·論著·

長春新堿致兔耳緣化療性靜脈炎模型的建立

邱騰穎1，蔡金寶2，史和秀3，劉一群4，徐芬芳5

(1. 福建衛(wèi)生職業(yè)技術學院藥理學教研室，福州 350101；2. 福建衛(wèi)生職業(yè)技術學院信息技術教研室，福州 350101；3. 福建衛(wèi)生職業(yè)技術學院病理學教研室，福州 350101；4.福建衛(wèi)生職業(yè)技術學院基礎護理教研室，福州 350101；5. 莆田學院藥學與醫(yī)學技術學院藥學2013級學生，福建莆田 351100)

[摘要]目的：用長春新堿(vincristine,VCR)建立家兔化療性靜脈炎(chemotherapeutic phlebitis,CP)模型。方法： 42只日本大耳白兔隨機分成3組：對照組、0.01% VCR組和0.02% VCR組，每組14只，分別從耳緣靜脈注射0.9% NaCl注射液2 ml/kg、0.01% VCR 0.2 mg/kg和0.02% VCR 0.2 mg/kg。根據給藥速度不同(左耳12 ml/h、右耳6 ml/h)，每組又分為A、B兩個亞組。用數字皮溫計測定給藥前和給藥后不同時間的兔耳緣皮溫；肉眼觀察外觀變化，并根據嚴重程度記分。于給藥后48、96 h隨機各取7只家兔處死。取耳緣組織切片，光鏡下觀察病理改變，記錄每個標本各種病理變化的分值，并計算每個標本炎癥反應積分。結果： 與對照組比較，兔耳皮溫在給藥后12 h開始下降，變化可持續(xù)到給藥后48 h，甚至84 h(P<0.01,P<0.05)。注射局部肉眼觀察及組織病理學觀察可見：相同濃度的VCR，注射速度慢比注射速度快引起的CP更嚴重，而注射速度相同時，低濃度VCR引起的CP比高濃度嚴重。結論：兔耳緣靜脈以6 ml/h注射0.01% VCR 0.2 mg/kg建立的CP最嚴重。

[關鍵詞]長春新堿；化療藥物；靜脈炎；家兔

[中圖分類號]R979.1，R965.1[文獻標志碼]A

DOI：10.5428/pcar20150116

基金項目福建衛(wèi)生職業(yè)技術學院課題(0012-2-09)

作者簡介邱騰穎(女)，副教授. E-mail: qmx6367115@126.com

[收稿日期]2014-03-16

Development of a rabbit model of chemotherapeutic phlebitis induced by vincristine

QIU TengYing1，CAI JinBao2，SHI HeXiu3，LIU YiQun4，XU FenFang5(1. Department of Pharmacology，Fujian College of Health Occupation and Technology, Fuzhou 350101，China；2. Department of Information Technology, Fujian College of Health Occupation and Technology，Fuzhou 350101，China；3. Department of Pathology, Fujian College of Health Occupation and Technology，Fuzhou 350101，China；4. Teaching Office of Basic Nursing, Fujian College of Health Occupation and Technology，Fuzhou 350101，China；5. School of Pharmaceutical and Medical Technology,Putian College,Student of Grade 2013, Fujian Putian 351100，China)

ABSTRACT[]Objective: To develop a rabbit model of chemotherapeutic phlebitis (CP) induced by vincristine (VCR). Methods: Forty-two Japanese rabbits were randomly divided into 3 groups： the control group, the 0.01% VCR group and the 0.02% VCR group, each consisting of 14 animals. The animals in each group were intravenously administered in the vein of the ear edge respectively with normal saline (0.9% NaCl) at a dosage of 2 ml/kg, 0.01% VCR at a dosage of 0.2 ml/kg and 0.02% VCR at a dosage of 0.2 ml/kg. Depending on the rate of infusion (12 ml/h for the left ear and 6 ml/h for the right ear), the experimental groups were further divided into 2 subgroups. Dermal temperature at the edge of the ear was detected with digital dermal thermometer at various time points both before and after medication. Outward appearance was observed with naked eye and scores were recorded in accordance with the severity of symptoms. Seven rabbits randomly chosen from the 3 animals groups were sacrificed at 48 h and 96 h after medication. Samples were collected from the ear tissue for pathological changes under electron microscope, fractional values of pathological changes in each sample were recorded, and inflammatory response scores for each sample were calculated accordingly.Results: As compared with that of the control group, dermal temperature in the ear began to descend at 12 h after medication, and this descending trend could continue till 48 h or even 84 h after medication (P<0.01, P<0.05). Visual and histopathological observations revealed the following facts: at the same dosage, CP at injected sites induced by slow injection rate seemed to be more serious, when compared with that done by rapid injection rate, while at the same injection rate, CP induced by high-concentration VCR was more serious, as compared with that induced by low-concentration VCR. Conclusion: CP at the edge of the rabbit ear induced by an injection rate of 6 ml/h and with dosages of 0.01% VCR and 0.2 mg/kg was the most serious.

