烏頭注射液對(duì)疼痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用

付雯雯薛巖1劉軍2江一川張虹于曉風(fēng)曲紹春睢大筼

(吉林大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，吉林長(zhǎng)春130021)

摘要〔〕目的觀察烏頭注射液在多種疼痛模型下的鎮(zhèn)痛作用。方法ICR小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組，烏頭注射液低、中、高劑量(0.5、1.0、2.0 mg/kg)組，陽(yáng)性對(duì)照藥益賽普組(14 mg/kg)；對(duì)照組和益賽普組于實(shí)驗(yàn)第1、4天皮下注射給藥，烏頭注射液各組肌肉注射給藥，連續(xù)7 d。Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組，烏頭注射液低、中、高劑量(0.4、0.8、1.6 mg/kg)組，陽(yáng)性對(duì)照藥益賽普(10 mg/kg)組；對(duì)照組和益賽普組于實(shí)驗(yàn)第1、4天皮下注射給藥。烏頭注射液各組肌肉注射給藥，連續(xù)7 d。采用小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)、小鼠熱板實(shí)驗(yàn)、大鼠光熱致痛甩尾實(shí)驗(yàn)3個(gè)疼痛模型，研究烏頭注射液的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果烏頭注射液能顯著減少醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)，提高小鼠熱板法和大鼠光熱致痛法痛閾。結(jié)論烏頭注射液對(duì)多種疼痛模型均具有明顯對(duì)抗作用。

關(guān)鍵詞〔〕烏頭注射液；鎮(zhèn)痛

中圖分類號(hào)〔〕R971.1〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20115071)

通訊作者：睢大筼(1957-)，男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事心血管與腫瘤藥理學(xué)研究。

1吉林大學(xué)第一醫(yī)院燒傷外科2吉林大學(xué)第二醫(yī)院骨科醫(yī)院

第一作者：付雯雯(1986-)，女，在讀博士生，主要從事心血管與腫瘤藥理研究。

烏頭注射液是從生川烏、生草烏中提取出的總生物堿制劑，臨床主要用于治療胃癌、肝癌等晚期癌癥疼痛。本研究選用熱板法〔1〕、甩尾法〔2〕和扭體法3種刺激的痛模型，觀察烏頭注射液的鎮(zhèn)痛作用，為治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料和方法

1.1動(dòng)物ICR小鼠，雌雄兼用，體重18～22 g，合格證號(hào)：SCXK-(吉)2007-0003，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心供給；Wistar雄性大鼠，體重180～200 g，合格證號(hào)：SCXK-(吉)2007-0003，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心供供給。動(dòng)物于專用實(shí)驗(yàn)室內(nèi)分籠飼養(yǎng)，自由攝食飲水。

1.2實(shí)驗(yàn)藥品及儀器烏頭注射液，0.62 mg/ml，由上海北杰集團(tuán)關(guān)東藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)：20110401，實(shí)驗(yàn)時(shí)以生理鹽水配制成所需濃度；注射用重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白(益賽普)，由上海中信國(guó)健藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20110411，實(shí)驗(yàn)時(shí)以注射用水配制成所需濃度；乙酸，由北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào)：20100804；YLS-6A智能熱板儀，由成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)；SW-200光熱尾痛測(cè)試儀，由成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1小鼠熱板實(shí)驗(yàn)ICR雌性小鼠，18～22 g(初篩，痛閾<30 s為合格小鼠)。篩出合格的小鼠60只，用智能熱板儀測(cè)量各鼠藥前痛閾值(測(cè)兩次取其平均值，兩次測(cè)量前后間隔>5 min)。對(duì)照組和烏頭注射液各組小鼠肌肉注射給藥，1次/d，連續(xù)7 d。益賽普組小鼠于實(shí)驗(yàn)第1、4天皮下注射給藥。實(shí)驗(yàn)第7天于藥后0.5、1、1.5、2、3、4、5、6 h時(shí)測(cè)定各鼠痛閾值〔3〕。若痛閾值超過60 s，停止測(cè)試按60 s計(jì)。并按照下式計(jì)算出痛閾提高百分率，比較組間差異。痛閾提高百分率(%)=(用藥后平均痛閾值-用藥前平均痛閾值)/用藥前平均痛閾值×100%。

1.3.2大鼠光熱致痛甩尾實(shí)驗(yàn)Wistar雄性大鼠，130～180 g(進(jìn)行初篩，5 s<甩尾時(shí)間<30 s為合格大鼠)。取合格的大鼠60只，根據(jù)體重隨機(jī)將其分為空白對(duì)照組(注射用水)，烏頭注射液低、中、高劑量(0.4、0.8、1.6 mg/kg)組，益賽普(10 mg/kg)組，每組12只。用光熱尾痛測(cè)試儀測(cè)量大鼠的甩尾時(shí)間，測(cè)兩次取其平均值作為藥前痛閾?？瞻讓?duì)照組和烏頭注射液各組大鼠肌肉注射給藥，1次/d，連續(xù)7 d。益賽普組大鼠于實(shí)驗(yàn)第1、4天皮下注射給藥。于末次藥后1、2、3、4、5、6 h分別測(cè)定各大鼠的痛閾〔3〕，并按照下式計(jì)算反應(yīng)抑制百分率，比較各組之間的差異。反應(yīng)抑制百分率(%)=(藥后痛閾-藥前痛閾)/中斷照射時(shí)間×100%。

