安　峰，何薇薇，林媛媛，劉　博，段曉瑾

(1.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔科，河北 張家口 075000；

2.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000；

3.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院病案室，河北 石家莊 050011)

·論著·

涎腺黏液表皮樣癌中信號(hào)傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)及臨床意義

安峰1，何薇薇1，林媛媛2，劉博2，段曉瑾3

(1.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔科，河北 張家口 075000；

2.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000；

3.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院病案室，河北 石家莊 050011)

[摘要]目的探討信號(hào)傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial gravth factor,VEGF)在涎腺黏液表皮樣癌( mucoepidermoid carcinoma,MEC)中表達(dá)的臨床意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法，分別檢測(cè)STAT3、VEGF在20例正常涎腺組織、20例良性多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma，SPA)及82例MEC中的表達(dá)情況。結(jié)果MEC組STAT3、VEGF表達(dá)均高于正常涎腺組和SPA組(P<0.05)；在MEC組中病理分級(jí)Ⅲ級(jí)患者 STAT3和VEGF表達(dá)陽(yáng)性率高于病理分級(jí)Ⅰ級(jí)患者(P<0.05)； TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者STAT3和VEGF表達(dá)陽(yáng)性率高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ 期患者(P<0.05)；有淋巴轉(zhuǎn)移患者 STAT3和VEGF表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)。結(jié)論STAT3和VEGF共同參與MEC的發(fā)生發(fā)展，可為判斷涎腺M(fèi)EC 的預(yù)后提供參考。

[關(guān)鍵詞]涎腺腫瘤；STAT3轉(zhuǎn)錄因子；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子類

doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.05.014

涎腺黏液表皮樣癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)是一種常見(jiàn)于兒童和成人的涎腺腫瘤，鏡下由黏液細(xì)胞、中間細(xì)胞及表皮樣細(xì)胞構(gòu)成，約占涎腺惡性腫瘤的29.6%，好發(fā)于腮腺。2005年WHO曾采用Auclair等[1]提出的方法按照細(xì)胞分化程度、囊內(nèi)成分、神經(jīng)浸潤(rùn)、壞死、間變等情況綜合評(píng)分將其分為低度、中度及高度惡性3種級(jí)別。這3種分化級(jí)別提示了不同的腫瘤發(fā)展進(jìn)程及預(yù)后[2]，相對(duì)應(yīng)的具體治療方案也不同。治療方案主要還是采取手術(shù)方式，術(shù)后生存率較高；但如果出現(xiàn)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的患者，則預(yù)后較差。在促進(jìn)腫瘤分化、復(fù)發(fā)的機(jī)制中，微血管生成占據(jù)了重要一環(huán)。而信號(hào)傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)便具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)分化、血管增殖的功能[3]。以前的研究中我們注意到人體實(shí)體腫瘤細(xì)胞中都檢測(cè)到高水平的STAT3，并參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、抗凋亡和血管生成系統(tǒng)。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連接(streptavidin-perosidase,SP)法分別檢測(cè)STAT3和VEGF 在MEC中的表達(dá)，探討二者在MEC發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)作用，以及與臨床特征之間的關(guān)系。

1材料與方法

1.1一般資料收集1985—2011年間河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科經(jīng)手術(shù)切除的MEC石蠟標(biāo)本共82例，并選取20例涎腺良性多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma，SPA)及其周圍正常涎腺組織作對(duì)照。MEC組男性32例，女性50例，年齡19~80歲，平均(54.67±4.90)歲，其中18例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；均為首次發(fā)病，無(wú)術(shù)前放療或化療病史；參照WHO(2005)MEC的組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其進(jìn)行量化分級(jí)：Ⅰ級(jí)28例，Ⅱ級(jí)34例，Ⅲ級(jí)20例；按照國(guó)際抗癌聯(lián)盟臨床TNM分期法：Ⅰ+Ⅱ期59例，Ⅲ+Ⅳ期23例。SPA組男性7例，女性13例，年齡24~68歲，平均(51.90±9.48)歲。正常涎腺與SPA組來(lái)源于同一組病例。3組性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法選用鼠抗人STAT3和VEGF的單克隆抗體，利用免疫組織化學(xué)SP法進(jìn)行染色。每種抗體均采取陽(yáng)性(已知陽(yáng)性標(biāo)本)及陰性(PBS代替一抗)對(duì)照。

