左路廣，馬 科，馮 博，周素濤，李 潔

胸腹水高熒光細(xì)胞篩查惡性積液價(jià)值研究

左路廣，馬 科，馮 博，周素濤，李 潔

目的：研究胸腹水高熒光細(xì)胞篩查惡性積液價(jià)值。方法：選取2014年1月至12月住院、門診患者400例，收集臨床診斷結(jié)果及胸腹水標(biāo)本，選用Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀檢測(cè)高熒光細(xì)胞數(shù)并涂片染色鏡檢，運(yùn)用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線，分析研究胸腹水高熒光細(xì)胞篩查惡性積液的靈敏度、特異性、陽(yáng)性似然比及陰性似然比，探討高熒光細(xì)胞對(duì)惡性積液的診斷價(jià)值。結(jié)果：惡性腫瘤患者組高熒光細(xì)胞數(shù)明顯高于非惡性腫瘤患者組（Z=-7.372，P＜0.05），高熒光細(xì)胞數(shù)曲線下面積（area under curve，AUC）為0.801，靈敏度70.67%，特異性84.31%，陽(yáng)性似然比4.50，陰性似然比0.35。結(jié)論：檢測(cè)胸腹水高熒光細(xì)胞可用于惡性積液的篩查，當(dāng)胸腹水標(biāo)本高熒光細(xì)胞數(shù)臨界值（cut-off值）≥68時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步檢查并跟蹤隨訪。

胸腹水；高熒光細(xì)胞；惡性積液

0 引言

近年來(lái)，環(huán)境變差、食品質(zhì)量不良等問(wèn)題導(dǎo)致人群患有惡性腫瘤的概率增大。對(duì)于腫瘤早期病變檢測(cè)，目前主要以病理學(xué)、影像診斷為依據(jù)，病理學(xué)檢測(cè)受標(biāo)本取材部位、醫(yī)師能力及腫瘤疾病的發(fā)展程度等多種因素影響，診斷結(jié)果差異較大；影像學(xué)檢查不易發(fā)現(xiàn)腫瘤早期病變，當(dāng)腫瘤發(fā)展至影像、病理學(xué)技術(shù)檢查程度時(shí)，多已進(jìn)入中晚期，延誤疾病的預(yù)防、治療[1-2]，尋找提示腫瘤早期病變的指標(biāo)亟待解決。Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀具有檢測(cè)體液細(xì)胞功能，還能提供與腫瘤細(xì)胞密切相關(guān)的高熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)項(xiàng)目[3]。高熒光細(xì)胞（high-fluorescent cells，HFC）核酸含量較高，儀器進(jìn)行熒光染色后具有高熒光強(qiáng)度，細(xì)胞核酸染色后應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)熒光強(qiáng)度，當(dāng)光照射到經(jīng)過(guò)熒光染色的細(xì)胞上時(shí)，會(huì)產(chǎn)生比入射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光。隨著染色集團(tuán)濃度增加，熒光強(qiáng)度亦增加。通過(guò)測(cè)量熒光強(qiáng)度，可以得到有關(guān)細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的信息，現(xiàn)階段流式細(xì)胞技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于各類血細(xì)胞分析儀。Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀采用鞘流電阻抗檢測(cè)方法，結(jié)合半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)、特殊化學(xué)試劑及核酸熒光染色技術(shù)對(duì)體液中高熒光細(xì)胞（HF-BF#）進(jìn)行定量測(cè)定，是臨床檢驗(yàn)工作中的重要儀器[4]。胸腹水中出現(xiàn)高熒光細(xì)胞對(duì)惡性腫瘤診斷和評(píng)價(jià)具有重要意義，提示體液中可能存在惡性細(xì)胞，文章借助Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀體液模式[5]，對(duì)胸腹水進(jìn)行測(cè)定，研究高熒光細(xì)胞篩查惡性積液的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院2014年1月至12月住院及門診患者體液標(biāo)本400例，男性258例，女性142例，年齡19～89歲，平均年齡（63.5±16.2）歲。所有患者均知情同意，符合本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 儀器與試劑

Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀，原裝配套試劑和校準(zhǔn)品，e-CHECK（XE）高值、中值質(zhì)控品，奧林巴斯顯微鏡，BASO染液（A、B），EDTA-K2抗凝管。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集

由臨床醫(yī)師按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程經(jīng)患者胸腔、腹腔穿刺采集標(biāo)本2 ml，注入EDTA-K2抗凝管中，立即送檢，2 h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)

Sysmex XE-5000切換至體液模式，將標(biāo)本緩慢顛倒混勻8次，手工上機(jī)操作，記錄體液高熒光細(xì)胞數(shù)（HF-BF#），并涂片染色鏡檢，記錄計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞的同時(shí)出現(xiàn)的間皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算百分比。

