·論著·

聚乙二醇400介導(dǎo)的多西他賽脂肪乳劑與多西他賽注射液的稀釋穩(wěn)定性研究

張廣軍1，林玲2，陳麗娜1，高保安1,2，陳建明1,2(1.第二軍醫(yī)大學(xué)藥劑學(xué)教研室，上海 200433；2. 天士力帝益藥業(yè)有限公司，江蘇 淮安 223002)

[摘要]目的建立多西他賽的含量測(cè)定方法；考察自制的聚乙二醇(PEG)400介導(dǎo)的多西他賽脂肪乳劑與市售的多西他賽注射液稀釋液的穩(wěn)定性。方法建立高效液相色譜法測(cè)定含量；在室溫條件下采用膜過(guò)濾法，以過(guò)濾液的含量、pH值以及過(guò)濾前的粒徑為指標(biāo)，考察PEG400介導(dǎo)的多西他賽脂肪乳劑與市售的多西他賽注射液的稀釋液隨時(shí)間變化的穩(wěn)定性。結(jié)果多西他賽在1～256 μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程：Y=21.199X+20.488，r=0.999 9；自制PEG400介導(dǎo)的多西他賽脂肪乳劑分散液，室溫下24 h內(nèi)過(guò)濾液的含量、pH值以及過(guò)濾前的粒徑均未見明顯變化。觀察市售多西他賽注射液的生理鹽水稀釋液，2 h發(fā)現(xiàn)有藥物析出，過(guò)濾液含量明顯下降。結(jié)論自制PEG400介導(dǎo)的多西他賽脂肪乳劑的分散穩(wěn)定性遠(yuǎn)優(yōu)于市售多西他賽注射液的生理鹽水稀釋液，大大提高了臨床用藥的安全性。

[關(guān)鍵詞]聚乙二醇400；多西他賽脂肪乳劑；多西他賽注射液；稀釋穩(wěn)定性

[基金項(xiàng)目]上海市納米專項(xiàng)(12nm0501000)

[作者簡(jiǎn)介]張廣軍，碩士研究生.E-mail:13818346927@163.com

[通訊作者]陳建明.研究方向：藥物新劑型與新技術(shù).E-mail:yjcjm@163.com.

[中圖分類號(hào)]R944.1[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

DOI[]10.3969/j.issn.1006-0111.2015.02.006

[收稿日期]2013-11-26[修回日期]2014-03-16

Stability comparison between a novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel and docetaxel injection saline dilutions

ZHANG Guangjun1,LIN Ling2,CHEN Lina1,GAO Baoan1,2，CHEN Jianming1,2(1. Department of Pharmaceutics, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China; 2. Tasly pharmaceutical Co.,Ltd,Huai′an 223002, China)

Abstract[]ObjectiveTo establish HPLC method to detect docetaxel and compare the stability of a novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel with docetaxel injection saline dilutions.MethodsHPLC method was established to detect docetaxel concentration. The stability of a novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel and docetaxel saline dilutions were investigated by drug concentration pH value and particle size using membranes filtration method.ResultsThe linear range of docetaxel was 1-256 μg/ml,regression equation was Y=21.199X+20.488,r=0.999 9. The drug concentration pH value and particle size of polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel was stable at room temperature in 24 hours. However the docetaxel injection saline dilutions was discovered drug precipitation in about two hours after preparation and the drug concentration was significant decreased in the filtration of docetaxel injection saline dilutions.ConclusionThe novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel was a new stable docetaxel formulation and significantly increased the safety in clinical.

[Key words]polyethylene glycol；docetaxel；lipid nanoemulsion；saline dilutions；stability

1儀器與材料

1.1儀器Agilent1100型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)；TH-3560高壓滅菌鍋(鑫科企業(yè)有限公司)；BS124S型電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司)；0.45 μm濾膜(美國(guó)Millipore公司)；NANO-S型馬爾文粒徑檢測(cè)儀(英國(guó)馬爾文儀器公司)；PB-10型pH計(jì)(德國(guó)Sartorius公司)。

1.2主要材料和試劑多西他賽原料藥(重慶美聯(lián)制藥公司，純度≥98%，批號(hào):G-1005002)；多西他賽對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，純度≥99.9%)；PEG400(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司)；多西他賽注射液(齊魯制藥有限公司，批號(hào):809020EW)；20%中/長(zhǎng)鏈脂肪乳注射液(廣州百特僑光醫(yī)療用品有限公司，批號(hào):GM1101002)；甲醇，乙腈(德國(guó)默克公司,色譜純)；生理鹽水(山東辰欣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào):1208260591)。其他所用試劑均為分析純。