1.3結(jié)果判斷以細(xì)胞漿及胞膜有棕黃色顆粒為陽(yáng)性，按照10個(gè)高倍視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及染色強(qiáng)度的評(píng)分相加進(jìn)行綜合評(píng)分。陽(yáng)性率0分： ≤5%；1分：>5%～25%；2分：>25%~50%；3分：>51%~75%；4分：>75%。染色強(qiáng)度0分：無(wú)著色；1分：淡黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。0~3分為陰性，≥4分為陽(yáng)性，所有染色結(jié)果均由2位資深醫(yī)師進(jìn)行閱片判讀。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.13組STAT3和VEGF表達(dá)比較STAT3和VEGF陽(yáng)性顆粒均集中在細(xì)胞漿和(或)細(xì)胞膜，多呈均勻著色，偶爾呈小顆粒狀(圖1~6)。MEC組STAT3、VEGF表達(dá)均高于正常涎腺組和SPA組(P<0.05)，而SPA組與正常涎腺組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1　3組STAT3和VEGF表達(dá)比較Table 1　Expression of STAT3 and VEGF among three groups　(例數(shù)，%)

*P<0.05與正常涎腺組比較#P<0.05與SPA組比較(χ2檢驗(yàn))

2.2MEC組不同病理特征中 STAT3和VEGF的表達(dá)在MEC組中病理分級(jí)Ⅲ級(jí)患者STAT3和VEGF表達(dá)陽(yáng)性率高于病理分級(jí)Ⅰ+Ⅱ級(jí)患者(P<0.05)； TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者STAT3和VEGF表達(dá)陽(yáng)性率高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ 期患者(P<0.05)；有淋巴轉(zhuǎn)移患者 STAT3和VEGF表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)；不同性別和年齡MEC患者之間 STAT3和VEGF表達(dá)陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2　MEC中不同病理特征STAT3和VEGF的表達(dá)Table 2　Pathological features of STAT3 and VEGF in mucoepidermoid carcinoma　(例數(shù)，%)

2.3相關(guān)性分析MEC組中STAT3與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.226，P<0.05)。

3討論

MEC是口腔頜面部常見(jiàn)的涎腺惡性腫瘤之一，經(jīng)臨床研究分析，不同的病理組織學(xué)分級(jí)提示不同的生物學(xué)行為，且預(yù)后差異較大。低分化型較高分化型更易侵襲周圍組織并發(fā)生轉(zhuǎn)移，生存率也更低。腫瘤的影響因素很多，其中腫瘤內(nèi)血管增殖占據(jù)了重要的部分。不同腫瘤的生長(zhǎng)浸潤(rùn)以及向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移都將依賴于腫瘤內(nèi)新生性血管的形成[4]。腫瘤本身的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞在各種促血管生成因子作用下發(fā)生了一系列復(fù)雜的過(guò)程，涉及多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，如VEGF[5]即是其中關(guān)鍵性的組成部分。而STAT3則會(huì)直接影響VEGF的形成，促進(jìn)腫瘤內(nèi)血管的增殖[6]。

STAT3屬于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子家族(STATs)[7]，在細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的作用下，具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)分化、血管增殖的功能，并參與到腫瘤的免疫逃逸，為腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移提供了幫助，已被認(rèn)為是一種癌基因?，F(xiàn)今很多研究證實(shí)在惡性腫瘤如胃癌、肝癌[6]、白血病、涎腺樣囊性癌中，STAT3都具有與新生血管相關(guān)的高表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，STAT3在正常涎腺組織、SPA、MEC中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為5.0%、10.0%、36.6%，MEC組的STAT3陽(yáng)性表達(dá)率高于正常涎腺和SPA組(P<0.05)；鏡下可發(fā)現(xiàn)在腫瘤性新生血管豐富的區(qū)域如腫瘤浸潤(rùn)邊緣區(qū)，STAT3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量多且更加聚集，相反血管相對(duì)較少的腫瘤中心區(qū)域，其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量少且分散。說(shuō)明MEC中STAT3的過(guò)表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤血管的增殖，為腫瘤的生長(zhǎng)進(jìn)化以及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移提供了營(yíng)養(yǎng)及途徑。有研究也證實(shí)腫瘤細(xì)胞中STAT3的過(guò)表達(dá)，能夠誘導(dǎo)血管生長(zhǎng)因子VEGF的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和腫瘤的浸潤(rùn)[8]。

