γ-干擾素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠左室質(zhì)量指數(shù)及糖基化終末產(chǎn)物的影響

劉暢李莉崔天祥趙狄劉洪洋

(鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，河南鄭州450000)

摘要〔〕目的研究γ-干擾素(INF)對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)及糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)的影響。方法選取16周齡雄性SHR(SPF級(jí)別)32只，按照完全隨機(jī)法1∶1分成2組，將16只予生理鹽水大鼠作為SHR實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，16只予INF-γ 20萬(wàn)U·kg-1·d-1作為SHR干預(yù)組，另選16只同周齡健康雄性維斯塔京都大鼠(WKY)作為正常對(duì)照組(WKY組)，分析治療后的血壓(SBP)、LVM、左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)與AGEs含量。結(jié)果與WKY組比較，SHR各組大鼠的SBP、LVM與LVMI水平、AGEs與受體RAGE蛋白、mRNA含量及RAGE蛋白免疫組化陽(yáng)性面積率均顯著升高(P<0.05)；SHR干預(yù)組治療8 w SBP明顯低于同時(shí)期SHR實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，LVMI水平與AGEs含量均有下降(P<0.05)。結(jié)論INF-γ能夠降低SHR LVMI水平與AGEs、RAGE含量，抑制RAGE mRNA的表達(dá)。

關(guān)鍵詞〔〕γ-干擾素;自發(fā)性高血壓大鼠;左室質(zhì)量指數(shù);糖基化終末產(chǎn)物

中圖分類號(hào)〔〕R54〔

通訊作者：李莉(1957-)，女，主任醫(yī)師，教授，主要從事高血壓及相關(guān)疾病研究。

第一作者：劉暢(1986-)，女，在讀碩士，主要從事高血壓及相關(guān)疾病研究。

高血壓合并左室肥厚(LVH)是高血壓患者發(fā)生心血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，嚴(yán)重影響患者預(yù)后。如何預(yù)防LVH及LVH的逆轉(zhuǎn)成為高血壓和預(yù)防心血管事件的關(guān)鍵，而左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)對(duì)LVH的判定具有特異性。隨著高血壓患者LVH進(jìn)展，冠狀動(dòng)脈儲(chǔ)備功能減低，心肌缺血、心力衰竭、心律失常、猝死等事件發(fā)生率明顯上升〔1〕。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察干擾素(INF)-γ對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)LVMI及糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)表達(dá)的影響，為原發(fā)性高血壓伴L(zhǎng)VH患者的治療提供新的理論依據(jù)、開(kāi)辟新思路。

1資料與方法

1.1一般資料選取16周齡雄性SHR(SPF級(jí)別)32只，體重240～256 g，平均(253.67±2.94)g，按照完全隨機(jī)法1∶1分成SHR實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和SHR干預(yù)組，每組16只；另選16周齡健康雄性維斯塔京都大鼠(WKY)16只作為正常對(duì)照組(WKY組)，體重240～256 g，平均(253.76±2.97)g。實(shí)驗(yàn)大鼠均購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)SCXK(滬)2007-0005。所有大鼠均予相同飼養(yǎng)方法，即單籠飼養(yǎng)，自由攝食(以鼠糧為飼料)飲水，環(huán)境適宜(室內(nèi)溫度20℃～25℃，相對(duì)濕度40%～60%，空氣流通，明暗間隔周期12 h)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的用藥方法各組大鼠均在適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后行相應(yīng)藥物治療，治療時(shí)間均為8 w。SHR實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與WKY組大鼠于每日上午予等量生理鹽水(濃度0.9%)腹腔注射，SHR干預(yù)組于每日上午均予注射用重組人INF-γ 20萬(wàn)U·kg-1·d-1腹腔注射(克隆伽瑪，國(guó)藥準(zhǔn)字S20020040，上?？寺∩锔呒夹g(shù)有限公司)。

1.3血壓與左心室質(zhì)量測(cè)定方法各組大鼠均于治療前與治療后4 w和8 w測(cè)量尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)。將鼠尾動(dòng)脈壓袖套(已與大鼠尾動(dòng)脈血壓計(jì)、血壓記錄儀連接)套入待測(cè)大鼠尾根部，在其安靜狀態(tài)下行充氣加壓，連續(xù)記錄3次SBP后取其平均值；于實(shí)驗(yàn)第8周行左心室質(zhì)量(LVM)測(cè)量，稱大鼠體重，予30 mg/kg戊巴比妥腹腔注射，采用快速取材法處死大鼠，處死前稱重(BM)。剝離心臟后剪去大血管(沿主動(dòng)脈根部)，以0.9%生理鹽水灌洗并吸干殘余液體后，將右心室游離壁、心房去除，僅保留左心室以獲得LVM，計(jì)算LVMI〔LVMI=LVM(mg)/BM(g)〕。

