代振江，劉 釗，曾智勇，湯德元，梁海英，王偉丞

（貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

關(guān)于某豬場HCV和PRRSV雙重感染的診治報告

代振江，劉 釗，曾智勇*，湯德元，梁海英，王偉丞

（貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

2014年12月，貴州安順某豬場，現(xiàn)有存欄育肥豬300余頭，豬群已免疫豬瘟（HC）、口蹄疫和藍(lán)耳?。≒RPS）疫苗，其中藍(lán)耳病疫苗已接種90 d。12月上旬，約140日齡的育肥豬相繼發(fā)病，臨床癥狀主要表現(xiàn)為耳朵發(fā)紺，食欲不振、精神委頓、腹瀉，高熱1周左右。對病死豬進(jìn)行了剖檢，其中1頭經(jīng)產(chǎn)病死母豬解剖見肺臟嚴(yán)重出血及大量化膿性病灶，呈綠色，且散發(fā)腐尸臭味，單側(cè)腎腫大，內(nèi)有積水（形似囊腫）；1頭發(fā)病的育肥豬解剖可見腎臟存在大量點(diǎn)狀出血（似雀斑腎），肺臟散見陳舊性出血斑，且間質(zhì)性肺炎明顯，淋巴結(jié)腫大出血呈黑色，脾臟大范圍梗死。根據(jù)上述情況，初步判斷豬群存在HCV和/或PRRSV感染。為了進(jìn)一步確診，分別進(jìn)行了組織病料的實(shí)驗室核酸檢測，其結(jié)果顯示該豬場發(fā)病豬群存在HCV和PRRSV的雙重感染，現(xiàn)將檢測過程報道如下。

1??材料

1.1?病料

采自1頭病死母豬和1頭發(fā)病育肥豬的組織病料（肝、腎、肺、淋巴結(jié)和脾臟等臟器）。

1.2?主要試劑

TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0、PrimeScript One Step PT-PCR Kit VER.2.0、DL2000皆購自大連寶生物公司；其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。

2??方法

2.1?病料的處理及核酸的提取

分別取適量剖檢病豬的肝、腎、肺臟、淋巴結(jié)和脾臟進(jìn)行碾磨勻漿，反復(fù)凍融3次后，12 000 r/min離心10 min，取上清，用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.4.0試劑盒進(jìn)行核酸的提取。

2.2?病原核酸檢測

分別用HCV和PRRSV的特異性引物，以提取的核酸為模板，參照一步法RT-PCR試劑盒說明書，對HCV、PRRSV進(jìn)行核酸檢測，其反應(yīng)總體系為50μL：2×1 StepBuffer 25μL，模板7.0μL，上下游引物各1.0μL，PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2μL，RNase Free H2O 14μL；反應(yīng)程序為：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35個循環(huán)；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

3??結(jié)果

病原核酸檢測結(jié)果表明該豬場送檢的發(fā)病豬存在HCV、PRRSV的雙重感染（圖1）。

4??結(jié)果分析討論

通過實(shí)驗室診斷可知，該豬場存在豬瘟和藍(lán)耳病的雙重感染，盡管該豬場已免疫豬瘟、藍(lán)耳病和口蹄疫，但是豬群免疫后未及時地做抗體檢測以確定免疫是否有效，從臨床發(fā)病情況及病原檢測結(jié)果可知，該豬場存在豬瘟、藍(lán)耳病免疫失敗現(xiàn)象。由于豬瘟、藍(lán)耳病免疫失敗，使豬群處于無保護(hù)狀態(tài)，又加之入冬后晝夜溫差變化較大，豬場飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)葢?yīng)激因素，致使抵抗力下降，故而發(fā)病。PRRS是一種公認(rèn)的免疫抑制性疫病，機(jī)體感染病毒后可導(dǎo)致免疫力嚴(yán)重下降，從而繼發(fā)其他病原體的多重或混合感染，進(jìn)而導(dǎo)致臨床癥狀復(fù)雜化和損失程度嚴(yán)重化[1]。豬瘟的流行形式已從頻發(fā)的大流行轉(zhuǎn)變?yōu)槎嗟貐^(qū)散發(fā)性流行，大多表現(xiàn)為非典型的溫和性流行，其臨床癥狀顯著減輕，死亡率低或呈亞臨床感染，母豬發(fā)生繁殖障礙等，導(dǎo)致其長期帶毒、散毒，使得豬瘟病毒在豬場廣泛存在，常因各類應(yīng)激誘發(fā)豬瘟疫情，臨床上多與PRRSV、PCV2、副豬嗜血桿菌以及附紅細(xì)胞體等多重或混合感染[2-5]。鑒于此，豬場在進(jìn)行免疫之后應(yīng)進(jìn)行相關(guān)抗體檢測，這樣才能掌握豬群疫苗免疫的效果，以確定疫苗免疫是否有效，對抗體水平不達(dá)標(biāo)的要認(rèn)真分析免疫失敗的原因并及時補(bǔ)免。

圖1 檢測結(jié)果

此外，當(dāng)前豬病多是由于幾種病原體協(xié)同作用而造成的，混合感染已成為豬場發(fā)病的主要形式，根據(jù)病毒的生物學(xué)特性和豬病的流行特點(diǎn)，當(dāng)前對于藍(lán)耳病、豬瘟及圓環(huán)病毒感染等病毒性疫病的防控，免疫接種只是一個重要手段，更重要的是要落實(shí)綜合性防控措施[6]。有資料表明，帶毒仔豬無論是吃初乳，還是免疫接種疫苗，均不能阻止因HCV感染而引起的死亡。所以對發(fā)病豬群立即進(jìn)行徹底的清潔和消毒，對發(fā)病豬進(jìn)行嚴(yán)格的隔離觀察或治療，無治療價值的建議直接無害化處理。病癥較輕的豬只可隔離后對癥治療。在豬病毒性疫病的綜合防控中，養(yǎng)殖環(huán)境是基礎(chǔ)，病原診斷和抗體監(jiān)測是保障，疫苗免疫是手段，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理是重點(diǎn)，隔離治療僅是補(bǔ)充。

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2015-01-05）

省校合作計劃項目， 黔科合LH字[2014]7670號

代振江（1991-），男，在讀碩士，研究方向：動物傳染病病原分子生物學(xué)。

*通訊作者：曾智勇（1978-），男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事動物傳染病病原分子生物學(xué)研究。