榆葉合葉子黃酮類成分的微乳薄層色譜鑒別

王艷， 張俊妹， 郭金鳳， 李新霞， 熱娜·卡斯木

(新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院， 烏魯木齊830011)

摘要:目的建立榆葉合葉子黃酮類成分的微乳薄層色譜鑒別方法。 方法以十二烷基硫酸鈉(SDS)-正丁醇-正庚烷-水組成的微乳體系為展開劑，對(duì)榆葉合葉子的全草和花的提取物進(jìn)行薄層層析，考察微乳薄層中的微乳液類型、酸度等因素對(duì)黃酮類物質(zhì)分離效果的影響。結(jié)果含水量75%(O/W)的微乳液-甲酸(9∶1)為適宜展開劑, 與傳統(tǒng)有機(jī)溶劑展開劑相比，分離得到的斑點(diǎn)數(shù)目更多，更加清晰，分離度更好。 結(jié)論黃酮類成分的微乳薄層鑒別方法簡便易行，重復(fù)性好，可作為榆葉合葉子藥材的薄層鑒別方法。

關(guān)鍵詞:榆葉合葉子； 微乳； 薄層色譜

中圖分類號(hào)：R914文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.01.015

[收稿日期：2013-12-27]

基金項(xiàng)目：新疆維吾爾自治區(qū)科技支撐項(xiàng)目(201433104)

作者簡介：李巖，女，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥物新劑型與新制劑。

Identification of flavono in Filipendula ulmari by microemulsion

thin-layer chromatography

WANG Yan, ZHANG Junmei, GUO Jinfeng, LI Xinxia, Rena Kasimu

(CollegeofPharmacy,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a new method on the identification of flavone in Filipendula ulmari by microemulsion thin-layer chromatography. MethodsThe flowers and herbals samples of Filipendula ulmari were eluted with the developer of SDS-n-C4H9OH-n-C7H16-H2O to investigate the effects of the microemulsion types and acidity. ResultsThe flavone was separated entirely by the developer of water content of 75% (O/W) of microemulsion. Compared with the other organic developers, more spots were identified and the resolution was improved markedly. ConclusionThis method of microemulsion thin-layer chromatography was easily adopted, with good repeatability, which could be used as a quality identification of flavone in Filipendula ulmari.

Key words：Filipendulaulmari; micro emulsion; thin-layer chromatograph

微乳薄層色譜是對(duì)傳統(tǒng)薄層色譜方法的提高和改進(jìn)，采用微乳作為展開劑，聚酰胺薄膜為固定相。微乳是由表面活性劑、助表面活性劑、油和水按適當(dāng)比例形成的無色透明、各向同性、低黏度的熱力學(xué)穩(wěn)定體系，因此微乳具有更大的增溶量和超低界面張力，更有利于提高色譜的分離效率[1]。榆葉合葉子(Filipendula ulmaria L.)為薔薇科蚊子草屬多年生草本植物，國內(nèi)主要分布于新疆阿勒泰地區(qū)，國外主要分布于英國、波蘭、土耳其、蘇聯(lián)等國[2-3]。由于合葉子生長和分布的地域特色，其即是英國、印度、法國和俄羅斯等國的著名草藥，也是新疆哈薩克族民間常用藥材?，F(xiàn)代藥理研究表明榆葉合葉子的藥理作用廣泛，具有抗炎、止血、抗?jié)?、抗凝血、抗腫瘤、傷口治療、保肝、抗糖尿病和健腦等作用[4-5]，其主要化學(xué)成分為酚苷類和黃酮類成分[6-7]?！稓W洲藥典》(第7版)、《匈牙利藥典》(第8版)均收載了合葉子，采用薄層色譜法鑒別其酚苷類成分，但未見對(duì)其黃酮類成分的薄層鑒別方法。另外《歐洲藥典》采用合葉子的花作為藥用部位，而《哈薩克族藥志》收載及民間應(yīng)用均為榆葉合葉子的干燥帶花地上部分。本研究運(yùn)用微乳薄層色譜法對(duì)榆葉合葉子的黃酮類成分進(jìn)行薄層色譜鑒別研究，并且分別取榆葉合葉子的花和全草進(jìn)行鑒別。