1.4生化指標(biāo)檢測(cè)方法標(biāo)本采集自大鼠胸主動(dòng)脈段，以生理鹽水灌洗干凈后取50 mm血管，用多聚甲醛(濃度10%)固定，石蠟包埋以備相應(yīng)檢測(cè)。采用免疫熒光法〔2〕測(cè)定AGEs；采用免疫組化法〔3〕測(cè)定AGEs受體(RAGE)，石蠟脫水處理與表達(dá)結(jié)果獲取方法同AGEs。采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)〔4〕檢測(cè)大鼠胸主動(dòng)脈段組織內(nèi)RAGE mRNA，參照Tizol RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取總RNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，按照SYBR Premix Ex Taq TM Ⅱ試劑盒說(shuō)明書(shū)行Real Time PCR反應(yīng)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1各組大鼠治療前后的SBP變化情況與WKY組比較，SHR各組大鼠不同時(shí)間段的SBP顯著升高(P<0.05)；SHR干預(yù)組治療8 w的SBP顯著低于治療前，與SHR實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1　各組大鼠治療前后的SBP變化情況

與同組治療前比較：1)P<0.05；與同時(shí)間段SHR實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較：2)P<0.05；與同時(shí)間段WKY組比較：3)P<0.05

2.2各組大鼠治療后的LVM與LVMI指標(biāo)情況與WKY組比較，SHR各組大鼠的LVM與LVMI水平均顯著增加；SHR干預(yù)組治療后的LVM與LVMI水平均顯著低于SHR實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2　各組大鼠治療后的LVM與LVMI指標(biāo)情況

與SHR實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較：1)P<0.05；與WKY組比較：2)P<0.05；下表同

2.3各組大鼠治療后的AGEs與RAGE蛋白表達(dá)情況與WKY組比較，SHR各組大鼠的AGEs、RAGE mRNA含量、RAGE免疫組化陽(yáng)性面積均顯著上升；SHR干預(yù)組治療后的三項(xiàng)指標(biāo)均顯著低于SHR實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3　各組大鼠治療后AGEs、RAGE蛋白與RAGE mRNA

3討論

SHR作為遺傳性高血壓動(dòng)物模型，其形成機(jī)制與人類原發(fā)性高血壓類似，且經(jīng)研究證實(shí)存在高血壓心臟病變，因此是臨床研究高血壓心肌病變的理想動(dòng)物模型〔5，6〕。本研究結(jié)果提示INF-γ可以一定程度延緩大鼠的心肌重構(gòu)進(jìn)程。Niu等〔4〕發(fā)現(xiàn)INF-γ可以通過(guò)下調(diào)血小板源性生長(zhǎng)因子-B的mRNA表達(dá)，從而抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，最終減少球囊損傷后血管內(nèi)膜增生。丁鋼等〔7〕研究認(rèn)為，AngⅡ可明顯上調(diào)TβR-I表達(dá)，而INF-γ對(duì)其有明顯的抑制作用，表明AngⅡ可通過(guò)刺激血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1和其受體，參與血管內(nèi)膜細(xì)胞外基質(zhì)沉積和新生內(nèi)膜形成過(guò)程，而INF-γ的作用正相反，認(rèn)為INF-γ能拮抗AngⅡ誘導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)及纖維合成作用；INF-γ可以抑制炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，抑制炎癥因子如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α等的表達(dá)，增加IL-10、分泌型IL-1β受體拮抗物等炎性因子的合成而發(fā)揮抗炎功效，通過(guò)減輕心肌慢性炎癥反應(yīng)，進(jìn)而降低因炎癥長(zhǎng)期、反復(fù)發(fā)生引發(fā)SHR心室重構(gòu)。

AGEs與其受體RAGE結(jié)合，可激活細(xì)胞內(nèi)多種轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，進(jìn)而造成高血壓患者的心血管系統(tǒng)損傷〔8〕。本文結(jié)果提示AGEs可能參與SHR的高血壓左室肥厚進(jìn)展，而INF-γ能夠有效抑制AGEs與RAGE的表達(dá)。作用機(jī)制可能是：INF-γ作為輔助性T細(xì)胞中的1型輔助性T細(xì)胞(Th1)的衍生物，通過(guò)促進(jìn)Th1細(xì)胞增殖，增強(qiáng)細(xì)胞免疫活性，同時(shí)通過(guò)降低內(nèi)源性Th1活性，可以發(fā)揮抑制體液免疫作用，進(jìn)而阻滯AGEs與RAGE的轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)，有效保護(hù)高血壓靶器官〔9〕。本文結(jié)果與李必龍、范劍峰等〔10，11〕報(bào)道一致，證實(shí)INF-γ通過(guò)降低SHR中AGEs與RAGE含量，抑制RAGE mRNA的表達(dá)，具有改善心室重構(gòu)進(jìn)程的優(yōu)勢(shì)。

4參考文獻(xiàn)

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〔2014-05-17修回〕

(編輯李相軍)