陳 羽， 徐 威

(沈陽(yáng)藥科大學(xué) 生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016)

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苦參水提液的殺菌效果

陳 羽， 徐 威*

(沈陽(yáng)藥科大學(xué) 生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016)

采用懸液定量殺菌試驗(yàn)，對(duì)苦參水提液的殺菌效果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室研究。研究發(fā)現(xiàn)，苦參水提液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌、白假絲酵母菌和黑曲霉均具有明顯的殺菌作用。通過(guò)模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，苦參水提液起到了顯著地殺菌效果。

苦參；消毒劑；懸液定量殺菌試驗(yàn)

由于中草藥具有天然、污染小、毒副作用小、過(guò)敏反應(yīng)少和不易產(chǎn)生抗藥性等特點(diǎn)，能夠克服抗生素被濫用帶來(lái)的弊端而備受人們青睞[1]?？鄥?SophoraflavescensAit.)為豆科槐屬植物，具有清熱燥濕、殺蟲(chóng)、利尿之功效。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，苦參對(duì)痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、維白痢沙門(mén)氏菌等均具有明顯抑制作用, 對(duì)瑾色毛癬菌等十多種皮膚真菌也具有不同程度的抑制作用[2]。市場(chǎng)上中藥類(lèi)殺菌消毒產(chǎn)品并不多見(jiàn)。本文對(duì)苦參水提液的殺菌效果進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室研究，為合理開(kāi)發(fā)新型苦參復(fù)配消毒劑產(chǎn)品提供技術(shù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 金黃色葡萄球菌(StaphylococcusaureusATCC 6538)、大腸埃希菌(Escherichiacoli8099)、枯草芽胞桿菌(BacillussubtilisATCC 9372)、白假絲酵母菌(CanidiaalbicansATCC 10231)和黑曲霉(AspergilliusnigerATCC 16404)，由沈陽(yáng)藥科大學(xué)微生物學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)教研室提供。

1.1.2 培養(yǎng)基(g/L) 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨10.0，牛肉膏5.0，氯化鈉5.0，瓊脂粉14.0；沙堡瓊脂培養(yǎng)基：葡萄糖40.0，蛋白胨10.0，瓊脂粉14.0。

1.1.3 緩沖液(g/L) 磷酸鹽緩沖液：無(wú)水磷酸氫二鈉2.83，磷酸二氫鉀1.36，pH 7.2；中和劑：硫代硫酸鈉2.0，溶解于磷酸鹽緩沖液中，起中和苦參水提液的殺菌作用。

1.2 方法

1.2.1 苦參水提液的制備 取苦參(安國(guó)昌達(dá)中藥材飲片有限公司)200 g, 加適量水煎煮3次, 煎煮時(shí)間分別為20、40和60 min, 用8層紗布過(guò)濾, 合并濾液, 濃縮至500 mL，保存于4 ℃冰箱中備用。

1.2.2 菌懸液的制備 試驗(yàn)菌為S.aureusATCC 6538、E.coli8099和C.albicansATCC 10231。取磷酸鹽緩沖液5.0 mL加入新鮮斜面培養(yǎng)物試管內(nèi)，反復(fù)吹吸，洗下菌苔。用移液管將洗液移至另一無(wú)菌試管中，用渦旋混合器振蕩20 s，使菌體懸浮均勻。初步制成的菌懸液，先用比濁測(cè)定法測(cè)其含菌濃度，再用磷酸鹽緩沖液稀釋至1×1011～ 5×1011cfu/L。菌懸液使用時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