VEGF是最為重要的一種血管刺激因子，它在人類很多惡性腫瘤細(xì)胞中都呈高表達(dá)狀態(tài)，如乳腺癌、肺癌、卵巢癌[9]等。它的陽(yáng)性表達(dá)部位較為廣泛，可以出現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和部分血管內(nèi)皮細(xì)胞中。腫瘤細(xì)胞可以通過(guò)分泌VEGF來(lái)刺激其鄰近血管的內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖和轉(zhuǎn)化遷移[10]。這種新生的幼稚血管具有結(jié)構(gòu)和功能上的缺陷，導(dǎo)致血管通透性增加，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。并且它還能參加到免疫系統(tǒng)中使腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)控。本研究結(jié)果顯示，VEGF在正常涎腺組織、SPA、MEC中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為10.0%、25.0%、73.2%，MEC組VEGF陽(yáng)性表達(dá)率高于正常涎腺和SPA組(P<0.05)；它的陽(yáng)性表達(dá)區(qū)主要集中在腫瘤細(xì)胞的胞漿及胞膜上，且這些陽(yáng)性表達(dá)顯著的腫瘤細(xì)胞更多集中于腫瘤邊緣，即與周圍組織的交界浸潤(rùn)處。表明腫瘤細(xì)胞通過(guò)分泌VEGF作用于附近的血管內(nèi)皮細(xì)胞，從而影響其生長(zhǎng)與功能。

多年的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，VEGF的啟動(dòng)子上具有STAT3的結(jié)合位點(diǎn)序列，這種STAT3的反應(yīng)元件可以導(dǎo)致VFGF的異常活化，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[11-12]。本研究結(jié)果也顯示這兩者間呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)，在MEC中相互影響，與其預(yù)后密切相關(guān)。表明它們通過(guò)不同的影響方式，促進(jìn)腫瘤及其所需血管的生長(zhǎng)，并共同影響了機(jī)體的免疫系統(tǒng)，使腫瘤細(xì)胞逃脫機(jī)體的免疫監(jiān)控，加大了腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率[13]。

綜上所述，STAT3、VEGF在MEC中的表達(dá)明顯高于正常涎腺及SPA組，提示二者是MEC發(fā)生發(fā)展的重要原因之一。通過(guò)對(duì)這二者聯(lián)合表達(dá)的研究，可以對(duì)MEC的預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。(本文圖見(jiàn)封三)

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(本文編輯：許卓文)

[收稿日期]2015-03-09；[修回日期]2015-04-10

[基金項(xiàng)目]張家口市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃項(xiàng)目

[作者簡(jiǎn)介]安峰(1962-)，男，河北涿鹿人，河北北方學(xué)院附屬

[中圖分類號(hào)]R739.87

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)]1007-3205(2015)05-0540-04

Expression of signal transducer and activator of transcription 3 and vascular endothelial
growth factor in mucoepidermoid carcinoma and clinical significance

AN Feng1,HE Wei-wei1,LIN Yuan-yuan2,LIU Bo2，DUAN Xiao-jin3

(1.Department of Stomatology,the First Affiliated Hospital of Hebei North College,Hebei Province,

Zhangjiakou 075000，China;2.Department of Pathology,the First Affiliated Hospital of Hebei North

College,Hebei Province,Zhangjiakou 075000，China；3.Medical Record Room,the Fourth Hospital

of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050011,China)

[Abstract]ObjectiveTo study the expression and clinical significance of signal transducer and activator of transcription 3(STAT3) and vascular endothelial growth factor(VEGF) in mucoepidermoid carcinoma of salivary glands.MethodsThe immunohistochemical method SP was used to detect the expression of STAT3 and VEGF in 20 cases of normal salivary gland tissue,20 cases of salivary pleomorphic adenoma(SPA) and 82 cases of mucoepidermoid carcinoma(MEC).ResultsThe expression of STAT3 and VEGF in MEC group were higher than those of normal salivary gland group and SPA group(P<0.05);in MEC group,STAT3 and VEGF expression of pathological grade level Ⅲpatients were higher than those of pathological grade levelⅠpatients(P<0.05 );STAT3 and VEGF expression of TNM stage Ⅲ + Ⅳ patients were higher than those of TNM stage Ⅰ+Ⅱ patients(P<0.05);STAT3 and VEGF expression of lymph node metastasis in patients were higher than in patients without lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionSTAT3 and VEGF participated in the occurrence and development of MEC and should also be considered as significant indicators of prognosis in salivary gland MEC.

[Key words]salivary gland neoplasm;STAT3 transcription factor;vascular endothelial growth factors

(11110012D)； 河北北方學(xué)院自然科學(xué)面上項(xiàng)目(2013010)

第一醫(yī)院主任醫(yī)師，從事口腔頜面外科疾病診治研究。