孫 浩，陳樹霞，江浩軍，王光明

（1.淮安市動物疫病預(yù)防控制中心江蘇淮安223001；2.淮安市淮陰區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心江蘇淮安223300）

淮安市布魯氏菌病血清學調(diào)查分析

孫 浩1，陳樹霞1，江浩軍1，王光明2

（1.淮安市動物疫病預(yù)防控制中心江蘇淮安223001；2.淮安市淮陰區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心江蘇淮安223300）

為了解淮安市奶牛布魯氏菌病發(fā)病和流行情況，筆者于2010-2014年對淮安市奶牛布魯氏菌病進行血清學檢測，2010年2 852份樣品檢出45份陽性，陽性率1.58%；2011年1 919份樣品檢出85份陽性，陽性率4.43%；2012年1 875份樣品檢出39份陽性，陽性率2.08%；2013年1 333份樣品檢出18份陽性，陽性率1.35%；2014年2 156份樣品檢出17份陽陽性率0.79%。數(shù)據(jù)表明淮安市奶牛布魯氏菌病陽性率呈逐年下降趨勢。

布魯氏菌??；血清學檢測；防控措施。

布魯氏菌?。˙ruellosis）是由布魯氏桿菌引起的急、慢性人畜共患病，簡稱“布病”。該病主要侵害生殖器官，引起胎膜發(fā)炎、流產(chǎn)、不育、睪丸炎等，給畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類健康帶來嚴重危害，被列為二類動物疫病[1]。在家畜中，牛、羊、豬最常發(fā)生。母畜比公畜、成年畜比幼年畜發(fā)病多。目前，包括美國等國家在內(nèi)的170多個國家和地區(qū)有人畜布魯氏菌病的存在和流行，我國受布魯氏菌病威脅的人口約有3.5億[2]。但也有國家成功根除了奶牛布病，如澳大利亞，其成功經(jīng)驗是：定期檢測、淘汰陽性牛、對畜群的流動實行嚴格的限制措施以確保健康牛群遠離布病[3]。

淮安市為奶牛養(yǎng)殖大市，每天向光明、衛(wèi)崗、伊利等大中型乳品生產(chǎn)加工企業(yè)提供生鮮乳，把好乳品質(zhì)量源頭關(guān)尤為重要。為全面掌握全市奶牛布魯氏菌病發(fā)病和流行情況，2010-2014年筆者使用虎紅平板凝集試驗（RBPT）和試管凝集試驗(SAT)對全市奶牛進行布魯氏菌病血清學調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 被檢血清

2010-2014年，共采集4個縣（區(qū)）的83個規(guī)模養(yǎng)殖場、75個散養(yǎng)戶奶牛血清樣品10 135份，其中2010年為2 852份、2011年為1 919份、2012年為1 875份、2013年為1 333份、2014年為2 156份。所有被采樣的奶牛均未注射布魯氏菌病疫苗。

1.2 診斷試劑

布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗抗原、布氏桿菌病試管凝集試驗抗原、陰性、陽性血清。診斷試劑均由青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.3 檢測方法

1.3.1 RBPT用移液器吸取30 μL抗原加在潔凈的玻璃板上，然后加入30 μL待檢血清，用移液器吸頭混勻抗原和被檢血清，在室溫條件下，4 min內(nèi)觀察結(jié)果，同時作陰、陽性血清對照[4]。

1.3.2 SAT抗原稀釋SAT抗原作1∶20稀釋使用。比濁對照管配制1∶20稀釋抗原，用等量稀釋液稀釋(1∶40稀釋)后，再用稀釋液配制成含1∶40抗原0%、25%、50%、75%、100%的懸液。血清稀釋：被檢血清及陰、陽性對照血清都作25、50、100、200倍稀釋?？乖脱甯骷?.5 mL混合，置37±l℃溫箱反應(yīng)24 h，取出與比濁對照管比較讀取結(jié)果[4]。

被檢血清先用RBPT進行初篩，對篩選出可疑或陽性樣品進行SAT確診。

1.4 結(jié)果判斷

1.4.1 RBPT在陰性對照不出現(xiàn)凝集且陽性對照出現(xiàn)凝集時，試驗成立。被檢血清在試4 min內(nèi)出現(xiàn)凝集現(xiàn)象判為陽性，如沒有凝集現(xiàn)象則判為陰性。1.4.2 SAT陰性血清對照和抗原對照不出現(xiàn)凝集（－），陽性血清的凝集價達到其標準效價±1個滴度，則試驗成立。在1∶100血清稀釋度出現(xiàn)“++”以上（含“++”）的凝集現(xiàn)象時，被檢血清判定為陽性，否則，判定為陰性。

2 結(jié)果

2010年2 852份樣品檢出45份陽性，陽性率1.58%；2011年1 919份樣品檢出85份陽性，陽性率4.43%；2012年1 875份樣品檢出39份陽性，陽性率2.08%；2013年1 333份樣品檢出18份陽性，陽性率1.35%；2014年2 156份樣品檢出17份陽性，陽性率0.79%（詳見表1、表2）。