1.3.3小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)ICR雄性小鼠60只，18～22 g，根據(jù)體重將其隨機(jī)分為對(duì)照組(注射用水)，烏頭注射液低、中、高劑量(0.5、1.0、2.0 mg/kg)組，陽(yáng)性對(duì)照藥益賽普組(14 mg/kg)，每組12只。對(duì)照組和烏頭注射液各組小鼠肌肉注射給藥，1次/d，連續(xù)7 d。陽(yáng)性藥對(duì)照組小鼠于實(shí)驗(yàn)第1、4天皮下注射給藥。實(shí)驗(yàn)第7天，每只小鼠腹腔注射1%冰醋酸0.1 ml/10 g致痛，記錄開始出現(xiàn)扭體的時(shí)間及15 min內(nèi)扭體次數(shù)〔3〕，比較組間差異。整個(gè)實(shí)驗(yàn)溫度應(yīng)控于(20±1)℃。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS12.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1烏頭注射液對(duì)小鼠熱板致痛的影響與對(duì)照組相比，烏頭注射液1.0 mg/kg可顯著提高藥后4 h小鼠熱板法痛閾(P<0.05)；烏頭注射液2.0 mg/kg可顯著提高藥后1、1.5、2、3、4、5 h小鼠熱板法痛閾(P<0.05或P<0.01)；烏頭注射液0.5 mg/kg對(duì)小鼠熱板法痛閾無明顯影響(P>0.05)。見表1。

2.2烏頭注射液對(duì)大鼠光熱致痛的影響與空白對(duì)照組相比，烏頭注射液0.8 mg/kg可顯著提高藥后1、2、3 h大鼠光熱致痛法痛閾(P<0.05)；烏頭注射液1.6 mg/kg可顯著提高藥后1、2、3、4 h大鼠光熱致痛法痛閾(P<0.05)；烏頭注射液0.4 mg/kg對(duì)光熱致痛法痛閾無明顯影響(P>0.05)。見表2。

2.3烏頭注射液對(duì)醋酸致小鼠扭體的影響與對(duì)照組相比，烏頭注射液1.0、2.0 mg/kg均可顯著抑制小鼠扭體次數(shù)(P<0.05)；烏頭注射液0.5 mg/kg對(duì)小鼠扭體次數(shù)無明顯的影響(P>0.05)。見表3。

表1　烏頭注射液對(duì)小鼠熱板致痛的影響 ± s， n=12，%)

與對(duì)照組比較：1)P<0.05；2)P<0.01；下表同

表2　烏頭注射液對(duì)大鼠光熱致痛的影響 ± s， n=12，%)

表3　烏頭注射液對(duì)醋酸致小鼠扭體的影響 ± s， n=12)

3討論

疼痛是由實(shí)質(zhì)性或潛在性組織損傷所引起的不愉快感覺〔4〕，同時(shí)也是一種預(yù)警機(jī)制，防止機(jī)體遭壓迫或進(jìn)一步損傷，是當(dāng)今困擾人類健康的嚴(yán)重問題之一〔5〕。疼痛研究已經(jīng)成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)問題。常見的動(dòng)物疼痛模型包括物理刺激致痛模型和化學(xué)刺激致痛模型。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者多表現(xiàn)為明顯的關(guān)節(jié)腫痛。一般認(rèn)為在傷害性刺激作用下，組織釋放各種致痛因子，如氫離子、鉀離子、組胺等，刺激痛受體，在游離神經(jīng)末梢產(chǎn)生痛覺傳入沖動(dòng)，沖動(dòng)傳至高級(jí)中樞引起疼痛。實(shí)驗(yàn)中采用的熱板法引起的舔足反應(yīng)和醋酸致小鼠扭體反應(yīng)在較高級(jí)中樞完成，而甩尾法引起的甩尾反應(yīng)主要由脊髓參與完成。利用不同模型可以了解烏頭注射液作用部位，所選用的動(dòng)物模型操作簡(jiǎn)便，便于觀察，效果比較穩(wěn)定。結(jié)果表明烏頭注射液能顯著減少醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)，提高小鼠熱板法和大鼠光熱致痛法痛閾，提示烏頭注射液有較好的鎮(zhèn)痛作用。

4參考文獻(xiàn)

1Bomholt SF,Mikkelsen JD,Blackburn-Munro G.Antinociceptive effects of the antidepressants amitriptyline,duloxetine,mirtazapine and citalopram in animal models of acute,persistent and neuropathic pain〔J〕.Neuropharmacology,2005；48(2): 252-63.

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3李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006：241-7.

4周秋雯,徐建國(guó).慢性疼痛動(dòng)物模型的研究進(jìn)展〔J〕.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào),2008；21(6): 638-42.

5王曉玲,樂健,洪戰(zhàn)英,等.中藥鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)的研究進(jìn)展〔J〕.藥學(xué)服務(wù)與研究,2011；11(3): 213-7.

〔2015-06-20修回〕

(編輯曲莉)