[KEY WORDS]vincristine; chemotherapeutics; phlebitis; rabbit

[Pharm Care Res，2015，15(1): 56-59]

當今，化學治療已成為惡性腫瘤綜合治療的三大主要手段之一。但外周靜脈注射化療藥時，由于化療藥本身毒性、刺激性、制劑的pH值等因素常導致靜脈炎發(fā)生, 其臨床表現為沿穿刺靜脈走向出現紅腫和疼痛, 皮膚下出現紅線, 嚴重者可致受累靜脈出現條索狀改變和結節(jié)[1]，甚至出現局部皮膚水皰、潰瘍、皮下組織壞死以及功能障礙等嚴重并發(fā)癥。由于化療藥物種類繁多, 經外周靜脈注射后發(fā)生靜脈損傷的機制研究及防護方案種類各異[2],而針對其動物模型建構的文獻報道又很少，因此, 有必要建立相關動物模型,進而對化療性靜脈炎(chemotherapeutic phlebitis,CP)的發(fā)生機制和病理反應過程進行研究，為臨床采取有效防護方案奠定基礎。長春新堿(vincristine,VCR)為植物生物堿類抗腫瘤藥，具有較強的刺激性和毒性，其制劑pH值較低，經外周靜脈給藥時，CP的發(fā)生率較高，且價格較低廉，故選其作為化療性靜脈損傷模型用藥。本研究觀察靜脈注射VCR的濃度、速度與靜脈病理損傷程度的關系，初步建立VCR的CP模型。

1材料

1.1藥物和儀器長春新堿(規(guī)格: 1 mg/支，江蘇豪森制藥有限公司)；0.9% NaCl注射液(NS，規(guī)格: 250 ml/瓶，福州海王福藥制藥有限公司)。MoDel AJ-03微量注射泵(北京鑫禾豐醫(yī)療技術有限公司)；MOTIC BA200顯微鏡(麥克奧迪實業(yè)集團有限公司)；Wi84861數字皮溫度計[東西儀(北京)科技有限公司]。

1.2動物日本大耳白兔(普通級)，體重2.0～2.5 kg，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司[動物合格證號:SCXK(滬)2012-0002]。

2方法

2.1動物分組及化療性靜脈炎模型建立日本大耳白兔42只，雌雄各半，根據體重分層，采用隨機數字表將家兔隨機分成3組：對照組、0.01% VCR組和0.02% VCR組，每組14只，分別耳緣靜脈注射NS 2 ml/kg、0.01% VCR 0.2 mg/kg和0.02% VCR 0.2 mg/kg，進針長度1 cm。另外，根據給藥速度不同(左耳為12 ml/h、右耳為6 ml/h)，共分成6個亞組：慢速對照組、快速對照組、VCR低濃慢速組、VCR低濃快速組、VCR高濃慢速組、VCR高濃快速組，每組7只白兔。

2.2觀察指標

2.2.1皮溫測量在環(huán)境溫度24 ℃、兔安靜狀態(tài)下，在兩耳緣靜脈穿刺點、穿刺點延進針方向1 cm、2 cm處，分別用Wi84861數字皮溫度計測其溫度，并求這三點溫度的均值。測定時間點為給藥前、給藥后6、12、24、36、48、60、72、84、96 h。

2.2.2靜脈炎肉眼觀察參照宋向陽等[2]的方法將靜脈炎評價標準分為5個等級，5個等級分別計為0、1、2、3、4分。應用雙盲法肉眼觀察靜脈炎程度，觀察時間點同2.2.1項，統(tǒng)計每組各個分值的動物數。