表1 2010-2014年布魯氏菌病檢測情況匯總表

表2 虎紅平板凝集試驗（RBPT）與試管凝集試驗（SAT）對比

3 討論

1）不同年份的RBPT和SAT陽性吻合率差別較大，比顧冬花[5]檢測的陽性吻合率平均低14.03%。RBPT主要用于大批量樣品的陽性初篩，由于其特異性不高，受試驗溫度和凝集時間相對較短的影響，不易準確判定結(jié)果[6]。SAT特異性和敏感性高，檢測較準確，判定上更精確，RBPT初篩陽性的，可以用SAT確診。

2）2011年檢測出的布魯氏菌病陽性牛數(shù)量是其他年份的2～4倍，筆者通過流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2011年的陽性牛主要集中在淮陰區(qū)某奶牛養(yǎng)殖場，該養(yǎng)殖場在2008-2010年間均未檢測出布魯氏菌病陽性牛，2011年出現(xiàn)的陽性牛主要是外源性輸入，可能是外來車輛及人員工具進出消毒不嚴，場內(nèi)人員外出活動頻繁，場區(qū)消毒措施不到位，環(huán)境衛(wèi)生差，導致外界病菌傳入，使用的凍精也有可能帶菌，使得該場檢出布病陽性率較高。

3）從檢測數(shù)據(jù)看，布魯氏菌病陽性牛數(shù)量在2011年達到最大，以后逐年呈下降趨勢，這與淮安市采取有效的布魯氏菌病防控措施分不開。

4）在每年常規(guī)檢測中也遇到一些問題，如有些養(yǎng)殖戶疫病防控意識淡薄，拒絕布魯氏菌病檢測，而監(jiān)督執(zhí)法部門沒有強硬的處置措施，導致奶牛檢測工作存在真空。當前物流運輸業(yè)發(fā)達，有些養(yǎng)殖戶從外地購買奶牛時不向動物防疫部門申報檢疫，私自引進，造成動物疫病的跨區(qū)域傳播流行。在RBPT初篩后待確診的一個月時間內(nèi)，對養(yǎng)殖戶的RBPT陽性牛監(jiān)管存在空白，有些養(yǎng)殖戶會擅自將初篩陽性牛轉(zhuǎn)賣給其他養(yǎng)殖戶，另外，養(yǎng)殖戶沒有專門的隔離區(qū)域，初檢陽性牛與健康?；祓B(yǎng)，導致布魯氏菌病在牛群間相互感染和傳播，無法徹底根除。

4 防控措施

1）實行定期檢測，凈化疫病。每年春秋季各進行1次血清學檢測，確診陽性牛及時撲殺淘汰。對免疫過布魯氏菌病疫苗的動物，免疫18個月后檢測確診陽性的，要予以撲殺，并進行無害化處理。每年配種前，對種公畜進行檢測，經(jīng)檢測合格后允許配種。

2）堅持自繁自養(yǎng)，避免外來病菌入侵。鼓勵養(yǎng)殖場（戶）自繁自養(yǎng)奶牛，不輕易從外地調(diào)入奶牛和犢牛。養(yǎng)殖場（戶）新購進奶牛后，需隔離觀察1個月，經(jīng)檢疫合格后，方可混群飼養(yǎng)。養(yǎng)殖場內(nèi)飼養(yǎng)人員、技術(shù)人員相對固定，場外人員不得隨意進入場區(qū)。

3）加強消毒滅源，消除疫情隱患。加強對場區(qū)內(nèi)牛舍、器具、車輛及人員的定期消毒，及時清掃奶牛排泄物，對流產(chǎn)胎兒、胎衣及墊料應(yīng)深埋或燒毀。定期更換門口消毒液。外來車輛、工具和人員需經(jīng)過嚴格消毒后進入。

4）強化動物監(jiān)督執(zhí)法力度。嚴格對初篩陽性牛的管控，杜絕陽性牛被販賣或私自宰殺。嚴格按照《布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范》，對確診陽性牛全部撲殺，并采取焚燒或深埋等無害化處理。規(guī)范生鮮奶收購程序，嚴禁收購未取得奶牛布魯氏菌病和結(jié)核病檢測合格證的養(yǎng)殖場（戶）的生鮮奶。

5）加大宣傳培訓，提高防范意識。廣泛宣傳布魯氏菌病的防控技術(shù)知識，使養(yǎng)殖場（戶）了解布魯氏菌病的危害性，掌握該病的預(yù)防和控制具體措施，逐步在養(yǎng)殖場內(nèi)凈化布魯氏菌病?！觯ň庉嫞黑w曉松）

[1] 劉耀興《鄉(xiāng)村獸醫(yī)實用診療手冊》[M].南京:江蘇科學技術(shù)出版社,2013:357.

[2] 吐爾洪,努爾,谷文喜,等.布魯菌病研究進展[J].動物醫(yī)學進展, 2007,28(7):82-87.

[3] 羅伯特·勒韓著《澳大利亞根除牛布氏菌病和結(jié)核病紀實》[M].北京:農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局/中國動物衛(wèi)生與流行病學中心,1996:4.

[4] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.GB/T 18646— 2002動物布魯氏菌病診斷技術(shù)[S].北京,中國標準出版社,2002.

[5] 顧冬花.牛布魯氏菌病血清學檢測報告[J].山東畜牧獸醫(yī),2013, (4):58-59.

[6] 李智紅,王芳蕊,韓克元,等.布魯氏菌病研究進展[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2013(5):14-15.