chǎn)仔魚(yú)一直降低的研究結(jié)果差異較大(Brown et al, 2005; 常青等, 2007)。但卻與大西洋鮭魚(yú)(Salmo salar) (Srivastava et al, 1995)以及硬頭鱒(Salmo gairdneri) (徐紹剛等, 2011)的研究結(jié)果一致。有報(bào)道指出海水仔魚(yú)受精卵發(fā)育到開(kāi)口仔魚(yú)期間, 游離氨基酸的總和持續(xù)下降, 但是有的種類在卵和卵黃囊兩個(gè)階段都有發(fā)生, 而有的種類在二者中的一個(gè)階段中發(fā)生。褐菖 鲉 孵化后1d便可以看到攝食現(xiàn)象, 卵黃囊體積減小, 消化道也已分化。由此可見(jiàn), 褐菖鲉游離氨基酸的消耗主要發(fā)生在受精卵階段, 而在攝食后的消耗相對(duì)較少。在胚胎發(fā)育中游離氨基酸的主要作用是參加魚(yú)體蛋白的合成以及作為能源被分解利用, 而氧化分解代謝基質(zhì)的模式又根據(jù)魚(yú)的受精卵是否具有油球而異, 對(duì)于具有油球的受精卵, 50%的能量來(lái)自氨基酸的分解代謝(主要是游離氨基酸,但當(dāng)其耗盡則分解蛋白質(zhì)), 50%的能量來(lái)自中性脂如蠟酯和甘油三酯的分解代謝(R?nnestad et al, 1993)。褐菖鲉的受精卵具有1個(gè)較大的油球, 其能量的代謝模式應(yīng)該屬于這種。

對(duì)于褐菖 鲉 仔魚(yú)開(kāi)口餌料來(lái)說(shuō), 從受精卵到開(kāi)口仔魚(yú)氨基酸的變化更有參考意義。有研究指出, 仔魚(yú)的開(kāi)口期是發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期, 其營(yíng)養(yǎng)逐步由內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)經(jīng)混合型營(yíng)養(yǎng)最后轉(zhuǎn)換為外源性營(yíng)養(yǎng), 此時(shí)會(huì)表現(xiàn)仔魚(yú)快速死亡, 它常被稱作“死亡期”或是“危險(xiǎn)期”, 所以及時(shí)地供給豐富、足夠的開(kāi)口餌料在魚(yú)苗培育過(guò)程中十分重要。褐菖 鲉 仔魚(yú)從母體產(chǎn)出時(shí)就已開(kāi)口, 第 6 天卵黃囊徹底消失, 魚(yú)體進(jìn)入完全外源性營(yíng)養(yǎng)階段。魚(yú)體的氨基酸組成往往作為其氨基酸需要量的參考標(biāo)準(zhǔn), 當(dāng)飼料中含有的可消化吸收氨基酸比例與魚(yú)類對(duì)各種氨基酸需要量的比例相近時(shí),即達(dá)到氨基酸平衡時(shí), 就能滿足魚(yú)類對(duì)氨基酸的需要量。褐菖 鲉 從受精卵到開(kāi)口仔魚(yú)時(shí)期總氨基酸含量快速下降的是丙氨酸, 其次是異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸和甲硫氨酸, 必需氨基酸下降程度高于非必需氨基酸。因此, 在 褐菖 鲉 仔魚(yú)的開(kāi)口餌料中添加一定水平的上述氨基酸尤其是必需氨基酸是十分必要的。

3.2 褐菖鲉發(fā)育早期的脂肪酸組成及其變化規(guī)律

在魚(yú)類受精卵和仔魚(yú)發(fā)育過(guò)程中, 脂肪酸起著十分重要的作用。海水魚(yú)類在開(kāi)口攝食前的發(fā)育過(guò)程完全依賴內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)維持正常的生理活動(dòng)(常青,2006)。褐菖鲉的受精卵的主要脂肪酸實(shí)際含量中, 以DHA、C16:0最高, 其次是C18:1n-9和EPA, 這一結(jié)果與大菱鲆(Scophthalmus maximus)、大西洋鱈、真鯛(Pagrus major)和庸鰈(Hippoglossus hippoglossus)等(Klungs?yr et al, 1989)海洋魚(yú)類魚(yú)卵總脂中的主要脂肪酸組成相同, 說(shuō) 明這些脂肪酸對(duì)褐菖 鲉 早期發(fā)育至關(guān)重要。但與金頭鯛(Sparus aurata)魚(yú)卵中主要脂肪酸組成順序不同(劉鏡恪等, 2002), 這可能是由于存在種間差異所致。

在褐菖 鲉 的內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)階段中, PUFA的含量顯著高于MUFA和SFA, 這個(gè)結(jié)果與半滑舌鰨(常青等,2007)以及黑線鱈(Melanogrammus aeglefinus) (Plante et al, 2007)等許多海水魚(yú)類的研究結(jié)果一致。淡水魚(yú)類中的受精卵中, 卻是SFA高于MUFA和PUFA的含量, 這是淡水魚(yú)類與海水魚(yú)類受精卵和卵黃囊仔魚(yú)中脂肪酸組成的重要差別(黃旭雄等, 2013)。