1儀器與材料

半自動(dòng)點(diǎn)樣儀(CAMAG LINOMAT5)，薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)(CAMAG REPROSTAR3)，100 μL微量進(jìn)樣針，超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司),分析天平(Mettler-Teledo,AB135-S,d=0.01/0.1 mg)，雙槽展開缸(20 cm×20 cm)，硅膠G高效板(購自青島海洋化工廠),聚酰胺薄膜(浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠出品)。

金絲桃苷對(duì)照品(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)MUST-11122003)，繡線菊苷對(duì)照品(ChromaDex, Inc.，批號(hào) 20229-56-5)，蘆丁對(duì)照品(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)20120226)，槲皮素對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)100081-2009907),其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1微乳展開劑的配置[8-9]在保證SDS-正丁醇-正庚烷質(zhì)量比為27∶63∶10的條件下，改變水量，配置系列微乳。按上述質(zhì)量比取SDS、正丁醇、正庚烷后，加入適量水, 超聲5 min使溶解，靜置24 h備用，各微乳液的成分配比及結(jié)構(gòu)見表1。

2.2對(duì)照品溶液的制備取金絲桃苷、繡線菊苷、蘆丁、槲皮素對(duì)照品，以甲醇制成每1 mL含0.5 mg的混標(biāo)溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備分別稱取榆葉合葉子花和全草藥材粉末約0.5 g，量取50 mL甲醇經(jīng)索氏提取法提取，減壓蒸發(fā)干燥，稱重后，殘?jiān)? mL甲醇溶解配制成供試品溶液備用。

表1　微乳液的成分配比及結(jié)構(gòu)(總量：100 g)

2.4薄層層析方法用半自動(dòng)點(diǎn)樣儀吸取榆葉合葉子花供試品溶液 2 μL、榆葉合葉子全草供試品溶液 2 μL和對(duì)照品溶液 2 μL，于聚酰胺薄膜上點(diǎn)樣，以表1中的各微乳為展開劑于室溫上行法展開。展距約8 cm, 取出晾干，噴以5%三氯化鋁無水乙醇溶液顯色，晾干，置366 nm紫外燈下檢視并拍照。

2.5展開劑含水量對(duì)薄層展開效果的影響以配制的6種不同含水量的微乳為展開劑進(jìn)行展開，薄層展開結(jié)果見圖1。由圖可知，含水量越多，展開時(shí)間越短。含水50%的微乳液所需展開時(shí)間偏長，效果欠佳 (圖1A)；含水75%的微乳所需時(shí)間適中，展開斑點(diǎn)較多，且比較清晰，效果較理想，故選擇含水75%的微乳作為展開劑 (圖1D)。

A: 50%微乳-甲酸(9∶1)

B: 65%微乳-甲酸(9∶1)

C: 70%微乳-甲酸(9∶1)

D: 75%微乳-甲酸(9∶1)

E: 80%微乳-甲酸(9∶1)

F: 90%微乳-甲酸(9∶1)

(從左至右分別為花的樣品、全草樣品、混標(biāo)；混標(biāo)從上至下分別為蘆丁、金絲桃苷、繡線菊苷、槲皮素)

圖1不同含水量的微乳的薄層展開情況

2.6展開劑酸度對(duì)薄層展開效果的影響采用含水75%的微乳作為展開劑，為了改善黃酮類化合物的拖尾現(xiàn)象，采用85%的甲酸調(diào)節(jié)酸度，分別考察了75%微乳-甲酸(9∶1)、75%微乳-甲酸(9∶2)的展開劑，不同酸度的微乳的薄層展開情況見圖2。結(jié)果表明，微乳酸度對(duì)展開效果有一定的影響，75%微乳-甲酸(9∶1)的配比能有效改善拖尾，使展開效果達(dá)到最佳(圖2B)。