2方法

2.1DLE分散液和TAX生理鹽水分散液的制備

2.1.1DLE分散液的制備精密稱取1.4 g多西他賽，溶于20 ml的PEG400中，加入0.5%活性炭去除熱原，充氮分裝于2 ml透明注射劑瓶中，121 ℃高壓滅菌15 min,得到多西他賽PEG400藥物溶液。使用注射器吸取制備的多西他賽PEG400溶液1 ml，然后將該溶液邊振搖邊注入99 ml 20%市售空白脂肪乳劑中至分散均勻即可，得到藥物濃度約為0.7 mg/ml的DLE分散液。

2.1.2TAX生理鹽水稀釋液的制備在室溫下將注射用溶媒加入多西他賽溶液中，將兩者在無(wú)菌環(huán)境下混勻，再均勻分散到適量生理鹽水中得到藥物濃度約為0.7 mg/ml的TAX生理鹽水稀釋液。

2.2對(duì)照品和供試品溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液精密稱取對(duì)照品12.5 mg，加入25 ml量瓶中，以異丙醇溶解并定容至刻度，得到濃度為500 μg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

不文明現(xiàn)象總讓媒體揪著批，恐怕沒完沒了，時(shí)間長(zhǎng)了，會(huì)給大眾帶來(lái)“審丑疲勞”。其實(shí)，一次法律行動(dòng)勝過(guò)一萬(wàn)次輿論譴責(zé)，相關(guān)執(zhí)法者、管理者，應(yīng)走在媒體前面，該出手時(shí)就出手，積極捍衛(wèi)法律規(guī)則，彌平社會(huì)爭(zhēng)議。以高鐵霸座問題為例，每次輿論曝光之后，相關(guān)部門都會(huì)在輿論壓力下追加執(zhí)法，給予霸座者治安處罰，以及列入黑名單等。而如果每一次高鐵霸座都逃不過(guò)第一時(shí)間的處罰，恐怕霸座者也不至于這么囂張，權(quán)益受侵害的乘客也不至于如此無(wú)助，人們更不至于要一次次呼吁執(zhí)法部門的介入。

2.2.2供試品溶液按“2.1”項(xiàng)下方法制備DLE分散液及多西他賽注射液生理鹽水稀釋液,于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h分別取適量過(guò)0.45 μm微孔濾膜，分別精密量取續(xù)濾液1 ml于10 ml量瓶中，用異丙醇破乳并定容至刻度，得到供試品溶液。

2.3色譜條件色譜柱：Ultimate C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水(42:34:24)；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：232 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μl。分別取多西他賽對(duì)照品溶液，TAX生理鹽水稀釋液供試品和DLE分散液供試品溶液適量進(jìn)樣,色譜圖見圖1，多西他賽的保留時(shí)間約為6.5 min，其他成分不干擾多西他賽的測(cè)定。

圖1　多西他賽高效液相色譜圖 A.對(duì)照品；B.DLE分散液供試品；C.TAX生理鹽水稀釋液供試品；1.多西他賽

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍精密量取適量對(duì)照品儲(chǔ)備液，用異丙醇稀釋成濃度為1、4、16、64、256 μg/ml的多西他賽系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，取20 μl標(biāo)準(zhǔn)溶液注入液相色譜儀進(jìn)行分析，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積(Y)對(duì)相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(X)進(jìn)行線性回歸，其回歸方程為Y=21.199X+20.488，r=0.999 9,線性范圍為1～256 μg/ml。

2.5精密度實(shí)驗(yàn)分別精密吸取低、中、高3個(gè)濃度(4、64、256 μg/ml)梯度的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件于1 d之內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD值分別為1.45%、0.56%和1.21%。連續(xù)3 d分別進(jìn)樣，RSD值分別為1.96%、1.20%和0.93%。表明該方法日內(nèi)和日間精密度良好。