1.2.3 芽胞懸液的制備 取已經(jīng)活化3代的B.subtilisATCC 9372液體培養(yǎng)物3 mL，接種于羅氏瓶中營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基表面，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)8 d。采用孔雀綠法進(jìn)行芽胞染色。當(dāng)芽胞形成率達(dá)95%以上時(shí)，即可進(jìn)行懸液的制備。用無(wú)菌水30 mL輕輕推刮菌苔，集中于一含玻璃珠的無(wú)菌三角瓶中，振搖30 min，分散培養(yǎng)物，使成均勻的懸液。將盛裝上述懸液的三角瓶置于45 ℃水浴中24 h，使菌自溶斷鏈，分散成單個(gè)芽胞。最后，將三角瓶放于80 ℃水浴中10 min，以殺滅殘余的細(xì)菌繁殖體，待冷至室溫后，即為芽胞懸液。芽胞懸液使用時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

1.2.4 黑曲霉孢子懸液的制備 用接種環(huán)劃線(xiàn)接種A.nigerATCC 16404于沙堡斜面培養(yǎng)基上，置28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d。吸取0.05%吐溫-80水溶液4 mL置于斜面表面, 刮洗分生孢子，將孢子懸液移入裝有玻璃珠的三角瓶中，輕輕振搖30 min后，濾過(guò)除去菌絲。孢子懸液使用時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

1.2.5 中和劑的考察試驗(yàn) 設(shè)平行8組試驗(yàn)，以S.aureusATCC 6538為試驗(yàn)菌，按懸液定量殺菌試驗(yàn)程序進(jìn)行[3]。a：消毒液+菌懸液；b：(消毒液+菌懸液)+中和劑；c：中和劑+菌懸液；d：(消毒液+中和劑)+菌懸液；e：磷酸鹽緩沖液+菌懸液(正常菌對(duì)照)；f：磷酸鹽緩沖液；g：中和劑；h：培養(yǎng)基。中和劑及其濃度的判定標(biāo)準(zhǔn)：a組不長(zhǎng)菌或僅有極少數(shù)菌落生長(zhǎng)；b組有菌落生長(zhǎng)，較a組為多，但較c、d、e組為少；c、d、e組菌落數(shù)分別在1×108～5×109cfu/L之間，且組間菌落數(shù)誤差率不應(yīng)超過(guò)15%；f、g、h組無(wú)菌生長(zhǎng)。由此可判定所選中和劑及其濃度適宜。

1.2.6 懸液定量殺菌試驗(yàn) 試驗(yàn)時(shí)，先將內(nèi)裝5 mL苦參水提液的試管置于20 ℃水浴中5 min，再將0.1 mL菌懸液加入其中，混勻，作用至規(guī)定時(shí)間。取0.5 mL菌藥混和液，移入4.5 mL中和劑溶液的試管中，混勻，中和作用10 min。取0.1 mL涂平板，置恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，活菌計(jì)數(shù)。以?xún)?nèi)裝5 mL標(biāo)準(zhǔn)硬水的試管同步操作所得活菌數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算殺菌率。

1.2.7 模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn) 選擇木質(zhì)桌面，在桌面上劃定5 cm×5 cm范圍的2個(gè)不同區(qū)域，分別標(biāo)記為基準(zhǔn)區(qū)和苦參水提液區(qū)。以涂抹法污染E.coli8099懸液(菌數(shù)為1×107cfu/L)，待自然干燥后進(jìn)行試驗(yàn)。消毒前，將無(wú)菌棉拭于5 mL磷酸鹽緩沖液試管中沾濕，以涂抹法在基準(zhǔn)區(qū)采樣作基準(zhǔn)；將苦參水提液均勻噴涂在苦參水提液區(qū)，作用10 min，以同樣方法進(jìn)行消毒后采樣。分別將消毒前后采樣棉拭采樣端剪入5 mL中和劑試管內(nèi),活菌計(jì)數(shù)，觀(guān)察殺菌效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 中和劑的考察試驗(yàn)

經(jīng)檢測(cè)，用2 g/L硫代硫酸鈉可有效中和苦參水提液的殺菌作用，中和劑及中和產(chǎn)物對(duì)受試菌及培養(yǎng)基均無(wú)影響(見(jiàn)表1)。

表1 消毒劑的中和劑試驗(yàn)