2.7微乳展開與傳統(tǒng)有機(jī)溶劑展開比較微乳展開以75%微乳液-甲酸(9∶1)為展開劑，傳統(tǒng)有機(jī)溶劑展開以乙酸乙酯-甲酸-水(12∶0.5∶0.5)為展開劑，分別對(duì)榆葉合葉子的花和全草的提取液進(jìn)行薄層層析。各薄層色譜層析結(jié)果見圖3，傳統(tǒng)有機(jī)溶劑系統(tǒng)乙酸乙酯-甲酸-水(12∶0.5∶0.5)分離出9個(gè)斑點(diǎn)，各成分分離效果好，但斑點(diǎn)較模糊 (圖3A)。微乳展開分離出15個(gè)斑點(diǎn)，斑點(diǎn)明亮、清晰，各成分分離效果較好 (圖3B)?？梢?，對(duì)榆葉合葉子黃酮類成分而言，微乳展開系統(tǒng)較傳統(tǒng)有機(jī)溶劑展開系統(tǒng)分離的斑點(diǎn)數(shù)目更多、更加清晰，具有一定的優(yōu)越性。

A: 75%微乳-甲酸(9∶1)

B: 75%微乳-甲酸(9∶2)

從左至右分別為花的樣品、全草樣品、混標(biāo)；混標(biāo)從上至下分別為蘆丁、金絲桃苷、繡線菊苷、槲皮素

圖2不同酸度的微乳的薄層展開情況

A: 展開劑為乙酸乙酯-甲酸-水(12∶0.5∶0.5)

B: 展開劑為75%微乳-甲酸(9∶1)

從左至右分別為花的樣品、全草樣品、混標(biāo)；A混標(biāo)從上至下分別為槲皮素、繡線菊苷、金絲桃苷、蘆??；B混標(biāo)從上至下分別為蘆丁、金絲桃苷、繡線菊苷、槲皮素

圖3傳統(tǒng)有機(jī)溶劑系統(tǒng)與微乳展開系統(tǒng)薄層分離結(jié)果

3討論

實(shí)驗(yàn)中采用傳統(tǒng)有機(jī)系統(tǒng)作為展開劑時(shí)，曾嘗試過使用不同比例的乙酸乙酯-甲酸-水、醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水、丙酮-水-甲酸作為展開劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，由于榆葉合葉子中黃酮類成分復(fù)雜，且各成分間差別較小，采用傳統(tǒng)有機(jī)溶劑作為展開劑時(shí)，斑點(diǎn)模糊，分離效果不好，特別是金絲桃苷與繡線菊苷很難分開，只有采用乙酸乙酯-甲酸-水(12∶0.5∶0.5)作為展開劑時(shí)效果較好，但是與75%微乳液-甲酸(9∶1)展開系統(tǒng)比較，微乳薄層展開較之具有明顯的優(yōu)勢，采用微乳溶液作為展開劑要比傳統(tǒng)有機(jī)溶劑系統(tǒng)作為展開劑得到的斑點(diǎn)數(shù)目更多，且更加清晰，分離度更好。這是由于微乳體系較膠束體系具有更大的增溶量和超低界面張力，更有利于提高色譜的分離效率[1]，并且微乳薄層還具有明顯的熒光增強(qiáng)增敏效應(yīng)，因此微乳薄層是榆葉合葉子黃酮類物質(zhì)定性鑒別的較理想的展開系統(tǒng)。

榆葉合葉子的花和全草采用相同的提取方法和相同的點(diǎn)樣量，經(jīng)普通有機(jī)系統(tǒng)和微乳展開劑展開，層析結(jié)果顯示，2種樣品的斑點(diǎn)數(shù)目相同，表明榆葉合葉子的花和全草中的黃酮類成分相同；此外，花的樣品中除了繡線菊苷和槲皮素的展開斑點(diǎn)較全草樣品中的相應(yīng)斑點(diǎn)大外，其他黃酮類成分的斑點(diǎn)大小幾乎相同，由此初步推斷榆葉合葉子的花和全草中各黃酮類成分的含量相差不大，但花中的繡線菊苷和槲皮素的含量要稍高于全草中的，其具體的含量差異還需通過HPLC法定量分析。

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(本文編輯施洋)

通信作者：王長虹，男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥新劑型與體內(nèi)過程研究，E-mail:wchcxm@163.com。