2.2.3組織病理學觀察靜脈注射后48 h，3組中的每組處死7只家兔；余7只在靜脈注射后96 h處死。雙側耳緣靜脈于穿刺點沿進針方向以1 cm為規(guī)格，連取2段耳廓組織，用4%甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)病理切片，HE染色。在MOTIC BA200顯微鏡下觀察組織病理變化，觀察指標為：血管內皮細胞脫落、血管周圍組織水腫、炎癥細胞浸潤和血管內血栓形成等[2，3]。每個項目分為4個等級:無(-)、輕微(+)、中度(++)、重度(+++)，分別為0、1、2、3分，結果由病理專業(yè)人員盲法判斷。每個標本炎癥反應積分值=血管內皮細胞脫落分值+血管周圍組織水腫分值+炎癥細胞浸潤分值+血管內血栓形成分值之和。因此每個標本炎癥反應積分最低為0，最高為12。

2.3統(tǒng)計學處理耳緣皮膚溫度采用ANOVA檢驗，用SNK進行多亞組平均數的兩兩比較。靜脈炎肉眼觀察結果和組織病理學結果,采用Kruskal-WallisH檢驗和Mann-WhitneyU檢驗。

3結果

3.1耳緣靜脈注射VCR對兔耳皮溫的影響結果表明，慢速對照亞組與快速對照亞組的皮溫在任何時間點均基本相同。與對照組比較，低濃快速、高濃慢速、高濃快速3個亞組的兔耳皮溫在給藥后12 h開始下降，變化可持續(xù)到給藥后48 h(P<0.05,P<0.01)。而低濃度慢速亞組皮溫在給藥后24 h開始下降，持續(xù)到給藥后84 h(P<0.01,P<0.05)。

3.2注射局部的肉眼觀察結果靜脈注射不同濃度的VCR后6～96 h，兔耳注射局部肉眼觀察見有不同程度的紅、腫等炎癥反應癥狀。低濃慢速亞組靜脈注射后48 h，耳緣靜脈周圍紅、腫，靜脈充血，顏色黑暗；高濃慢速亞組家兔耳緣靜脈周圍紅、腫，靜脈充血,但顏色較淺；而低濃快速亞組和高濃快速亞組家兔耳緣靜脈只在注射部位有些發(fā)紅，其他不明顯。

從每只家兔靜脈炎的分值可見，低濃慢速亞組和高濃慢速亞組在給藥后12 h，低濃快速亞組在給藥后24 h，高濃快速亞組在給藥后36 h開始，靜脈炎的分值顯著高于對照組(P<0.05，P<0.01)。除高濃慢速亞組持續(xù)到48 h外，其余3個亞組均持續(xù)到給藥后96 h以上(P<0.05，P<0.01)。低濃慢速亞組炎癥反應持續(xù)時間最長，達84 h以上(給藥后12 h至96 h)，其次是低濃快速亞組，達72 h以上，而最短的是高濃慢速亞組，僅持續(xù)36 h。

另外，注射后36和48 h，低濃慢速亞組的靜脈炎分值顯著高于低濃快速亞組(P<0.05，P<0.01)，提示靜脈注射相同濃度VCR，注射速度慢比注射速度快引起的炎癥反應嚴重。注射后48 h低濃慢速亞組的靜脈炎分值顯著高于高濃慢速亞組(P<0.01)，提示注射速度均是6 ml/h時，注射0.01%VCR引起的炎癥反應比注射0.02%VCR時嚴重(因篇幅所限，各時間點具體分值表略)。

3.3組織病理學觀察結果由病理切片在光鏡下的觀察結果可見，注射部位有不同程度的血管內皮細胞脫落、血管周圍組織水腫、炎癥細胞浸潤和血管內血栓形成，見圖1。

圖1　長春新堿致兔耳緣靜脈炎組織病理切片圖(×100) Figure 1　Histopathology diagram of ear phlebitis induced by vincristine(×100) A: 對照組；B: 0.02% 長春新堿 6 ml/h(高濃慢速)亞組；C：0.01% 長春新堿 6 ml/h(低濃慢速)亞組