2.2 苦參水提液的殺菌作用考察

采用懸液定量殺菌試驗(yàn)，考察苦參水提液對(duì)S.aureusATCC 6538、E.coli8099、B.subtilisATCC 9372、C.albicansATCC 10231和A.nigerATCC 16404的殺菌效果(見(jiàn)表2)。從表2數(shù)據(jù)可以看出，隨著作用時(shí)間的增加，苦參水提液起到了顯著的殺菌效果。

表2 苦參水提液的殺菌效果

2.3 模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)

用苦參水提液進(jìn)行模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，苦參水提液對(duì)E.coli8099懸液作用10 min，殺菌率為87.59%。說(shuō)明苦參水提液具有明顯的殺菌作用。

3 討 論

目前市場(chǎng)上所使用的消毒劑一般都是化學(xué)消毒劑, 如醋酸氯己定、過(guò)氧乙酸、二氧化氯、甲醛等，雖然殺菌效果顯著，但都存在一定的缺陷，如具有刺激性氣味、腐蝕性強(qiáng)等。中草藥消毒劑對(duì)環(huán)境無(wú)污染、無(wú)刺激性、使用安全、無(wú)副作用、氣味芳香，近幾年來(lái)頗受關(guān)注，在其研制方面取得了很大進(jìn)展，在劑型上也越來(lái)越先進(jìn)。但中藥消毒劑也存在著一些不足, 如提取工藝復(fù)雜、費(fèi)用過(guò)高、效果不夠穩(wěn)定等，仍需進(jìn)一步的探討和改進(jìn)[4-5]。

本課題組對(duì)苦參水提液的殺菌消毒效果進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室研究。研究發(fā)現(xiàn)，苦參水提液對(duì)某些細(xì)菌(S.aureusATCC 6538、E.coli8099)、細(xì)菌芽胞(B.subtilisATCC 9372)，某些酵母菌和曲霉菌(C.albicansATCC 10231、A.ninerATCC 16404)均起到了顯著的殺菌效果，為合理開(kāi)發(fā)新型苦參復(fù)配消毒產(chǎn)品提供了理論依據(jù)。

[1] 王瑞君.幾種中草藥對(duì)金黃色葡萄球菌體外抑制作用的研究[J].現(xiàn)代食品科技，2009，25(9)：1104-1106.

[2] 胡仁火.五種中藥提取液對(duì)細(xì)菌作用效果初探[J].咸寧學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，26(6)：133-135.

[3] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.消毒技術(shù)規(guī)范[S].北京，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，2002：9-200.

[4] 孫貴豫，許吟，楊懷.對(duì)母嬰病房空氣消毒方法結(jié)果比較[J].護(hù)士進(jìn)修雜志，1996，11(5)：43-45.

[5] 高慧，張思超.中藥消毒劑研究現(xiàn)狀[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，28(6)：476-478.

Germicidal Efficacy of the Sophora flavescens Aqueous Extract

CHEN Yu, XU Wei

(Schl.ofLifeSci. &Biopharm.,ShenyangPharm.Univ.,Shenyang110016)

The germicidal efficacy of theSophoraflavescensaqueous extract (SFAE) was studied using suspension quantitative germicidal test in the laboratory. It was found that SFAE had obvious germicidal efficacy againstStaphylococcusaureusATCC 6538,E.coli8099,BacillussubtilisATCC 9372,CanidiaalbicansATCC 10231 andAspergilliusnigerATCC 16404. On-the-spot simulation test, the SFAE had obvious germicidal efficacy.

SophoraFlavescens; disinfectant; suspension quantitative germicidal test

陳羽 男，碩士，講師。主要從事微生物制藥及消毒劑的殺菌消毒研究。E-mail:chenyu0208303@126.com

* 通訊作者。女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師。主要從事微生物制藥及微生物轉(zhuǎn)化生物活性物質(zhì)的研究。E-mail:gzweishengwu@126.com

2013-12-18；

2014-02-25

Q815

B

1005-7021(2015)04-0110-03

10.3969/j.issn.1005-7021.2015.04.020