1.3.3 病例收集歸納

收集歸納體液標(biāo)本患者的性別、年齡、臨床及病理診斷結(jié)果等信息，對(duì)各類病變進(jìn)行分類。惡性腫瘤患者納入條件：（1）胸腹水病理脫落細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞；（2）組織病理學(xué)診斷為惡性腫瘤；（3）實(shí)驗(yàn)室、影像學(xué)檢查診斷為惡性腫瘤并跟蹤證實(shí)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)選用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正態(tài)性檢驗(yàn)

所收集標(biāo)本中惡性腫瘤患者標(biāo)本75例，非惡性腫瘤標(biāo)本325例，病例分類見表1。對(duì)2組標(biāo)本高熒光細(xì)胞數(shù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，惡性腫瘤患者組偏度5.761，峰度39.166；非惡性腫瘤患者組偏度9.424，峰度95.056，均屬于偏態(tài)分布。對(duì)2組數(shù)據(jù)進(jìn)行Mann-Whitney U檢驗(yàn)，Z=-7.372，P＜0.05，2組數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，惡性腫瘤患者高熒光細(xì)胞中位數(shù)為118，非惡性腫瘤患者高熒光細(xì)胞中位數(shù)為15。

表1 病例分類 例

2.2 診斷價(jià)值研究

儀器檢測(cè)高熒光細(xì)胞數(shù)記為HF-BF#和HFBF%，結(jié)合所收集患者診斷及儀器檢測(cè)結(jié)果，運(yùn)用受試者工作特征（receiveroperatorcharacteristic，ROC）曲線進(jìn)行分析，可知曲線下面積（area under the curve，AUC）=0.773，高熒光細(xì)胞對(duì)于惡性積液的診斷價(jià)值中等，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，高熒光細(xì)胞數(shù)臨界值（cut-off）值為69。

2.3 診斷指標(biāo)評(píng)價(jià)

依據(jù)cut-off值，當(dāng)高熒光細(xì)胞數(shù)≥69時(shí)，記為陽(yáng)性，反之則記為陰性。結(jié)合標(biāo)本臨床診斷，同時(shí)診斷為陽(yáng)性的標(biāo)本記真陽(yáng)性，同時(shí)診斷為陰性的標(biāo)本記真陰性，臨床診斷陽(yáng)性高熒光計(jì)數(shù)檢測(cè)陰性的記為假陰性，臨床診斷陰性高熒光計(jì)數(shù)檢測(cè)陽(yáng)性的則記為假陽(yáng)性。標(biāo)本中真陽(yáng)性53例，假陰性22例，假陽(yáng)性69例，真陰性256例，見表2。

表2 高熒光細(xì)胞診斷指標(biāo)評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì) 例

由表2可知：

靈敏度=真陽(yáng)性/惡性腫瘤患者組=53/（53+22）= 70.67%

特異性=真陰性/非惡性腫瘤患者=

256/（256+69）=78.77%

陽(yáng)性似然比=靈敏度/（1-特異性）=

70.67%/（1-78.77%）=3.32

陰性似然比=22（69+256）/256（53+22）=0.37

由于胸腹水常含間皮、巨噬等細(xì)胞容易被計(jì)數(shù)為高熒光細(xì)胞，所以鏡檢過(guò)程應(yīng)排除間皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，修正高熒光細(xì)胞數(shù)后選用受試者工作特征曲線（如圖1所示）進(jìn)行研究，AUC=0.801。

圖1 高熒光細(xì)胞修正后診斷惡性積液價(jià)值ROC曲線

此時(shí)，cut-off值為68，標(biāo)本中真陽(yáng)性53例，假陰性22例，假陽(yáng)性51例，真陰性274例，見表3。

由表3可知：

靈敏度=真陽(yáng)性/患 者 組 =53/（53+22）=70.67%

特異性=真陰性/對(duì)照組=274/（274+51）=84.31%

陽(yáng)性似然比=靈敏度/（1-特異性）= 70.67%/（1-84.31%）=4.50

陰性似然比=22（51+274）/274（53+22）=0.35

3 討論

現(xiàn)階段，腫瘤檢測(cè)診斷依然局限于“以病理學(xué)檢查為金標(biāo)準(zhǔn)，綜合各種臨床檢查”，這不僅使患者有較大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，而且由于確診實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)，加之檢驗(yàn)者技術(shù)水平差異[6]，易造成患者早期診斷延誤，不能滿足臨床需要。

表3 高熒光細(xì)胞修正后診斷指標(biāo)評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì) 例

高熒光細(xì)胞是一類核酸量較高，儀器檢測(cè)具高熒光強(qiáng)度的細(xì)胞（如圖2所示）。Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀采用鞘流電阻抗檢測(cè)方法，結(jié)合半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)、特殊化學(xué)試劑及核酸熒光染色技術(shù)對(duì)體液中RBC、WBC、HF-BF進(jìn)行定量測(cè)定。

