■藍漢冰 陳翠英 黃永政 葉觀林 陳玉敏 廖 健 譚秀花 朱旺明

（1.佛山市信豚生物科技有限公司，廣東佛山528211；2.廣州市信豚水產(chǎn)技術有限公司，廣東廣州510642）

維生素A具有促進生長、維持繁殖性能和視覺功能正常及提高疾病抵抗力等重要生理功能，是魚類維持正常生理功能不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)之一。研究發(fā)現(xiàn)大多水產(chǎn)動物體內(nèi)不能合成維生素A，食物缺乏維生素A時均會出現(xiàn)明顯的癥狀，如生長緩慢、厭食、貧血、夜盲癥及骨骼畸形等。但食物中過量的維生素A對魚類具有一定的毒性，如死亡率增加、生長下降、脊椎生長異常、肝臟脂肪含量和肝臟指數(shù)降低等癥狀。加州鱸（Micropterus salmoides），又名大口黑鱸，為肉食性溫水魚類，具有生長快、肉質(zhì)鮮美、抗病力強等優(yōu)點，是我國養(yǎng)殖的主要淡水魚品種之一。當前加州鱸養(yǎng)殖以投喂冰鮮雜魚為主，或采用冰鮮雜魚與飼料混合投喂的方式，由于其營養(yǎng)需求、消化吸收和代謝機制的研究相對缺乏，人工配合飼料的研制一直未能取得重大突破。目前，有關加州鱸蛋白質(zhì)、脂肪和個別維生素的營養(yǎng)需求研究已有報道，但對維生素A的營養(yǎng)生理作用研究不多，未見有報道關于在配合飼料中添加維生素A對加州鱸的生長、飼料利用率、肝臟維生素A含量及血清生化指標的影響。因此，研究配合飼料中不同水平維生素A對加州鱸生長、飼料利用率、肝臟維生素A含量及血清生化指標的影響，為確定加州鱸飼料中維生素A適宜供給量和進一步指導生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

飼料以維生素A醋酸酯作為添加源，分別按照維生素A含量為0（對照組）、15、30、60和120 mg/kg添加，以微晶纖維素為填充劑，使各試驗組飼料其它營養(yǎng)水平保持一致。維生素A醋酸酯（維生素A含量為50萬IU/g）購自浙江新和成股份有限公司。采用反相高效液相色譜法測得上述5組飼料中維生素A的實際添加量分別為3.59、16.26、33.19、63.65和116.49 mg/kg。所有飼料原料經(jīng)80目過篩，充分混勻后制成粒徑為3 mm的膨化飼料，烘干后置于4℃冰箱保存?zhèn)溆?。試驗飼料組成及營養(yǎng)成分見表1。

1.2 試驗魚與飼養(yǎng)管理

試驗于2015年7～9月在佛山市信豚生物科技有限公司南沙中試實驗中心進行，加州鱸購于南海優(yōu)鱸一號加州鱸魚苗廠，先放入暫養(yǎng)箱中用基礎飼料（見表1）馴養(yǎng)2周至其完全適應池塘網(wǎng)箱試驗環(huán)境。馴養(yǎng)結(jié)束后，選取平均體重為(38.31±0.26)g的健康加州鱸幼魚750尾，隨機分在15個網(wǎng)箱（2.5 m×1.5 m×2 m）中，每個網(wǎng)箱50尾，分別投喂5組飼料，每組飼料3個重復，飼養(yǎng)周期為8周。每天投喂兩次（8：00和17：00），投喂率為體重的2%～4%，同時根據(jù)水溫、天氣和魚的攝食情況調(diào)整投喂量。每天記錄投喂量和試驗魚的死亡數(shù)據(jù)，并定期檢查水體的氨氮、亞硝酸鹽、溶解氧等理化因子。試驗期間水溫為28.0～32.0℃左右，露天養(yǎng)殖，自然光照，pH值為7.2～7.8，水中氨氮含量 0.1～0.2 mg/l，亞硝酸鹽小于 0.05 mg/l，溶氧大于5.0 mg/l。

