十堰市Rh弱D和/或部分D變異型血型血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析

舒群峰

(十堰市中心血站，湖北 十堰 442000)

摘要：目的了解十堰市無償獻(xiàn)血者中Rh弱D和/或部分D變異型所占比例。 方法在122 084名無償獻(xiàn)血者中采用微板法初篩出Rh(D)陰性獻(xiàn)血者442名，采用間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT)試管法確認(rèn)Rh(D)陰性、弱D和/或部分D變異型，Rh因子血清學(xué)表型鑒定采用鹽水試管法。結(jié)果442名初篩Rh(D)陰性獻(xiàn)血者中采用IAT確認(rèn)Rh(D)陰性427例，占總?cè)藬?shù)的0.35%；檢出Rh弱D和/或部分D 15例，檢出率分別為3.394%(15/442)和0.013%(15/122 084)，弱D和/或部分D僅檢出4種表型，分布比例分別為ccEe 40%、Ccee 40%、CcEe 13.33%、CCee 6.67%，不規(guī)則抗體檢測(cè)均為陰性。結(jié)論從獻(xiàn)血者角度講，D變異型個(gè)體所獻(xiàn)血液應(yīng)該作為Rh陽性血液供應(yīng)臨床；從受血者角度講，則應(yīng)該輸Rh陰性血液。而一個(gè)個(gè)體可能在不同時(shí)間先后成為獻(xiàn)血者或受血者，因此正確鑒定弱D和部分D在內(nèi)的D變異型并制定相應(yīng)的輸血策略，對(duì)于輸血安全和合理用血有著重要的意義。

關(guān)鍵詞：弱D；部分D；D變異型；間接抗人球蛋白試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：

文章編號(hào)：1673-8640(2015)10-1004-04R446.11

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.10.010

基金項(xiàng)目：2013-2014湖北省衛(wèi)生廳采供血管理科研項(xiàng)目(JX6C-47)

作者簡(jiǎn)介：舒群峰，女，1973年生，副主任技師，主要從事血液免疫學(xué)檢驗(yàn)工作。

收稿日期：(2015-02-15)

常規(guī)血清學(xué)鹽水法能檢出大部分D抗原陽性個(gè)體，但有一部分個(gè)體鹽水法檢測(cè)D抗原為陰性，只有采用間接抗人球蛋白試驗(yàn)(indirect antiglobulin test，IAT)才可檢出陽性，這些個(gè)體為弱D表型，這種表型在中國(guó)人中約1/10 000，包括弱D型和部分D型[1]。為了解十堰市RhD陰性獻(xiàn)血者中Rh弱D和/或部分D變異型的分布，本研究對(duì)2010年至今的122 084名獻(xiàn)血者進(jìn)行了分析。

材料和方法

一、研究對(duì)象

十堰市2010年至今參與無償獻(xiàn)血人員合計(jì)122 084名，初篩為Rh陰性的442名獻(xiàn)血者血液標(biāo)本(以上均未計(jì)入重復(fù)獻(xiàn)血人次)。

二、試劑和儀器

RhD血型初篩和確認(rèn)試劑：?jiǎn)慰寺gM-D(Biotest公司，批號(hào)：1905010等clone:BS226)；單克隆IgG-D1(上海血液生物醫(yī)藥有限公司，批號(hào)：20100210等clone:MS-26)，單克隆IgM/IgG混合抗-D2(法國(guó)DIAGAST公司，批號(hào)：410000等 clone:P3×61+P3×21223B10+P3×290+P3×35)，單克隆IgM/IgG混合抗-D3(英國(guó)BioSCot公司，批號(hào)：BMC0702C等clone:TH-28/MS-26)，單克隆IgM/IgG混合抗-D4(加拿大Dominion公司，批號(hào)：517031等 clone:D175-2/D415-1E4細(xì)胞系)，人源IgG-D5(成都輸血研究所，批號(hào)：20121104等，效價(jià)32)，人源IgG-D6(上海血液生物醫(yī)藥有限公司，批號(hào)：20090602等，效價(jià)256)，人源IgG-D7(自制，效價(jià)1024)；單克隆IgM-C、-c、-E、-e、抗體篩選細(xì)胞、多特異性抗人球蛋白試劑(20121207等)均由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供；STAR 2000全自動(dòng)加樣儀(瑞士Hamilton公司)；16 μm階梯P3微孔板(日本Olympus公司)；AK數(shù)字血型儀及判讀軟件(深圳愛康公司)；KA-2200離心機(jī)(日本Kubota公司)；37 ℃恒溫水浴箱(上海博迅公司)。

