辛伐他汀對(duì)急性血栓性肺栓塞兔血清肝細(xì)胞生長因子的影響

楊永張艷敏1梁明亭駱峰武蕾李義波

(聊城市人民醫(yī)院心內(nèi)科，山東聊城252000)

摘要〔〕目的初步探討辛伐他汀對(duì)急性血栓性肺栓塞兔血清肝細(xì)胞生長因子(HGF)濃度變化的影響。方法采用兔自體血栓回輸法建立急性肺栓塞模型。選用30只健康新西蘭白兔，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、辛伐他汀組，每組10只。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清中HGF、腫瘤壞死因子(TNF)-α及白細(xì)胞介素(IL)-1β濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取兔肺組織觀察其病理變化。結(jié)果模型組肺栓塞后1 h HGF水平開始升高；于12 h達(dá)到高峰，與同期對(duì)照組相比有顯著差別(P<0.000 1)；模型組與同期辛伐他汀組相比，栓塞后1 h及6 h差異顯著(P=0.011 6,P=0.001)。實(shí)驗(yàn)中觀察到，血清TNF-α、IL-1β于栓塞后1 h明顯升高，于栓塞后3 h達(dá)高峰；與同期辛伐他汀組、對(duì)照組比較差異顯著(P<0.01)。肺組織病理變化顯示，模型組和辛伐他汀組可見肺動(dòng)脈內(nèi)均見多處血栓，肺泡萎陷、水腫，肺泡腔內(nèi)可見炎性細(xì)胞浸潤和少量紅細(xì)胞滲出液，而辛伐他汀組炎性反應(yīng)較模型組減輕。結(jié)論急性血栓性肺栓塞后，血清HGF及促炎細(xì)胞因子濃度升高；辛伐他汀可能通過抑制促炎細(xì)胞因子的釋放從而降低HGF的水平；HGF有望成為早期提示肺栓塞的生物學(xué)指標(biāo)之一。

關(guān)鍵詞〔〕肺栓塞；動(dòng)物模型；細(xì)胞因子；辛伐他汀；肝細(xì)胞生長因子(HGF)

中圖分類號(hào)〔〕R332；R563.5〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

通訊作者：張艷敏(1981-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事急診心肺血管各種急危重癥及急性中毒患者的搶救研究。

1聊城市人民醫(yī)院急診科

第一作者：楊永(1977-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事心血管急癥危重病的綜合搶救及心律失常的介入治療研究。

肺栓塞癥是一種嚴(yán)重威脅人類健康的常見的、多發(fā)的外周血管病之一〔1〕，由于其臨床表現(xiàn)各異，早期迅速作出診斷較困難。常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查沒有特異的生化指標(biāo)，常規(guī)胸片、血?dú)夥治龊托碾妶D有助于該病的診斷，但在確診肺栓塞時(shí)常常不可靠。肺動(dòng)脈造影是診斷肺栓塞的金標(biāo)準(zhǔn)，但要求昂貴的設(shè)備及有經(jīng)驗(yàn)的放射科醫(yī)師，且有其患者對(duì)造影劑過敏，限制了其廣泛應(yīng)用。肝細(xì)胞生長因子(HGF)是一種多功能性的間質(zhì)細(xì)胞源性細(xì)胞因子。目前，關(guān)于肺栓塞與HGF、促炎細(xì)胞因子與HGF的關(guān)系以及辛伐他汀對(duì)它們影響的研究較少。本文探討辛伐他汀對(duì)急性血栓性肺栓塞兔血清HGF的影響。

