HBV-DNA水平與乙型肝炎兩對半模式的相關(guān)性

譚斌楊文才李嘉龍麗余麗婭

(銅仁市人民醫(yī)院檢驗科,貴州銅仁554300)

摘要〔〕目的探討乙肝病毒(HBV)-DNA定量結(jié)果與乙型肝炎兩對半模式的相關(guān)性。方法收集該院感染科2011年6月至2013年12月住院和門診收治行HBV-DNA定量檢測和乙肝兩對半檢查的疑似乙肝患者600例，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定乙肝兩對半，熒光定量PCR法定量HBV-DNA，分析乙肝兩對半與HBV-DNA定量的關(guān)系。結(jié)果大三陽(HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性)者HBV-DNA陽性檢出率和HBV-DNA水平高于小三陽(HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性)患者(P<0.05)；乙型肝炎兩對半不同類型HBV-DNA 陽性檢出率和定量水平也不同，有相同的兩對半模式者HBV-DNA 含量也可能不同；HBeAg陽性與HBV-DNA水平呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論HBV-DNA水平可反映HBV復(fù)制水平，同時檢測乙肝兩對半可以提高臨床檢測效果。

關(guān)鍵詞〔〕HBV-DNA；病毒復(fù)制；乙型肝炎兩對半

中圖分類號〔〕R512.6+2〔

第一作者：譚斌(1971-)，男，副主任檢驗師，主要從事基因診斷研究。

乙型肝炎主要傳播途徑有血液傳播、性傳播、母嬰傳播〔1,2〕。據(jù)統(tǒng)計全世界超過50%人感染過乙型肝炎病毒(HBV)，無癥狀病毒攜帶者大約2.8億人，我國占1億〔3〕，大約5%轉(zhuǎn)為慢性肝炎難以治愈〔4〕。當(dāng)前臨床上診斷乙型肝炎主要通過檢測乙肝兩對半和HBV-DNA。本文定量分析HBV-DNA水平，并探討其與乙型肝炎兩對半模式的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1一般資料收集我院感染科2011年6月至2013年12月住院和門診收治行HBV-DNA定量檢測和乙肝兩對半檢查的疑似乙肝患者600例，其中男326例，女274例；年齡45～80〔平均(52.27±5.79)〕歲。都經(jīng)過血清乙肝五項檢查確診(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)，總共有五種組合類型：Ⅰ(大三陽)：HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性；Ⅱ(小三陽)：HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性；Ⅲ：HBsAg、HBeAg陽性；Ⅳ：HBsAg、抗-HBc陽性；Ⅴ：陰性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均符合臨床乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡45～80歲；②可以收集到患者檢查和治療的所有資料，并且發(fā)現(xiàn)未免疫系統(tǒng)或者惡性腫瘤性疾病；③符合倫理道德，家屬或者患者簽署了知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有嚴(yán)重的器官衰竭性疾病，或者內(nèi)分泌性疾病，或者合并有其他肝炎疾病，比如肝、腎衰竭、糖尿病等；②凡對試驗研究方案不依從、不配合、拒絕參加試驗者及試驗過程中不按照規(guī)定進(jìn)行檢查，或者在研究期間采用了其他治療措施或者轉(zhuǎn)院治療患者；③在治療過程中病情突然加重不能再參加試驗者。

1.2儀器和試劑達(dá)安DA7600 PCR儀；乙肝五項應(yīng)用美國biotek全自動酶標(biāo)儀測定；HBV-DNA定量檢測試劑盒(廣州達(dá)安基因公司)。

1.3研究方法抽取患者空腹靜脈血4 ml，3 000 r/min離心10 min,留取血清，-20℃保存待用。乙肝五項測定：應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定(ELISA法)，由我院檢驗科測定。乙肝兩對半正常值〔5〕:HBsAg<0.5 ng/ml 、HBsAb≤10 MIU/ml、HBeAg≤0.5 PEI U/ml 、HBeAb≤0.2 PEI U/ml、HBcAb≤0.9 PEI U/ml。HBV-DNA定量檢測：應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法：①血樣RNA的抽提；②RNA質(zhì)量檢測；③樣品cDNA合成；④樣品管家基因?qū)崟r定量PCR。⑤模板；⑥PCR，所有cDNA樣品分別配置實時定量 PCR反應(yīng)體系。⑦引物設(shè)計(應(yīng)用Primer Premier 5.0軟件)。⑧電泳；PCR產(chǎn)物與 DNA Ladder在2%瓊脂糖凝膠電泳，GoldView染色，檢測PCR產(chǎn)物是否為單一特異性擴(kuò)增條帶。結(jié)果判斷：≥103copies/ml為陽性,<103copies/ml為陰性。

2結(jié)果

2.1HBV-DNA陽性率及定量大三陽患者HBV-DNA陽性檢出率和HBV-DNA平均對數(shù)定量均高于小三陽患者，其中患者大三陽HBV-DNA水平最高(P<0.05)，見表1。

2.2HBV-DNA定量與e抗原的關(guān)系HBeAg陽性定量與HBV-DNA對數(shù)定量間呈正相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表1　HBV-DNA陽性率及定量

與Ⅱ型比較:1)P<0.05

表2　HBeAg定量與HBV-DNA對數(shù)定量的關(guān)系

3討論

乙型肝炎是我國病毒性肝炎中最重要的病原〔6〕。臨床上主要通過乙肝兩對半的陽性陰性判斷是否感染HBV〔7,8〕，但是常規(guī)乙肝兩對半檢測并不能特異性診斷HBV在患者體內(nèi)的復(fù)制及傳染的或者只能粗略估計病毒復(fù)制水平的初步檢查〔9〕，乙肝兩對半吸頭兩對半對病情嚴(yán)重程度評估參考性不大〔10〕。隨著醫(yī)學(xué)科技的發(fā)展，基因診斷技術(shù)也相應(yīng)成熟，熒光定量PCR法是疾病診斷的一種重要手段，由專門PCR儀封閉式的完成排除了很多干擾因素〔11〕。HBV-DNA檢查是判斷如何治療的參考依據(jù)，一般情況DNA水平越高，傳染性越強(qiáng)。

本研究說明大三陽患者體內(nèi)病毒復(fù)制和傳染最嚴(yán)重。乙型肝炎兩對半不同類型其HBV-DNA 陽性檢出率和定量水平也不同。因為HBeAg為乙肝e抗原為病毒復(fù)制標(biāo)志，這與HBV-DNA對數(shù)定量水平具有相同的作用。

綜上所述，HBV-DNA水平變化可以反映HBV復(fù)制水平和傳染能力大小，同時聯(lián)合檢測乙肝兩對半，可以提高臨床檢測效果，有助于臨床的診斷治療以及預(yù)防措施效果評價，同時也可以應(yīng)用到乙型肝炎早期診斷。

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〔2014-11-25修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)