三、方法

1.RhD陰性初篩方法采用梯形板鹽水法，STAR 2000全自動(dòng)加樣儀分配獻(xiàn)血者預(yù)稀釋紅細(xì)胞和IgM-D試劑血清至16 μm階梯P3微孔板對(duì)應(yīng)孔中，振蕩混勻，靜置60 min，用AK數(shù)字血型儀分析圖像并判讀Rh血型結(jié)果。

2.RhD陰性及弱D和/或部分D確認(rèn)至少使用4種不同廠家批號(hào)的人源、單克隆IgG抗-D、IgM/IgG混合抗-D,對(duì)初篩為陰性標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)(IAT法)，確認(rèn)實(shí)驗(yàn)同時(shí)加做試劑的陰、陽對(duì)照以證明確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的有效性[2]。

3.血清學(xué)表型鑒定分別用單克隆IgM抗-C、抗-c 、抗-E 和抗-e 試劑對(duì)RhD陰性及弱D和/或部分D標(biāo)本進(jìn)行Rh因子血清學(xué)分型。

4.不規(guī)則抗體篩選使用試劑篩選細(xì)胞和新鮮自制3～5人份混合O型Rh陽性紅細(xì)胞對(duì)初篩為Rh陰性標(biāo)本進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選。除初篩試驗(yàn)之外，所有試驗(yàn)均在潔凈玻璃試管中反應(yīng)。

結(jié)果

122 084名無償獻(xiàn)血者中初篩RhD陰性獻(xiàn)血者442名，占總?cè)藬?shù)的0.362%；經(jīng)4種不同性質(zhì)抗D確認(rèn)RhD陰性427例，占總獻(xiàn)血人數(shù)的0.348%，與全國(guó)漢族人群中RhD陰性 0.2%～0.5%相吻合[3]。427名IAT法Rh(D)陰性共檢出8種表型，分別為ccee(57.14%)、Ccee(30.21%)、CCee(6.09%)、ccEe (3.98%)、CcEe(1.64%)、ccEE (0.47%)、CCEe(0.23%)、CcEE (0.23%)，未檢出CCEE表型，其分布比例與文獻(xiàn)[4-5]報(bào)道基本一致，均以表型ccee最多，Ccee次之。采用IAT法檢出血清學(xué)弱D和/或部分D 15例，檢出率分別為3.394%(15/442)和0.013%(15/122 084)；弱D和/或部分D僅檢出4種表型，分別為ccEe 40%、Ccee 40%、CcEe 13.33%、CCee 6.67%，在各自相應(yīng)初篩Rh(D)陰性表型中所占比例依次為ccEe 26.09%、CcEe 22.22%、Ccee 4.44%、CCee 3.70%。8種表型分布結(jié)果見表1。

表1　RhD陰性及變異型表型分布

15例弱D和/或部分D中女性9名(60%)、男性6名(40%)，均未檢出不規(guī)則抗體。15名血清學(xué)弱D和/或部分D獻(xiàn)血者與不同抗-D血清鹽水立即離心及IAT法反應(yīng)結(jié)果見表2。