1資料與方法

1.1動(dòng)物分組健康新西蘭白兔30只(山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK20040013)，雌雄不限，體重(3.2±0.3)kg，月齡4～6個(gè)月，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、辛伐他汀組，每組10只。制模前治療組飼喂辛伐他汀(舒降之)10 mg·kg-1·d-1持續(xù)4 w〔2〕，模型復(fù)制成功后，繼續(xù)飼喂至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.2動(dòng)物模型的制備〔3〕稱取兔體重，用苯巴比妥鈉150 mg/kg腹腔注射麻醉后置于固定架上，在腹股溝區(qū)剪毛，用碘伏局部消毒，觸摸到股動(dòng)脈波動(dòng)，沿股動(dòng)脈走向穿刺股靜脈成功后，將5F鞘管擴(kuò)張鞘經(jīng)股靜脈插至右心房。將預(yù)先制備好的栓子注入，每次注入栓子0.5 ml，并用2 ml生理鹽水沖注，防止栓子嵌留在鞘管中，每隔5 min重復(fù)注入，栓子總量1 ml/mg。對(duì)照組以相同方式注入等量生理鹽水。通過導(dǎo)管注入造影劑及病理切片證實(shí)肺栓塞模型復(fù)制成功。

1.3實(shí)驗(yàn)方法每組于栓塞前1 h、栓塞后1、3、6、12、24、48、72 h取血1 ml，用4℃低溫離心機(jī)以3 000 r/min，10 min離心，收集上清液。樣本儲(chǔ)存在-80℃條件下待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清中腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-1β及HGF的濃度，操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4形態(tài)學(xué)觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)殺死家兔，開胸取肺組織, 觀察肺血管中栓子的形態(tài)及分布。于栓塞區(qū)取肺組織，10%甲醛固定，石蠟包埋，切片HE染色，光鏡下觀察肺組織病理變化。

2結(jié)果

2.1各組HGF濃度變化模型組肺栓塞后1、3、6、12、24、48 h HGF濃度開始明顯升高，于12 h達(dá)到高峰，分別與同期對(duì)照組相比有顯著差別(P<0.000 1)。模型組與同期辛伐他汀組相比，在栓塞后1、3、6 h差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.011 6,P=0.018 2,P=0.001)。栓塞后12 h HGF濃度達(dá)高峰，但此時(shí)模型組與辛伐他汀組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2各組TNF-α、IL-1β變化結(jié)果模型組與辛伐他汀組TNF-α、IL-1β濃度在肺栓塞1 h已經(jīng)升高，3 h濃度達(dá)到高峰，6 h基本恢復(fù)到正常水平。栓塞后1 h，模型組分別與同期對(duì)照組和辛伐他汀組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,P<0.05)。栓塞后3 h達(dá)高峰，與同期辛伐他汀組和對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.01)。見表2，表3。

2.3肺組織病理變化結(jié)果見圖1。模型組和辛伐他汀組可見到肺表面凹凸?fàn)睿闻蛎洸蝗?，有肺萎陷、散在暗紅色灶性出血現(xiàn)象。肺動(dòng)脈內(nèi)均見多處血栓，栓子結(jié)構(gòu)致密。肺泡萎陷，呈肺不張現(xiàn)象，部分肺泡水腫，肺泡腔內(nèi)可見大量炎性細(xì)胞浸潤和少量紅細(xì)胞滲出液。部分鏡檢可見肺靜脈淤血現(xiàn)象。辛伐他汀組雖有上述病理變化，但炎性反應(yīng)減輕。對(duì)照組兔肺未見上述病理變化。

表1　各組兔血清HGF的濃度變化

與同期對(duì)照組比較：1)P<0.01;與同期辛伐他汀組比較：2)P<0.05, 3)P<0.01

表2　各組兔血清TNF-α的濃度變化(ng/ml， x± s， n=10)

與同期對(duì)照組相比較:1)P<0.05,2)P<0.01；與治療組比較:3)P<0.05,4)P<0.01

表3　各組兔血清IL-1β的濃度變化(pg/ml， x± s， n=10)

與同期對(duì)照組相比較:1)P<0.05,2)P<0.01；與治療組比較:3)P<0.05,4)P<0.01

對(duì)照組(×4)

模型組(×10)

