胃癌中鳥(niǎo)嘌呤核苷酸解離抑制因子2表達(dá)與臨床病理的關(guān)系及羅格列酮對(duì)其表達(dá)的影響

遇常紅曲義坤1程開(kāi)

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化科，黑龍江佳木斯154002)

摘要〔〕目的探討胃癌組織中鳥(niǎo)嘌呤核苷酸解離抑制因子(RhoGDI)2的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系及可能機(jī)制。方法60例胃癌患者，取相鄰的胃癌癌旁組織為對(duì)照組。檢測(cè)兩組RhoGDI2的表達(dá)，并對(duì)RhoGDI2的表達(dá)與胃癌臨床病理進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果胃癌組織中RhoGDI2的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織(P<0.05)；胃癌組織中RhoGDI2表達(dá)的陽(yáng)性率(76.67%)顯著高于癌旁組織(45.00%)(χ2=2.491 8,P=0.012 7)；胃癌組織中RhoGDI2的表達(dá)與病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小有顯著相關(guān)性(P<0.05)；胃癌組織中RhoGDI2及MMP2表達(dá)水平明顯高于癌旁組織(P<0.01)；羅格列酮作用后胃癌組織中RhoGDI2 mRNA、MMP2 mRNA的表達(dá)水平明顯低于作用前(P<0.01)；羅格列酮作用前和作用后胃癌組織中RhoGDI2與MMP2的表達(dá)之間呈正相關(guān)(rs=0.595，P=0.000；rs=0.612，P=0.000)。結(jié)果RhoGDI2在胃癌中呈高表達(dá)；胃癌中RhoGDI2的表達(dá)參與了胃癌的發(fā)病、轉(zhuǎn)移和進(jìn)展；羅格列酮可以抑制RhoGDI2的表達(dá)；RhoGDI2可能通過(guò)調(diào)控MMP2的表達(dá)參與胃癌的發(fā)病、轉(zhuǎn)移及進(jìn)展。

關(guān)鍵詞〔〕胃癌；鳥(niǎo)嘌呤核苷酸解離抑制因子2；羅格列酮

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R737〔

基金項(xiàng)目：黑龍江省衛(wèi)生計(jì)生委科研課題(2014-207)

通訊作者：程開(kāi)(1978-)， 女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤研究。

1佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外科

第一作者：遇常紅(1977-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事胃腸病學(xué)研究。

胃癌是一種預(yù)后較差的消化系統(tǒng)惡性腫瘤〔1,2〕，具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明晰，近年來(lái)其發(fā)病率、死亡率呈逐年上升趨勢(shì)〔3,4〕。鳥(niǎo)嘌呤核苷酸解離抑制因子(RhoGDI)2為重要的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因〔5〕，在惡性腫瘤中可呈現(xiàn)異常表達(dá)，在機(jī)體腫瘤轉(zhuǎn)移及進(jìn)展過(guò)程中起重要作用〔6,7〕。本研究通過(guò)檢測(cè)胃癌中RhoGDI2的表達(dá)，旨在探討RhoGDI2在胃癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移和進(jìn)展中的可能作用機(jī)制。

1資料與方法

1.1一般資料2011年6月至2014年9月我院60例胃癌患者，男38例，女22 例；年齡45～85〔平均(57±5)〕歲，體重指數(shù)(21.61±3.12)kg/m2。均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)為胃癌，符合胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕。按照病理分期，Ⅰ期12例，Ⅱ期48例。取相鄰胃癌癌旁組織為對(duì)照組。獲我院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，并經(jīng)患者簽署知情同意書(shū)。均首次手術(shù)；已行常規(guī)影像學(xué)檢查；無(wú)嚴(yán)重心血管疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)〔5〕：近3個(gè)月內(nèi)接受靶向治療、放化療者；嚴(yán)重精神疾病者；肺結(jié)核者；免疫性疾病者；急性感染者；其他系統(tǒng)惡性腫瘤；過(guò)度飲酒者；資料缺失，未完成隨訪者。

1.2標(biāo)本采集冷凍癌組織和癌旁組織蠟塊，切片厚度約5 μm，在45℃水箱中展片，并于65°C烤箱中過(guò)夜。

1.3免疫組化檢測(cè)檢測(cè)RhoGDI2的表達(dá)，兔抗人RhoGDI2多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，鼠抗人RhoGDI2多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam 公司，試劑盒兔抗羊IgG二抗及SP試染色劑盒購(gòu)自上海華大科技有限公司。

1.4熒光定量PCR采用Trizol 法提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，使用SYBR Green Master Mix，行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)，以β-actin為內(nèi)參。RhoGDI2、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)2和β-actin的上游引物、下游引物見(jiàn)表1。PCR反應(yīng)步驟如下：94℃預(yù)變性3 min;94℃變性20 s，60℃退火30 s，72℃延伸40 s；35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min。