表2　15例血清學(xué)弱D和/或部分D獻(xiàn)血者與不同抗-D血清鹽水立即離心及IAT反應(yīng)結(jié)果

續(xù)表2

討論

十堰市血清學(xué)弱D和/或部分D檢出率分別為3.394%(15/442)和0.013%(15/122 084)，檢出率與吳筱瑩等[1]報(bào)道基本一致，低于涂同濤等[6]報(bào)道的檢出率，這可能與本站采用的Rh血型初篩方法有關(guān)，本站獻(xiàn)血者ABO、Rh血型初篩方法為微板鹽水法，微型板形狀由U型、V型過渡至目前UV結(jié)合型3種不同板底，由全自動(dòng)加樣儀分配試劑和紅細(xì)胞，離心、沉降，最后由血型儀判讀結(jié)果。表中血員碼為00130815的獻(xiàn)血者因懷孕在醫(yī)院產(chǎn)檢時(shí)紙板法檢測(cè)為RhD陰性，醫(yī)院建議該孕婦前往血站做相關(guān)血型血清學(xué)檢查，自述2013年曾參與無償獻(xiàn)血，調(diào)出血型檢測(cè)原始資料，當(dāng)時(shí)血型儀判讀為RhD陽性，遂抽血IAT法檢測(cè)為弱D。后經(jīng)家系調(diào)查，其弟為RhD陰性，其父與該孕婦一致為弱D，其母為正常RhD陽性。另1名血員碼00064807獻(xiàn)血者第1、2次獻(xiàn)血時(shí)，同樣是血型儀判讀為RhD陽性，此次獻(xiàn)血血型檢測(cè)結(jié)果報(bào)告時(shí)，血型儀判讀為RhD陰性，IAT確認(rèn)為弱D。有報(bào)道梯度板法對(duì)抗原性較弱的亞型、不規(guī)則抗體檢出能力強(qiáng)[7]。但是對(duì)凝集強(qiáng)度的分級(jí)觀察顯然不是很準(zhǔn)確，致使凝集強(qiáng)度低于3～4+的弱凝集被忽略，勢(shì)必造成ABO亞型、弱D的誤判，例如00130815的獻(xiàn)血者被判讀為RhD陽性。同時(shí)梯度板法也存在一定的漏檢情況，如本研究00064807獻(xiàn)血者被判讀為RhD陰性。ABO血型可以通過正反定型來互認(rèn)。可是D抗原的檢測(cè)卻無法互認(rèn)，當(dāng)鹽水法檢測(cè)為RhD陰性或凝集弱時(shí)則需要使用不同性質(zhì)、不同生產(chǎn)廠家抗-D試劑IAT法確認(rèn)，同時(shí)做好試劑的陰、陽對(duì)照。

表1中15例弱D和/或部分D僅檢出ccEe、Ccee、CcEe和CCee 4種表型，RhD陰性表型最多的ccee中未檢出1例弱D和/或部分D，與劉巧等[8]報(bào)道一致。而僅占初篩Rh(D)陰性獻(xiàn)血者5.2%的ccEe表型中26.09%為弱D和/或部分D，提示十堰地區(qū)此4種表型的初篩Rh(D)陰性獻(xiàn)血者在IAT確認(rèn)時(shí)應(yīng)仔細(xì)觀察凝集強(qiáng)度，防止漏檢。

