原 榮，李 軍，王一羽，南 星，燕林青，慕玉東(陜西省腫瘤醫(yī)院，西安 710061)

宮頸癌是比較常見(jiàn)的婦女惡性腫瘤，高危型人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)持續(xù)性感染與宮頸癌前病變被認(rèn)為是主要致病因素[1]。目前已發(fā)現(xiàn)的HPV有100多種亞型，其中40多種與生殖道疾病有關(guān)[2]。本文對(duì)1 646例分別在商洛及榆林地區(qū)醫(yī)院婦科就診婦女HPV-DNA的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比分析，以了解HPV感染的地域性分布并為宮頸癌防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 2013年1月～2014年10月在榆林市第二人民醫(yī)院婦科就診的709例婦女和在商洛地區(qū)中心醫(yī)院婦科就診的937例婦女，采集她們的宮頸脫落細(xì)胞樣本。

1.2 儀器與試劑 美國(guó)ABI公司7500型熒光定量PCR儀；上海力康科學(xué)技術(shù)有限公司HFsafe-1200TE型生物安全柜；青島海爾有限醫(yī)用低溫科技有限公司DW-86L386型超低溫冰箱。廣州達(dá)安生物技術(shù)有限公司人乳頭瘤病毒分型檢測(cè)試劑盒(熒光定量PCR法)，可以一次性檢測(cè)高危型別18種和低危型別5種。所需試劑四基聯(lián)苯胺、檸檬酸鈉、十二烷基硫酸鈉等均為國(guó)產(chǎn)分析純。顯色液用時(shí)按所需比例加超純水新鮮配制。

1.3 方法

1.3.1 宮頸脫落細(xì)胞采集：利用專(zhuān)用宮頸刷置于宮頸口順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5周，慢慢取出放入專(zhuān)用樣本搜集管內(nèi)，擰緊管蓋，保持樣本管直立，做好樣本標(biāo)識(shí)，實(shí)驗(yàn)室保存在-20℃冰箱待測(cè)。

1.3.2 DNA分離提取：取有宮頸細(xì)胞的保存液離心，棄上清，加細(xì)胞裂解液提取DNA，整個(gè)操作過(guò)程嚴(yán)格按照DNA提取試劑盒操作步驟完成。

1.3.3 PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)條件：50℃15 min，95℃10 min，35次循環(huán)(94℃30 s，42℃90 s，72℃30 s)，72℃延伸5 min。擴(kuò)增完后進(jìn)行雜交和染色，各步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)擴(kuò)增程序進(jìn)行。

1.3.4 檢測(cè)結(jié)果判定：根據(jù)藍(lán)色圓點(diǎn)的有無(wú)和位置利用閱讀分析儀進(jìn)行HPV是否感染以及感染的型別，顯示藍(lán)色圓點(diǎn)者為陽(yáng)性，同時(shí)對(duì)照膜條陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)顯示藍(lán)色斑點(diǎn)時(shí)表示實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用二項(xiàng)分布分別進(jìn)行各組間感染率的比較。所用統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS13.0，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV-DNA感染率 見(jiàn)表1。榆林地區(qū)女性受檢者中HPV-DNA陽(yáng)性220例，陽(yáng)性率31.02%，其中高危型感染者190例，低危型患者17例，混合型13例，分別占感染總數(shù)的86.36%，7.73%及5.91%。商洛地區(qū)HPV-DNA陽(yáng)性566例，陽(yáng)性率60.41%，其中高危型感染者318例，低危型感染者84例，混合型感染者164例，分別占感染總數(shù)的56.18%，14.84%及28.98%。商洛地區(qū)HPV總感染率明顯高于榆林地區(qū)(P<0.05)，同時(shí)商洛各年齡組婦女HPV感染率也都顯著高于榆林(P<0.05)。

表1 榆林和商洛兩地HPV-DNA感染率

2.2 HPV-DNA多重感染率 榆林地區(qū)和商洛地區(qū)多重感染以二重感染最為常見(jiàn)，榆林地區(qū)檢出單一型別感染174例，占總感染例數(shù)的79.09%，榆林地區(qū)未檢出四重以上感染，也未檢出二重和三重低危感染。商洛地區(qū)檢出單一型別感染286例，占總感染例數(shù)的50.53%，多重感染以二重感染最多，有158例，占總感染例數(shù)的27.91%，三重感染74例，占總感染例數(shù)的13.07%，四重及以上感染48例，占總感染例數(shù)的8.48%，最高檢出八重感染。