圖2 高熒光細(xì)胞

由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，應(yīng)用Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀檢測(cè)胸腹水高熒光細(xì)胞，惡性腫瘤患者組與非惡性腫瘤患者組經(jīng)Mann-Whitney U檢驗(yàn)，Z= -7.372，P＜0.05，2組數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。惡性腫瘤患者組高熒光細(xì)胞中位數(shù)為118，明顯高于非惡性腫瘤患者組高熒光細(xì)胞中位數(shù)15。檢測(cè)胸腹水標(biāo)本高熒光細(xì)胞下面積AUC=0.801，靈敏度70.67%，特異性84.31%，陽(yáng)性似然比4.50，陰性似然比0.35，表明應(yīng)用Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀檢測(cè)胸腹水高熒光細(xì)胞對(duì)惡性積液的診斷價(jià)值為中等，且檢測(cè)高熒光細(xì)胞是應(yīng)用Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀體外檢測(cè)，不能完全反映體腔內(nèi)癌性變化，因此檢測(cè)高熒光細(xì)胞只能篩查癌變高風(fēng)險(xiǎn)群體，并不能作為癌癥患者的確診實(shí)驗(yàn)[7-9]。由于標(biāo)本為臨床醫(yī)生穿刺身體組織取得，檢測(cè)過(guò)程中可能將間皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞誤計(jì)數(shù)為高熒光細(xì)胞，影響細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，對(duì)熒光計(jì)數(shù)較高的標(biāo)本進(jìn)行染色鏡檢修正高熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)，高熒光細(xì)胞的AUC由0.773提高至0.801，證明修正后的高熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)篩查能力較修正前增強(qiáng)；靈敏度仍然為70.67%，特異性由78.77%提升至84.31%，提升5.54%，則假陽(yáng)性率會(huì)隨之下降；陽(yáng)性似然比由3.32提升至4.50，表明對(duì)真實(shí)患某種惡性腫瘤患者的篩查能力提升；陰性似然比由0.37降至0.35，即正確判斷為陽(yáng)性的可能性是錯(cuò)誤判斷為陽(yáng)性的可能性倍數(shù)有所提高，降低了漏診率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)于檢測(cè)高熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)較高的臨床標(biāo)本，應(yīng)進(jìn)行涂片染色鏡檢排除間皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞對(duì)于高熒光細(xì)胞的干擾，增強(qiáng)細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性，與Boer、Tanaka等報(bào)道基本一致[10-11]。

實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)51例標(biāo)本（乙型肝炎患者13例，肝硬化患者9例，胸膜炎8例，腹膜炎5例，慢性阻塞性肺炎患者8例，肺源性心臟病患者5例，肺結(jié)核患者3例），高熒光數(shù)量高于實(shí)驗(yàn)得出的cut-off值68，且臨床診斷或影像、病理學(xué)檢查并未提示為惡性腫瘤患者，由實(shí)驗(yàn)可知該類患者可能存在患惡性腫瘤風(fēng)險(xiǎn)，因此對(duì)于該類患者建議臨床醫(yī)生作好記錄，對(duì)患者進(jìn)行跟蹤隨訪，囑咐其按時(shí)就診，并進(jìn)行影像、病理學(xué)復(fù)查，降低惡性腫瘤漏檢風(fēng)險(xiǎn)。

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（收稿：2015-01-20 修回：2015-05-15）

Study on high-fluorescent cell for screening malignant hydrothorax or ascites

ZUO Lu-guang,MA Ke,FENG Bo,ZHOU Su-tao,LI Jie
（Department of Clinical Laboratory,the First Affiliated Hospital of Hebei North University, Zhangjiakou 075000,Hebei Province,China）

ObjectiveTo study the value of high-fluorescent cell for the screening of malignant hydrothorax or ascites.MethodsThe clinical diagnosis results and hydrothorax or ascites specimens of 400 outpatients registered from January to December in 2014 were collected,and high-fluorescent cells were counted with Sysmex XE-5000 blood cell analyzer, and then stained for microscopy.Receiver operating characteristic(ROC)curve was used to explore the sensitivity,specificity,positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of high-fluorescent cell for screening malignant hydrothorax or ascites.ResultsThe numbers of high-fluorescent cells of the cancer patients were significantly higher than those of the non-cancer patients,with Z equal to-7.372 and P less than 0.05.The values of the area under curve(AUC),sensitivity, specificity,positive likelihood ratio and negative likelihood ratio were 0.801,70.67%,84.31%,4.50 and 0.35 respectively.ConclusionDetection of high-fluorescent may be used to screen malignant hydrothorax or ascites,and further examination and follow-up have to be performed in case the number of high-fluorescent cells in the hydrothorax or ascites is not less than 68.[Chinese Medical Equipment Journal，2015，36（9）：78-80]

hydrothorax and ascites;high-fluorescent cell;malignant effusion

R318；R446.1

A

1003-8868（2015）09-0078-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2015.09.078

河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究青年基金項(xiàng)目（Q2012141）

左路廣（1987—），男，檢驗(yàn)師，主要從事臨床檢驗(yàn)工作，E-mail：zuoluguang@163.com。

075000河北張家口，河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科（左路廣，馬 科，馮 博，周素濤，李 潔）

馬 科，E-mail：mkzyj@139.com