表1 加州鱸試驗飼料配方及營養(yǎng)成分

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束前，停食24 h，然后對每個網(wǎng)箱中的所有加州鱸進行計數(shù)、稱重，記錄生長情況。從每個網(wǎng)箱隨機撈取5尾魚，測定體重、體長等相關指標，同時進行血液和肝臟樣品的采集。用1 ml無菌注射器尾靜脈采血，置于無菌離心管中，4℃靜置12 h后，3 500×g離心10 min，制備血清，-80℃保存?zhèn)溆?。取肝臟組織，剔除其表面的結(jié)締組織附著物，并按重量1∶10加入PBS（pH值7.4）緩沖液，均漿機高速均漿后，3 500×g低溫離心20 min，取上清液，置于-80 ℃保存?zhèn)溆?。另每箱隨機取4尾魚，擦干體表水分，經(jīng)液氮速凍后保存于-20℃，用于全魚常規(guī)營養(yǎng)成分的分析。

1.4 指標測定與分析

1.4.1 生長性能指標的測定

成活率（SR，%）=試驗結(jié)束時魚尾數(shù)/試驗開始時尾數(shù)×100；

增重率（WG，%）=（終末體重-初始體重）/初始體重×100；

特定生長率（SGR，%/d）=ln（試驗魚末重/試驗魚初重）/飼養(yǎng)時間×100；

飼料系數(shù)（FCR）=飼料攝食量/試驗魚增重；

蛋白質(zhì)效率（PER）=試驗魚增重/（試驗魚飼料攝食量×飼料蛋白含量）；

臟體比(VSI，%)=試驗魚內(nèi)臟重/試驗魚體重×100；

肝體比(HSI，%)=試驗魚肝臟重/試驗魚體重×100；

脂體比(IPF，%)=試驗魚腹腔脂肪重/試驗魚體重×100；

魚體肥滿度（CF，g/cm3）=試驗魚體重/試驗魚體長3×100。

1.4.2 常規(guī)營養(yǎng)成分分析

飼料、全魚和肝臟的粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和水分按照國標GB/T 6432—1994、GB/T 6433—2006、GB/T 6438—2007和GB/T 6435—2014方法測定的。飼料和肝臟維生素A的含量按照國標GB/T 17817—2010中的皂化提取法進行提取，然后采用反相高效液相色譜法分析。

1.4.3 血清生化指標的分析

血清堿性磷酸酶（ALP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GTP）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）活性及甘油三酯（TG）和總膽固醇（TCHO）的含量均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定，具體測定參照試劑盒說明書進行。

1.5 統(tǒng)計分析

采用SPSS16.0對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。在單因素方差分析（One-Way ANOVA）達到顯著水平時（P＜0.05），采用Turkey’s檢驗進行多重比較，數(shù)據(jù)表示為“平均值±標準誤（±SE）”。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料維生素A水平對加州鱸生長和飼料利用率的影響（見表2）

表2 飼喂不同維生素A含量對加州鱸生長性能和飼料利用率的影響

由表2可知，飼料中高水平的維生素A對加州鱸的增重率和特定生長率有影響，而對飼料系數(shù)和蛋白質(zhì)效率的影響不顯著（P＞0.05）。當飼料維生素A添加量為63.65 mg/kg時，試驗魚的增重率和特定生長率顯著高于對照組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）。對照組試驗魚的成活率稍低于各維生素A添加組，但各組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 飼料維生素A水平對加州鱸形體指標和體成分的影響（見表3及表4）

由表3可知，飼料中維生素A的添加水平影響了加州鱸的臟體比和肥滿度，但對肝體比和脂體比的影響不顯著（P＞0.05）。隨著飼料維生素A添加水平的增加，加州鱸的臟體比升高，且添加量高達63.65 mg/kg和116.49 mg/kg試驗魚的臟體比顯著高于其余各組（P＜0.05）。而加州鱸的肥滿度隨著飼料維生素A添加水平的增加而下降，且添加量為63.65 mg/kg和116.49 mg/kg組的肥滿度顯著低于對照組和16.26 mg/kg維生素A添加組（P＜0.05）。此外，添加量高達116.49 mg/kg組的試驗魚出現(xiàn)輕微的骨骼畸形癥狀。由表4可知，飼料中高水平維生素A對加州鱸魚體常規(guī)營養(yǎng)成分的影響不顯著（P＞0.05）。

