陳 蘭 王雪蓮

（西南藥業(yè)股份有限公司，中國(guó) 重慶400038）

多西他賽為紫杉醇類抗腫瘤藥，通過(guò)干擾細(xì)胞有絲分裂和分裂間期細(xì)胞功能所必須的微管網(wǎng)絡(luò)而起抗腫瘤作用。多西他賽可與游離的微管蛋白結(jié)合，促進(jìn)微管蛋白裝配成穩(wěn)定的微管，同時(shí)抑制其解聚，導(dǎo)致喪失了正常功能的微管束的產(chǎn)生和微管的固定，從而抑制細(xì)胞的有絲分裂。多西他賽自1995年在墨西哥、南非被批準(zhǔn)用于治療乳腺癌及非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)以來(lái),已在世界范圍內(nèi)51個(gè)國(guó)家獲準(zhǔn)使用,且在其中24個(gè)國(guó)家中,它是唯一被批準(zhǔn)用于治療晚期NSCLC的藥物[1]。

1 試驗(yàn)材料

1.1 儀器

Agilet 1100高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），pHS-3C型pH計(jì)（上海雷磁儀器廠），YB-2型澄明度檢測(cè)儀（天津大學(xué)精密儀器廠），AB204-E電子天平（梅特勒-托利多）。

1.2 藥品與試劑

多西他賽（重慶泰濠制藥有限公司，批號(hào)：DO-0811001）；吐溫-80（日本三洋有限公司；無(wú)水乙醇（成都科龍有限公司）；活性炭（上海針用活性炭廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 多西他賽注射液的制備

準(zhǔn)確稱取多西他賽原料，放入配料罐中，并加入配置總量80%的無(wú)水乙醇，攪拌使原料完全溶解。在藥液中加入吐溫-80，攪拌均勻。將溶液稀釋至總重量。調(diào)節(jié)產(chǎn)品pH值。最后加入活性炭，攪拌靜止15分鐘，灌裝，冷凍干燥抽取乙醇，軋蓋。

2.2 多西他賽含量測(cè)定試驗(yàn)

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

儀器：高效液相色譜儀 色 譜 柱：C18（4.6×250mm，5μm，安捷倫）。流動(dòng)相：以水為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行線性梯度洗脫。檢測(cè)波長(zhǎng)：232nm。柱溫為45℃；流速為1.2ml/min；進(jìn)樣體積：20μl。稱取多西他賽定性對(duì)照品（包括多西他賽，雜質(zhì)b，雜質(zhì)d，雜質(zhì)e和雜質(zhì)f）適量，用溶劑[乙腈-水-乙酸（100：100：0.1）]溶解并稀釋至1mg/ml的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。取對(duì)照品溶液用溶劑配制成0.2μg/ml的溶液，作為靈敏度溶液。分別精密量取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液各20μl進(jìn)樣，系統(tǒng)性試驗(yàn)溶液色譜圖中多西他賽和雜質(zhì)b的分離度應(yīng)大于3.5，對(duì)照品溶液主峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于1.0%[2]。

表1

2.2.2 測(cè)定法

取本品的內(nèi)容物適量，精密稱定，用溶劑溶解并稀釋制成0.2mg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取多西他賽對(duì)照品約10mg，置50ml量瓶中，加2ml乙醇使溶解，加溶劑稀釋制成約含多西他賽0.2mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2.2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密稱取內(nèi)容物適量，用溶劑溶解并稀釋制成含多西他賽約0.2mg/ml的溶液，共6份，分別進(jìn)樣。

表2 含量系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

6份樣品的主峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.23%，主峰保留時(shí)間得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.16%，均小于1%，表明該方法系統(tǒng)適用性不錯(cuò)。

2.2.4 空白試驗(yàn)

按處方比例稱取輔料約10mg和制劑12mg各一份，分別置于10ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣，同時(shí)進(jìn)一份溶劑。結(jié)果：溶劑和輔料的吸收峰在主峰保留時(shí)間處均未有吸收峰出現(xiàn)，不干擾含量測(cè)定。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

①重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取內(nèi)容物適量，并稀釋制成含多西他賽約0.2mg/ml的溶液，共6份，分別取20μl進(jìn)樣。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 含量重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果：6次進(jìn)樣的平均峰面積為98.7%，RSD=0.46%，表明含量的重復(fù)性較好。

②中間精密度試驗(yàn)

由另外一人，另一天，用另外一臺(tái)液相檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 含量中間精密度試驗(yàn)結(jié)果

重復(fù)性和中間精密度試驗(yàn)12份溶液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.41%，可見(jiàn)此方法測(cè)定含量精密度較好。

2.2.6 溶液的穩(wěn)定性

取重復(fù)性試驗(yàn)的樣品溶液1份，在室溫下放置不同的時(shí)間，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 含量溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

供試品溶液在放置8小時(shí)后，含量基本無(wú)變化，可見(jiàn)溶液穩(wěn)定性很好。

2.2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱取多西他賽原料各三份，分別置于量瓶中，用溶劑溶解并稀釋至100ml，搖勻，分別進(jìn)樣，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 含量回收率試驗(yàn)結(jié)果