辛伐他汀組(×10)

3討論

急性肺栓塞是涉及細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的多種炎癥介質(zhì)參與的病理生理過程。近年來研究發(fā)現(xiàn)，HGF在肺動(dòng)脈結(jié)扎后肺缺血模型中表達(dá)異常，提示HGF參與了肺缺血損傷的病理生理過程〔4〕。HGF是一種間質(zhì)細(xì)胞源性的促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂的多功能因子，其合成、分泌受TNF-α、IL-1β因子的調(diào)節(jié)。研究顯示，HGF分泌與急性肺損傷患者支氣管肺泡灌注液中IL-β水平相關(guān)，給予IL-β抗體可一定程度抑制HGF的分泌〔5〕； TNF-α可促進(jìn)人類間充質(zhì)干細(xì)胞遷移并合成、分泌HGF，TNF受體Ⅱ抗體可抑制上述效應(yīng)〔6〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道的TNF-α、IL-1β有HGF的合成、分泌的效應(yīng)，提示在急性血栓性肺栓塞時(shí)TNF-α、IL-1β可能參與了上調(diào)HGF的表達(dá)。

他汀類藥物是HMG-COA還原酶抑制劑，常用來調(diào)脂，近年來研究顯示它具有獨(dú)立于調(diào)脂外的作用，如抗炎、免疫抑制、抑制血小板聚集、保護(hù)血管內(nèi)皮、減輕心肌缺血再灌注性損傷等作用。有研究證實(shí)在炎癥反應(yīng)中，辛伐他汀可通過抑制TNF-α、IL-1α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有效地保護(hù)內(nèi)皮祖細(xì)胞〔7〕。本研究結(jié)果提示辛伐他汀可能通過抑制促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β降低了它們對(duì)HGF的刺激誘導(dǎo)作用，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

目前，HGF在肺栓塞動(dòng)物模型的研究中較少，Nagai等〔4〕結(jié)扎肺動(dòng)脈建立的肺缺血模型與肺栓塞還不完全相同。臨床上關(guān)于肺栓塞患者血漿及肺組織HGF水平變化規(guī)律及意義國內(nèi)外均未見相關(guān)報(bào)道，因此有待進(jìn)一步探討。急性肺栓塞后血清HGF濃度升高，辛伐他汀抗感染治療后可降低其水平，因此HGF有可能成為診斷并評(píng)價(jià)肺血栓栓塞預(yù)后的新生物學(xué)指標(biāo)之一。

4參考文獻(xiàn)

1翟振國, 王辰. 肺栓塞-深靜脈血栓形成的研究現(xiàn)狀與展望〔J〕. 中國實(shí)用內(nèi)科雜志,2006;26(14):1050-2.

2Yao HW, Mao LG, Zhu JP. Protective effects of pravastatin in murine lipopolysaccharide-induced acute lung injury〔J〕. Clin Exp Pharmacol Physiol,2006;33 (9): 793-7.

3季穎群, 高鶴立, 張中和. 家兔自體血凝塊制備肺栓塞模型的探討〔J〕.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理, 2001;18(4):1-4.

4Nagai K, Aoe M, Shimizu N. Rapid response of hepatocyte growth factor in pulmonary ischemia in a rat model〔J〕. Acta Med Okayama, 2004;58(3):119-25.

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6Zhang A, Wang Y, Ye Z,etal. Mechanism of TNF-α-induced migration and hepatocyte growth factor production in human mesenchymal stem cells〔J〕.J Cell Biochem, 2010;111(2):469-75.

7Henrich D, Seebach C, Wilhelm K,etal. High dosage of simvastatin reduces TNF-α-induced apoptosis of endothelial progenitor cells but fails to prevent apoptosis induced by IL-1beta in vitro〔J〕.J Surg Res, 2007;142(1):13-9.

〔2014-01-12修回〕

(編輯安冉冉/曹夢(mèng)園)