由圖1可見，對照組兔耳緣靜脈除了輕度水腫外，血管內皮細胞排列整齊(見圖1A)；VCR組兔耳緣靜脈大量炎細胞浸潤(見圖1B)；管腔內皮細胞脫落、血管壁嚴重受損及血栓形成(見圖1C)，具備了輸液性靜脈炎的基本病理特征。

根據評分標準，各種病理變化分值的標本數見表1；根據各種病理變化分值所計算的每個標本炎癥反應的積分見表2。

由表2可見，不同濃度及注射速度的VCR 亞組在注射后48、96 h，注射局部炎癥反應積分均顯著高于快速或慢速對照亞組(P<0.05，P<0.01)。由表2還可見，靜脈注射相同濃度的 VCR，注射速度6 ml/h引起的炎癥反應比注射速度12 ml/h嚴重(P<0.05，P<0.01)。而注射速度相同時，注射0.01%VCR引起的炎癥反應比注射0.02%VCR時嚴重(P<0.05)。

4討論

藥物輸液致靜脈炎是臨床常見的藥源性疾病之一, 而在此疾病中以化療藥導致的靜脈炎發(fā)病率最高。本研究結果顯示，4個VCR亞組家兔給藥后12～24 h 開始，耳緣靜脈注射局部皮膚溫度降低，快速：12 ml/h，慢速：6 ml/h；低濃：0.01%，高濃：0.02%；VCR；長春新堿可持續(xù)36～84 h，用手觸摸感覺濕且冰涼，這可能與血管受損，失去彈性，血液循環(huán)受阻有關。注射VCR后，肉眼觀察見注射部位有不同程度的炎癥反應。組織病理學檢查可見不同嚴重程度的血管內皮細胞脫落、血管周圍組織水腫和炎性細胞浸潤、血管內血栓形成，這均符合臨床輸液性靜脈炎的病理學特征，說明作者成功地建立了CP模型。

表1　各亞組靜脈注射長春新堿后48、96 h

表2　各亞組靜注長春新堿后48、96 h

*P<0.05，**P<0.01，與對照組比較；△P<0.05,與相同注射速度的高濃VCR組比較；▲P<0.05,▲▲P<0.01,與相同濃度的快速組比較；VCR：長春新堿；快速：12 ml/h，慢速：6 ml/h；低濃：0.01%，高濃：0.02%

從肉眼觀察及組織病理學檢查結果得出：注射速度相同時，0.01%VCR引起的靜脈炎比0.02%VCR引起的靜脈炎嚴重。藥物濃度低反而炎癥嚴重的原因，是因為藥物濃度低，則容積大，在劑量相等的情況下, 藥液容積的增多, 延長了藥液推注的時間, 同時延長了藥液在靜脈內存留的時間, 靜脈損傷的程度也相應增加[2,5]。說明給藥時間對靜脈炎的影響或許大于藥物濃度的影響。

對于輸液速度對靜脈炎的影響尚存在爭議,大多數研究者認為輸液速度加快, 靜脈炎發(fā)生率越高，他們認為輸液速度加快，液體對血管側壁的壓力增大, 靜脈回流受阻, 藥物不能及時稀釋, 因此對血管壁的刺激作用更大，同時血管因缺乏正常的血液供應, 更易發(fā)生損傷, 使靜脈炎、外滲等的發(fā)生率增加[6,7]。而作者的結果與陳立紅等[8]報道相同，即輸注速度越慢,輸注時間越長,靜脈炎發(fā)生率及嚴重程度也越高。根據層流原理,當藥物溶液快速進入血管后可形成與血液平行且獨立分層的液體流，而當藥物溶液滴速減慢, 與血液的流速逐漸接近時,藥物溶液與血液相混合，從而造成更多接觸血管內皮細胞，內皮細胞即開始發(fā)生損傷[7]，故更易導致靜脈炎的發(fā)生。同時，滴速慢，滴注時間則長，這也易導致靜脈炎。

綜上所述，以不同速度(6、12 ml/h)兔耳緣靜脈注射不同濃度(0.01%、0.02%)VCR 0.2 mg/kg，均可建立CP動物模型，其中以6 ml/h速度注射0.01% VCR 0.2mg/kg建立的CP最嚴重。

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[修回日期]2015-01-15

[本文編輯]貢沁燕