表3 飼喂不同維生素A含量對加州鱸形體指標的影響

表4 飼喂不同維生素A含量對加州鱸魚體成分的影響(%)

2.3 飼料維生素A水平對加州鱸肝臟脂肪和肝臟維生素A含量的影響（見表5及圖1）

由表5可知，加州鱸肝臟的脂肪含量隨著飼料中維生素A添加水平的增加而降低，且添加量為116.49 mg/kg組試驗魚的肝臟脂肪含量顯著低于對照組（P＜0.05）。肝臟維生素A含量與飼料維生素A添加水平顯著正相關（Y=0.489 9X-0.339,R2=0.995 8，P＜0.01）（見圖1），且飼料維生素A添加量較高的兩組（63.65 mg/kg和116.49 mg/kg）肝臟維生素A含量顯著高于維生素A含量較低組（3.59、16.26和33.19 mg/kg）（P＜0.05）。

表5 飼喂不同維生素A含量對加州鱸肝臟脂肪和維生素A含量的影響

圖1 加州鱸肝臟維生素A含量與飼料維生素A添加水平的關系

2.4 飼料維生素A水平對加州鱸血清生化指標的影響

由表6可知，飼料中添加高水平的維生素A顯著降低了加州鱸血清中的總膽固醇（TCHO）含量（P＜0.05），但對血清甘油三酯（TG）含量的影響不顯著（P＞0.05）。各維生素A添加組的血清堿性磷酸酶（ALP）活性低于對照組，但組間差異不顯著（P＞0.05）。飼料中添加高水平的維生素A提高了加州鱸血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GTP）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的活性，且添加量為63.65 mg/kg組的血清GOT活性顯著高于對照組（P＜0.05）。

3 討論

維生素A是魚類生長發(fā)育必需的營養(yǎng)素，但飼料中維生素A水平過高也會抑制魚類的生長。研究發(fā)現(xiàn)，日本比目魚（Paralichthys olivaceus）幼魚攝食過量的維生素A（50 000 IU/kg）會出現(xiàn)生長受阻、骨骼畸形及體長變短等癥狀。攝食飼料維生素A含量為938 mg/kg后，大西洋鮭（Salmo salar）出現(xiàn)死亡率增加、生長下降及脊椎生長異常等中毒癥狀。高水平維生素A（40 000 IU/kg）也會導致尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）出現(xiàn)生長受阻、厭食、死亡率增加、尾鰭壞死、體表出血及骨骼畸形等相似的中毒癥狀。在本試驗條件下，當飼料維生素A為3.59～63.65 mg/kg時，加州鱸的增重率和特定生長率隨著維生素A水平的增加而升高，但當飼料維生素A水平高達116.49 mg/kg時，加州鱸的增重率和特定生長率卻出現(xiàn)下降的趨勢，同時出現(xiàn)輕微的骨骼畸形癥狀。這與楊奇慧等(2007)在幼建鯉（Cyprinus carpio var.jian）上的研究結(jié)果相似。已有研究表明，雜交條紋鱸（Morone chrysops female×Morone saxatilis）飼料維生素A的需要量在0.51～40.52 mg/kg，而Brecka等(1996)也建議加州鱸飼料中維生素A的適宜添加量為20 mg/kg。本試驗研究結(jié)果表明，在需要量基礎上適當提高維生素A水平可以促進加州鱸的生長，但超過一定量的維生素A（116.49 mg/kg）反而不利于加州鱸的生長和骨骼發(fā)育。