中國(guó)人群的弱D主要為弱D15型，因此當(dāng)弱D15型個(gè)體輸注D陽性血液時(shí)可能產(chǎn)生抗-D[9]。部分D由于缺乏相應(yīng)抗原表位當(dāng)輸注正常D陽性血液時(shí)可產(chǎn)生針對(duì)相應(yīng)表位的抗-D，因此對(duì)弱D和/或部分D表現(xiàn)型進(jìn)行分子生物學(xué)分類，可對(duì)不同類型表現(xiàn)型制定正確的輸血策略[10]。表2中15例血清學(xué)弱D和/或部分D與不同性質(zhì)抗D、不同反應(yīng)介質(zhì)(鹽水和IAT)中凝集強(qiáng)度由“O～4+”不盡相同，要區(qū)分弱D型和部分D型, 或鑒定具體哪一種部分D型時(shí), 需要采用 “D抗原表位檢測(cè)試劑盒”(一般含有8～10種D抗原不同表位的抗體), 或者采用PCR檢測(cè)試劑盒或基因序列分析[11]。15例中哪幾例是弱D，哪幾例是部分D，本站目前還沒有能力檢測(cè)，但15例均未檢出不規(guī)則抗體。15例中有10例是80年代后出生的獻(xiàn)血者，其中女性有6例，作為獻(xiàn)血者，她們所獻(xiàn)出的血液無需區(qū)分弱D或部分D，均應(yīng)當(dāng)作Rh(D)陽性血液發(fā)往臨床供Rh(D)陽性患者使用；可是，她們也許因?yàn)槿焉锍蔀?名受血者，就像表中血員碼00130815的獻(xiàn)血者，妊娠期間貧血，胎兒發(fā)育緩慢行剖宮產(chǎn)手術(shù)需要備血，直接輸注Rh陰性血液當(dāng)然是安全的，但是稀有的血源和昂貴的費(fèi)用也會(huì)影響及時(shí)的救治。而危及生命的緊急情況，即使是Rh陰性孕婦在沒有產(chǎn)生相應(yīng)抗體的情況下也可能輸Rh陽性血液。有文獻(xiàn)報(bào)道, 在德國(guó)經(jīng)過細(xì)致的研究和臨床觀察, 建立了對(duì)占白色人種弱 D 型 90 % 的弱 D1、2、3型輸用 RhD 陽性血的輸血規(guī)則[12]。從獻(xiàn)血者角度講，D變異型個(gè)體所獻(xiàn)血液應(yīng)該做為Rh陽性血液供應(yīng)臨床；從受血者角度講，則應(yīng)該輸Rh陰性血液。而1個(gè)個(gè)體可能在不同時(shí)間先后成為獻(xiàn)血者或受血者，因此正確鑒定弱D和部分D在內(nèi)的D變異型并制定相應(yīng)的輸血策略，對(duì)于輸血安全和合理用血有著重要的意義。

參考文獻(xiàn)

[1]吳筱瑩,何穎軍,徐紅先,等.RHD1227A型弱D的D抗原表位分析[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2011,21(24):2977-2980.

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(本文編輯：范基農(nóng))

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1. 學(xué)員對(duì)象從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)或其他相關(guān)專業(yè)技術(shù)工作的衛(wèi)生技術(shù)人員。

2. 繼續(xù)教育內(nèi)容臨床檢驗(yàn)與血液學(xué)檢驗(yàn)、免疫學(xué)檢驗(yàn)、微生物學(xué)檢驗(yàn)、生物化學(xué)檢驗(yàn)、分子生物學(xué)檢驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)室管理等檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新技術(shù)、新進(jìn)展，均出自期刊發(fā)表的文章。

3. 學(xué)員報(bào)名步驟欲參加繼續(xù)教育項(xiàng)目者，請(qǐng)將回執(zhí)復(fù)印、填寫后寄回(回執(zhí)請(qǐng)見本刊第840頁，信封上注明“參加繼續(xù)教育”)；也可以登錄期刊網(wǎng)站(http://www.shjyyx.com)，在“編輯部公告”中下載、填寫回執(zhí)，并將回執(zhí)用E-mail發(fā)至編輯部。編輯部以收到學(xué)員報(bào)名的回執(zhí)和教育費(fèi)用的次序作登記注冊(cè)和編號(hào)。

4. 考試方法編輯部將試卷寄給注冊(cè)過的學(xué)員(試卷復(fù)印無效)，考試合格者參照國(guó)家《繼續(xù)教育學(xué)分授予方法》授予繼續(xù)教育學(xué)分證書。

5. 時(shí)間安排2015年4月1日至10月30日。

6. 收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)300元。

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