有研究表明, 某些魚(yú)類在發(fā)育過(guò)程中對(duì)脂肪酸的利用存在一定的選擇性(黃旭雄等, 2013)。圖 1和圖 2中, 在 褐菖 鲉 吸收卵黃內(nèi)源營(yíng)養(yǎng)的發(fā)育階段,C16:0 ＞ C18:1 ＞ EPA ＞ DHA ＞ ARA 為被選擇性消耗的主要脂肪酸, PUFA相對(duì)SFA和MUFA被機(jī)體選擇性保留, 而SFA又相對(duì)于MUFA被機(jī)體選擇性保留。所以, SFA、MUFA、PUFA 三 者在褐菖 鲉 內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)階段的利用率為 MUFA ＞ SFA ＞ PUFA。即 MUFA 和SFA 作為褐菖 鲉 胚胎及仔魚(yú)發(fā)育階段重要能源被首先利用, 其中MUFA利用率較SFA高, 而PUFA被適當(dāng)?shù)乇４嫦聛?lái), 這與海水魚(yú)類在內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)階段首先利用SFA和MUFA的規(guī)律一致(劉鏡恪等, 2002)。如黃顙魚(yú)(Pelteobagrus fulvidraco) (盧素芳等, 2008)和突吻鱈鱸(Maccullochella macquariensis) (Gunasekera et al, 1999)的仔魚(yú)也優(yōu)先利用MUFA作為能量基質(zhì)被消耗, MUFA中C16:1相對(duì)C18:1被選擇性消耗。其次, SFA中C16:0、C18:0在菖鲉受精卵至后期仔魚(yú)發(fā)育期間亦起著重要作用, 表5所示, 從受精卵至初產(chǎn)仔魚(yú)顯著下降, 可 以認(rèn)為在褐菖 鲉 胚胎及體內(nèi)仔魚(yú)發(fā)育階段也主要利用C16:0和C18:0為主要能源物質(zhì),這與硬頭鱒、條石鯛(Oplegnathus fasciatus)等海水魚(yú)魚(yú)類的研究結(jié)果一致(徐紹剛等, 2011; 徐善良等,2013)。

大量研究證實(shí), EPA、DHA和ARA是海水仔、稚魚(yú)的必需脂肪酸(Lie, 1993), 尤其是 n-3系列PUFA(EPA、DHA)在海水魚(yú)類細(xì)胞膜的脂類中占相當(dāng)大的比例, 能影響水產(chǎn)動(dòng)物親體的繁殖力、受精率以及仔魚(yú)生長(zhǎng)和存活(Gunasekera et al, 2001)。n-6系列中, ARA是海水魚(yú)前列腺素合成的主要來(lái)源, 且ARA對(duì)海水仔稚魚(yú)的生長(zhǎng)存活等多方面發(fā)揮重要的影響(徐善良等, 2013)。本研究結(jié)果顯示, 在 褐菖 鲉 的受精卵中含有豐富DHA、EPA和ARA, 三者的百分含量在初產(chǎn)仔魚(yú)期表現(xiàn)出不降反升的現(xiàn)象。這說(shuō)明PUFA中, EPA、DHA和ARA利用率較低被優(yōu)先保存下來(lái)。盡管如此, 在 褐菖 鲉 仔魚(yú)開(kāi)口前既無(wú)外源營(yíng)養(yǎng), 又不能將短鏈脂肪酸延長(zhǎng)去飽和生成EPA和DHA。因此表現(xiàn)為初產(chǎn)仔魚(yú)DHA、EPA和ARA實(shí)際含量仍然顯著下降, 這 表明在褐菖 鲉 仔魚(yú)卵黃囊被吸收的前期階段, 已開(kāi)始利用DHA等PUFA。這也與條石鯛的研究結(jié)果相似(徐善良等, 2013)。而與Mourente等(1996)對(duì)饑餓的塞內(nèi)加爾鰨仔魚(yú)的研究中發(fā)現(xiàn)DHA始終保持不變的結(jié)果不同。

而當(dāng)褐菖 鲉 仔魚(yú)開(kāi)口攝食輪蟲(chóng)后, SFA中C16:0、C18:0, MUFA中C18:1, 以及PUFA中DHA、EPA和ARA均得到迅速補(bǔ)充, 此后的脂肪酸利用次序則表現(xiàn)為 PUFA ＞ SFA ＞ MUFA。至后仔魚(yú)期, 由于開(kāi)始攝食富含C18:0、C18:1而缺乏PUFA的鹵蟲(chóng), 仔魚(yú)體內(nèi)的 C18:0和 C18:1迅速上升, 這與黃旭雄等(2013)對(duì)日本鬼 鲉 的研究結(jié)果完全相同。同時(shí), 在后仔魚(yú)期因食物中 PUFA獲取不足或 n-3 PUFA被選擇性消耗,出現(xiàn)∑PUFA百分比顯著下降, 而 DHA相對(duì) EPA和ARA則被選擇性消耗, 實(shí)際含量下降更甚。因此, 在褐菖 鲉 后期仔魚(yú)階段適當(dāng)補(bǔ)充 DHA, 對(duì)獲得其良好的生長(zhǎng)性能很有必要。也證明了這些魚(yú)類的高度不飽和脂肪酸含量變化與餌料密切相關(guān), 主要依賴外界營(yíng)養(yǎng)提供。以上結(jié)果表明褐菖 鲉 在各發(fā)育階段對(duì)脂肪酸的利用同樣具有不同的選擇性。

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