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)按“2.2”項(xiàng)下方法制備DLE分散液0 h供試品及TAX生理鹽水稀釋液0 h供試品各6份，各取20 μl進(jìn)樣，測(cè)定供試品中多西他賽含量，計(jì)算其RSD值分別為0.89%、0.68%。表明測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性考察取按“2.2”項(xiàng)下方法制備的DLE分散液0 h供試品及TAX生理鹽水稀釋液0 h供試品,分別于0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣20 μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算峰面積的RSD值，結(jié)果兩供試品樣品中多西他賽峰面積的RSD值分別為0.69%、0.91%，表明兩者在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8加樣回收率比較分別精密量取已知濃度的DLE分散液供試液及TAX生理鹽水稀釋液供試液各9份，分為3組，分別精密加入低、中、高3個(gè)濃度的對(duì)照品溶液，測(cè)定各組藥物含量，計(jì)算加樣回收率和RSD值。結(jié)果如表1、表2所示，回收率均在95%～105%范圍內(nèi)，RSD值均<5%，符合藥物含量測(cè)定要求。

表1　DLE分散液供試品加樣回收率

表2　TAX生理鹽水稀釋液供試品加樣回收率

3結(jié)果

3.1穩(wěn)定性比較室溫下配制TAX生理鹽水稀釋液及DLE分散液，于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h分別取適量?jī)煞N藥物分散液，過(guò)0.45 μm濾膜除去游離藥物，分別精密吸取續(xù)濾液1 ml,于10 ml量瓶中，異丙醇破乳并定容至刻度，進(jìn)樣20 μl，測(cè)定續(xù)濾液多西他賽濃度，以濾液中多西他賽濃度的變化來(lái)判斷這兩種制劑的稀釋穩(wěn)定性。以0 h藥物濃度為100%，其余各時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度與0 h藥物濃度百分比為百分標(biāo)示量。結(jié)果見表3，DLE分散液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定，而TAX生理鹽水稀釋液穩(wěn)定不足2 h，在2 h后稀釋液可見明顯的藥物析出現(xiàn)象，過(guò)濾后濾液藥物含量明顯下降。DLE分散液的稀釋穩(wěn)定性遠(yuǎn)超過(guò)TAX生理鹽水稀釋液。

表3　DLE分散液和TAX生理鹽水稀釋液

注：TAX生理鹽水稀釋液在2 h后開始出現(xiàn)明顯渾濁現(xiàn)象，藥物含量明顯下降

3.2DLE分散液pH值的測(cè)定按“2.1.1”項(xiàng)下配制DLE分散液，于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h使用pH計(jì)測(cè)定分散液的pH值。結(jié)果見表4,可以看出DLE分散液在24 h內(nèi)pH值無(wú)明顯變化。

3.3DLE分散液pH值粒徑的測(cè)定按“2.1.1”項(xiàng)下配制DLE分散液,于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h取該乳劑分散液適量，用蒸餾水稀釋適當(dāng)倍數(shù)后，按馬爾文粒徑檢測(cè)儀操作方法測(cè)定DLE分散液的粒徑。結(jié)果見表4，可見DLE分散液24 h內(nèi)粒徑無(wú)明顯變化。

表4　DLE分散液粒徑及pH值變化( n=3)

4討論

本研究采用膜過(guò)濾法從藥物含量、pH值及粒徑3個(gè)方面研究了DLE的稀釋穩(wěn)定性，并與TAX稀釋液的穩(wěn)定性進(jìn)行比較。膜過(guò)濾法具有操作簡(jiǎn)便和重復(fù)性好的特點(diǎn)，根據(jù)文獻(xiàn)[5]可知,使用生理鹽水作為稀釋溶媒的TAX稀釋液最為穩(wěn)定，藥物含量能穩(wěn)定2 h，使用5%葡萄糖作為稀釋溶媒僅能穩(wěn)定1 h，因此本研究選用生理鹽水作為溶媒，所得結(jié)果與該文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致。而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示，DLE分散液至少在24 h內(nèi)，其藥物含量、pH值和粒徑保持不變，稀釋穩(wěn)定性明顯優(yōu)于TAX,可大大提高臨床使用的安全性。

TAX以表面活性劑吐溫-80作為藥物溶媒，有文獻(xiàn)報(bào)道，吐溫-80易引起休克、呼吸困難、低血壓、血管性水腫、風(fēng)疹等嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)及溶血，因而限制了其臨床應(yīng)用。DLE因不含任何易導(dǎo)致過(guò)敏的表面活性劑，進(jìn)一步提高了其用藥安全性。DLE具有載藥量高、安全性好、穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。相信隨著對(duì)DLE研究的深入，該制劑有望成為一種新型的安全有效的多西他賽注射制劑。

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[本文編輯]李睿旻