2.3 兩地HPV-DNA感染常見(jiàn)型別 見(jiàn)表2。

表2 榆林和商洛兩地HPV感染型別和分布(n)

被檢測(cè)的HPV-DNA的23種型別中，榆林地區(qū)婦女HPV單一感染中高危型最常見(jiàn)，依次為HPV16，52，58，51，33。商洛地區(qū)為HPV16，58，66，33，18。兩地共有高危型別為HPV16，58，33。榆林和商洛兩地常見(jiàn)低危型別分別為HPV6，11及HPV6和43型。

3 討論

我國(guó)每年新增約10萬(wàn)例的宮頸癌患者[3]，HPV持續(xù)感染是引發(fā)宮頸癌的主要原因之一[4]。 HPV是一種雙鏈閉環(huán)小DNA病毒，屬于乳頭瘤病毒科，該病毒只侵犯人類(lèi)，性傳播是其主要的感染途徑。HPV亞型眾多，已知20余種亞型與宮頸癌相關(guān)，其中HPV16，18，52，58為高發(fā)型別。榆林地區(qū)婦女HPV單一感染最常見(jiàn)高危型別為HPV16，52，58型；商洛地區(qū)為HPV16，58，66型。兩地高危型均以HPV16排首位，這與國(guó)內(nèi)及國(guó)際報(bào)道的高危感染常見(jiàn)型別一致[5，6]。榆林地區(qū)高危型HPV52，58排2，3位，與國(guó)內(nèi)感染率常見(jiàn)型別吻合[7，8]。榆林地區(qū)低危型最常見(jiàn)為HPV6和11型，商洛地區(qū)為HPV6和43型，兩地排首位的低危型別HPV6與我國(guó)低危第一型別一致。榆林地區(qū)和商洛地區(qū)多重感染以二重感染最為常見(jiàn)，符合國(guó)內(nèi)的多地報(bào)道。榆林地區(qū)未檢出四重及以上感染，也未檢出二重以上低危多重感染。商洛地區(qū)檢出四重及四重以上感染，最多檢出8種型別的HPV感染。數(shù)據(jù)顯示商洛地區(qū)各年齡段HPV的感染率均顯著高于榆林地區(qū)。榆林地處陜西最北部，氣候干燥。 商洛地處陜西東南部，氣候濕潤(rùn)，生活習(xí)慣近似南方。兩地均以漢族人口為主，占比超過(guò)99%。榆林地區(qū)城鎮(zhèn)及農(nóng)村居民經(jīng)濟(jì)收入均高于商洛。一些國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)表明不同區(qū)域HPV陽(yáng)性率各有不同，且差別巨大。研究顯示新疆HPV陽(yáng)性率達(dá)到90%[9]，北京地區(qū)陽(yáng)性率超過(guò)60%[10]，河南地區(qū)陽(yáng)性率14.23%[11]，大連地區(qū)陽(yáng)性率為12.78%[12]，蘇州地區(qū)HPV陽(yáng)性率58.20%[13]，遼寧地區(qū)陽(yáng)性率45.6%[14]，武漢地區(qū)陽(yáng)性率27.61%[15]，汕頭地區(qū)陽(yáng)性率22%[16]， 廣西南寧14.23%[17]，以上不同地區(qū)HPV巨大的感染率差別，難以發(fā)現(xiàn)其規(guī)律性。婦女自身衛(wèi)生習(xí)慣的不良是導(dǎo)致HPV高發(fā)的因素之一， 除此之外有作者提出HPV陽(yáng)性率高與當(dāng)?shù)厣贁?shù)民族居多，經(jīng)濟(jì)落后，受教育程度不同有關(guān)。本研究沒(méi)有收集到單個(gè)感染者對(duì)應(yīng)的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)信息，不能判斷以上因素和兩地HPV感染率差別的相關(guān)性，這有待于進(jìn)一步的研究和探討。

目前國(guó)內(nèi)檢測(cè)HPV的方法很多，沒(méi)有一個(gè)確定的金標(biāo)準(zhǔn)，也是影響各地感染率高低不同的因素之一。但本文采用了相同的檢測(cè)方法，結(jié)果顯示榆林地區(qū)和商洛地區(qū)的感染率仍存在巨大差異，說(shuō)明除了檢測(cè)方法的影響外，可能還有其它地域性的因素也是影響HPV感染的重要原因。了解各地HPV感染的差異性及可能的原因，可為我國(guó)HPV流行病學(xué)調(diào)查及其流行趨勢(shì)提供重要的資料，更為疾病防治及地方公共衛(wèi)生政策的制定提供重要的參考依據(jù)。

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