表6 飼喂不同維生素A含量對加州鱸血清生化指標的影響

飼料中維生素A水平過高除了表現(xiàn)出明顯的外觀癥狀，還會引起內(nèi)臟器官和體成分發(fā)生變化。攝食維生素A含量高達750 mg/kg的飼料可導致溪紅點鮭（Salvelinus fontinalis）的體脂含量和肝臟指數(shù)降低。楊奇慧等(2007)也發(fā)現(xiàn)，攝食維生素A含量在34.14 mg/kg以上的飼料可導致幼建鯉的肝體指數(shù)、脾體指數(shù)和后腎體指數(shù)下降。而高水平維生素A（40 000 IU/kg）會導致尼羅羅非魚肝脾腫大。本試驗發(fā)現(xiàn)，攝食高水平維生素A（63.65 mg/kg以上）的飼料顯著提高了加州鱸的臟體比，降低了肝臟脂肪含量，但對肝體指數(shù)和體成分含量沒有明顯的影響。關于維生素A對魚類機體組織器官的影響機制目前還不清楚，需要進一步的深入研究。此外，飼料中維生素A水平還會顯著影響魚類肝臟維生素A的含量。本試驗發(fā)現(xiàn)，加州鱸肝臟的維生素A含量隨著飼料維生素A含量的增加而呈顯著線性增加，這與楊奇慧等(2007)在幼建鯉上的研究結(jié)果一致。說明肝臟是機體貯存維生素A的主要器官，其維生素A含量的變化直接反映機體維生素A的攝入情況，同時具有調(diào)節(jié)外周維生素A含量的能力。

由于血清中大部分ALP來源于肝臟與骨骼，因此血清ALP活性常作為檢測肝臟和骨骼代謝狀況的指標之一。通常認為，當血清ALP活性異常升高有2種情況，一是生理性升高，二是病理性偏高。但本研究發(fā)現(xiàn)，高水平維生素A降低了血清ALP的活性，這與閻佩佩等在肉雞和Liu等在武昌魚（Megalobrama amblycephala）上的研究結(jié)果一致?？赡苁沁^量維生素A抑制了加州鱸成骨細胞活性，對骨骼發(fā)育造成不利影響，致使血清ALP活性下降。Moren等認為過高或過低的維生素A水平都會降低大西洋比目魚（Hippoglossus hippoglossus）小腸刷狀緣膜的ALP活性。此外，血清ALP活性還受其它多種因素的影響，如飼料中鋅和維生素D3的水平，因此，關于維生素A對加州鱸血清ALP的影響機制還需進一步的深入研究。

在正常的新陳代謝過程中，動物血清中會維持一定水平的轉(zhuǎn)氨酶活性。但當肝臟組織發(fā)生病變時，細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶大量地釋放到血清中，從而引起血清中的GOT和GTP活性超過正常水平，因此，血清轉(zhuǎn)氨酶活性大小可反映肝臟受損的程度。本試驗中，攝食高水平維生素A的加州鱸血清GOT和GTP活性都高于維生素A低水平組（對照組），尤其是63.65 mg/kg添加組GOT的活性顯著高于對照組的，說明過量添加維生素A對加州鱸肝臟造成了一定的毒害作用。飼料中添加過量維生素A也會引起日本比目魚和武昌魚血清GOT和GTP水平的升高，而肝臟又是合成膽固醇和甘油三酯的主要器官，當肝臟嚴重損傷時，膽固醇和甘油三酯合成減少，血清中膽固醇和甘油三酯的含量也就隨之下降。本試驗中，血清總膽固醇的含量隨著飼料維生素A水平的增加而顯著降低，說明盡管高水平（63.65～119.49 mg/kg）維生素A對加州鱸生長的抑制作用不是很明顯，但對加州鱸肝臟還是會產(chǎn)生一定的毒害作用，這也可能是加州鱸肝臟脂肪含量降低的其中一個原因。

4 結(jié)論

在本試驗條件下，飼料中添加適宜含量的維生素A可以促進加州鱸的生長，過量的維生素A會抑制加州鱸的生長，建議加州鱸飼料維生素A的添加量不能高于63.65 mg/kg，更為確切的添加量有待進一步的研究。

（參考文獻27篇，刊略，需者可函索）