表1　RhoGDI2、MMP2和β-actin的引物序列

1.5判定標(biāo)準(zhǔn)染色細(xì)胞陽(yáng)性率：0 分為陰性；≤25%1分；>25%且≤50%2分；>50%且≤75%3分；>75%4分。0分陰性，1～2分弱陽(yáng)性，3分中等陽(yáng)性，4分強(qiáng)陽(yáng)性〔6〕。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，Pearson相關(guān)分析，秩和檢驗(yàn)，t檢驗(yàn)或單因素方差分析，Spearman檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1胃癌、癌旁組織中RhoGDI2的表達(dá)胃癌組織中RhoGDI2的表達(dá)水平高于癌旁組織(P<0.000 1)。見(jiàn)表2、圖1。

2.2胃癌組織、癌旁組織中RhoGDI2的檢測(cè)陽(yáng)性率胃癌組織中RhoGDI2表達(dá)的陽(yáng)性率(76.67%)顯著高于癌旁組織(45.00%)(χ2=2.491 8,P=0.012 7)。

表2　胃癌組織、癌旁組織中RhoGDI2的表達(dá)( n)

圖1　胃癌組織中RhoGDI2陽(yáng)性(SP，×400)

因素nRhoGDI2χ2或u值P值性別 男38280.71190.4766 女2218病理分期 Ⅱ期48402.42140.0155 Ⅰ期126年齡 ≥65歲26221.26230.2068 <65歲3424腫瘤部位 胰體位28200.88980.3736 胰頭3226腫瘤大小 >2cm52443.68030.0002 ≤2cm82分化程度 低分化34302.51280.0120 中分化1410 高分化126淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有40363.42440.0006 無(wú)2010

2.3胃癌組織中RhoGDI2的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系胃癌組織中RhoGDI2的表達(dá)與病理分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小有顯著相關(guān)性(P<0.05)。見(jiàn)表3。

2.4不同組織中RhoGDI2 mRNA、MMP2 mRNA的檢測(cè)胃癌組織中RhoGDI2及MMP2表達(dá)水平明顯高于癌旁組織(P<0.01)。見(jiàn)表4。

表4　不同組織RhoGDI2、MMP2 mRNA

2.5羅格列酮作用前后胃癌組織中RhoGDI2 mRNA、MMP2 mRNA的表達(dá)羅格列酮作用后胃癌組織中RhoGDI2 mRNA、MMP2 mRNA的表達(dá)水平(0.371±0.028)、0.321±0.029)明顯低于作用前(t=46.59、52.72，均P=0.000)。

2.6相關(guān)性分析羅格列酮作用前胃癌組織中RhoGDI2與MMP2的表達(dá)之間呈正相關(guān)(rs=0.595，P=0.000)；羅格列酮作用后胃癌組織中RhoGDI2與MMP2的表達(dá)之間呈正相關(guān)(rs=0.612，P=0.000)。

3討論

研究顯示，RhoGDI2參與了呼吸系統(tǒng)腫瘤、消化道腫瘤、泌尿系統(tǒng)腫瘤等惡性腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展，在上述惡性腫瘤組織中RhoGDI2可出現(xiàn)異常激活和表達(dá)〔8～11〕。胃癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，可由多種因素誘發(fā)〔12〕；近期研究〔11～14〕顯示，消化系統(tǒng)疾病中RhoGDI2表達(dá)水平可出現(xiàn)異常增強(qiáng)現(xiàn)象。Gildea等〔7〕檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤組織中RhoGDI2的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于良性病變及健康者。Li等〔14〕研究發(fā)現(xiàn)，RhoGDI2的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者預(yù)后及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可能起一定的促進(jìn)作用。本研究胃癌中RhoGDI2的表達(dá)水平高于癌旁組織，與相關(guān)文獻(xiàn)〔5〕結(jié)果一致。Cho等〔5〕研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者體內(nèi)生化指標(biāo)的表達(dá)與機(jī)體臨床病理狀況有關(guān)。本研究提示RhoGDI2的表達(dá)與胃癌的臨床病理密切相關(guān)，上述指標(biāo)的表達(dá)在胃癌的進(jìn)展中亦起一定的作用。該結(jié)果與Yi等〔12〕的研究報(bào)道一致。

研究顯示，MMP2與胃癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，在胃癌的進(jìn)展中起重要作用。本研究胃癌組織中RhoGDI2 mRNA及MMP2 mRNA的檢測(cè)水平明顯高于癌旁組織，與相關(guān)文獻(xiàn)〔5〕報(bào)道一致。本文表明RhoGDI2及MMP2可能共同參與了胃癌的發(fā)病及進(jìn)展。RhoGDI2可能通過(guò)調(diào)控MMP2的表達(dá)參與胃癌的發(fā)病及進(jìn)展。Li等〔14〕在研究中亦發(fā)現(xiàn)，RhoGDI2可通過(guò)調(diào)控機(jī)體體內(nèi)一系列生化指標(biāo)的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和進(jìn)展。RhoGDI2參與胃癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移和進(jìn)展的可能機(jī)制有：①RhoGDI2在抑制機(jī)體免疫功能的同時(shí)，促進(jìn)腫瘤血管生成及細(xì)胞增殖〔5〕；②RhoGDI2通過(guò)上調(diào)MMP2的表達(dá)參與胃癌的進(jìn)展及腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移〔15,16〕。

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〔2014-09-27修回〕

(編輯苑云杰)