三個(gè)濃度下的平均回收率為99.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.34%，表明此方法測(cè)定含量的準(zhǔn)確度很好，可以對(duì)多西他賽進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

2.3 注射用多西他賽制備工藝的考察

2.3.1 質(zhì)量指標(biāo)

①性狀：白色凍干塊狀物。②pH測(cè)定：pH值應(yīng)為3.0~4.5。③水分：取本品，照水分測(cè)定法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅧM第一法A）測(cè)定，含水分不得過(guò)3.0%。④有關(guān)物質(zhì)測(cè)定：?jiǎn)蝹€(gè)雜質(zhì)峰面積不的過(guò)2.0%，總雜質(zhì)峰面積不得過(guò)5.0%。⑤含量測(cè)定：多西他賽含量用高效液相法測(cè)定，多西他賽含量應(yīng)在90%~105%范圍內(nèi)。

2.3.2 藥用炭的篩選

將多西他賽用無(wú)水乙醇溶解后，加入吐溫-80攪拌均勻后，分別加入0.01%、0.05%、0.1%的活性炭，攪拌均勻后，靜止15分鐘，粗濾，再通過(guò)0.22μm精濾，灌裝，冷凍抽乙醇后軋蓋。加入不同藥用炭試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 活性炭篩選結(jié)果表

結(jié)果顯示，活性炭對(duì)多西他賽的吸附不是很明顯，但一定量的活性炭有助于保證產(chǎn)品質(zhì)量，在多西他賽藥液中加入0.01%的活性炭，在大生產(chǎn)過(guò)程中既保證細(xì)菌內(nèi)毒素合格，又保證過(guò)濾系統(tǒng)能順利進(jìn)行。

2.3.3 凍干時(shí)間的篩選

多西他賽原料難溶于水，我們使用無(wú)水乙醇作為產(chǎn)品溶劑。因此多西他賽注射液需控制乙醇?xì)埩袅?。為保證有效去除無(wú)水乙醇，采取了分階段程序升溫的辦法，同時(shí)保證高真空度的條件下去除無(wú)水乙醇。我們分別考察了32小時(shí)、36小時(shí)、40小時(shí)、44小時(shí)時(shí)本品的無(wú)水乙醇?xì)埩袅孔罱K確定本品的冷凍干燥時(shí)間。無(wú)水乙醇?xì)埩袅康臏y(cè)定采用氣相色譜法測(cè)定。

表8 凍干時(shí)間與無(wú)水乙醇?xì)埩袅垦芯?/p>

根據(jù)實(shí)驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果，冷凍干燥32小時(shí)乙醇的殘留量符合標(biāo)準(zhǔn)要求，為保證在大生產(chǎn)過(guò)程中，產(chǎn)品的乙醇?xì)埩袅糠蠘?biāo)準(zhǔn)規(guī)定，因此選擇冷凍干燥時(shí)間為44小時(shí)。

2.3.4 結(jié)果

多西他賽溶液配制后加入0.01%活性炭后攪拌靜止15分鐘，藥液經(jīng)過(guò)0.45μm及0.22μm兩級(jí)過(guò)濾后灌裝，冷凍干燥44小時(shí)后，軋蓋。中試生產(chǎn)的三批樣品（批號(hào)：20130301、20130302、20130303），樣品經(jīng)過(guò)質(zhì)量檢測(cè)，各項(xiàng)指標(biāo)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。結(jié)果見(jiàn)表9。

3 討論

表9 三批試驗(yàn)結(jié)果表

多西他賽的藥理作用比紫杉醇強(qiáng)，在細(xì)胞內(nèi)濃度比紫杉醇高3倍，作為微管穩(wěn)定劑和裝配促進(jìn)劑，活性比紫杉醇大2倍；作為微管解聚抑制劑，活性比紫杉醇大2倍[3]，目前已在64個(gè)國(guó)家上市。因原料藥多西他賽難溶，使用乙醇作為溶劑。再與吐溫-80混合形成溶液，再采取冷凍干燥技術(shù)將混合溶液中的無(wú)水乙醇抽除。我們對(duì)多西他賽注射液進(jìn)行了處方篩選、凍干曲線的摸索等試驗(yàn)研究工作，研究結(jié)果表明，按照研制工藝中試生產(chǎn)的三批樣品均符合質(zhì)量要求，處方和工藝合理，利于生產(chǎn)操作，能保證產(chǎn)品質(zhì)量，生產(chǎn)效率高。

［1］姚和際,等.多西紫杉醇研究進(jìn)展及市場(chǎng)分析[J].中國(guó)制藥信息,2001,17(5):29-30.

［2］美國(guó)藥典[Z].USP35版.

［3］孫燕,李雛廉,管忠震.泰索帝治療晚期乳腺癌和肺癌[J].中國(guó)新藥雜志,1998,7(3):165-167.