代振江，劉 釗，曾智勇，湯德元，梁海英，王偉丞

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

PCV2、HCV和PRRSV混合感染的診治

代振江，劉 釗，曾智勇*，湯德元，梁海英，王偉丞

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

豬圓環(huán)病毒病是指以2型圓環(huán)病毒（PCV2）為主要病原、單獨(dú)或繼發(fā)或混合感染其他致病微生物的一系列疾病的總稱，其臨床癥狀特征主要為體質(zhì)下降、消瘦、貧血、黃疸、生長(zhǎng)發(fā)育不良、腹瀉、呼吸困難、母豬繁殖障礙、內(nèi)臟器官及皮膚的廣泛病理變化，特別是腎、脾臟及全身淋巴結(jié)的高度腫大、出血和壞死。本病還可導(dǎo)致豬群產(chǎn)生嚴(yán)重的免疫抑制，從而容易導(dǎo)致繼發(fā)或并發(fā)其他傳染病。豬瘟（HC）是由豬瘟病毒引起的豬的一種急性或慢性、熱性和高度接觸性傳染病，其特征為發(fā)病急、高熱稽留和細(xì)小血管變性，引起全身泛發(fā)性小點(diǎn)出血，脾臟梗死。豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由病毒引起的豬的一種繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)的傳染病，其特征為厭食、發(fā)熱、懷孕后期發(fā)生流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎；幼齡仔豬發(fā)生呼吸系統(tǒng)疾病和大量死亡。

2014年8—11月以來(lái)，貴州某豬場(chǎng)先后已有3批保育豬，發(fā)病率約60%，病死率約30%～40%。該豬場(chǎng)發(fā)病豬皆為保育豬，多于45日齡前后發(fā)病，發(fā)病豬體溫升高、嗜睡、皮膚發(fā)紅、食欲廢絕、喘氣、被毛粗亂、精神沉郁、衰弱、喜臥。剖檢可見(jiàn)病豬全身淋巴結(jié)腫大出血；肺臟呈對(duì)稱性實(shí)變，部分區(qū)域出血、肉變與胸腔粘連；腎臟表面凹凸不平，蠟黃質(zhì)脆；其余臟器未見(jiàn)明顯病變。根據(jù)上述情況，初步診斷為PCV2、HCV和PRRSV的單獨(dú)或多重感染。為了進(jìn)一步確診，對(duì)上述病原進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室核酸檢測(cè)，結(jié)果顯示該豬場(chǎng)發(fā)病豬存在PCV2、HCV和PRRSV的三重感染，現(xiàn)將檢測(cè)過(guò)程報(bào)道如下。

1??材料

1.1?病料

系分別采自3頭發(fā)病仔豬的組織病料（肝、腎、肺、淋巴結(jié)和脾臟等臟器）。

1.2?主要試劑

TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0、PrimeScript One Step PT-PCR Kit VER.2.0、DL2000；其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2??方法

2.1?病料的處理及核酸的提取

分別取適量剖檢病豬的肝、腎、肺臟、淋巴結(jié)和脾臟進(jìn)行碾磨勻漿，反復(fù)凍融3次后，12 000 r/min離心10 min，取上清，用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0試劑盒進(jìn)行核酸的提取。

2.2?病原核酸檢測(cè)

分別用HCV、PRRSV和PCV2的特異性引物，以提取的核酸為模板，參照一步法RT-PCR試劑盒說(shuō)明書，對(duì)HCV、PRRSV進(jìn)行核酸檢測(cè)，其反應(yīng)總體系為50μL：2×1 StepBuffer 25μL，模板7.0μL，上下游引物各1.0μL，PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2μL，RNase Free H2O 14μL；參照PCR試劑盒說(shuō)明書，對(duì)PCV2進(jìn)行核酸檢測(cè)，其反應(yīng)總體系為50μL：ddH2O 10μL，2×GC BufferⅠ25μL，dNTP 8.0μL，上下游引物各2.0μL，模板2μL，Taq酶1μL。上述反應(yīng)程序均為：95 ℃5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃30 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

3??結(jié)果

病原核酸檢測(cè)結(jié)果表明該豬場(chǎng)送檢發(fā)病豬體內(nèi)存在HCV、PRRSV和PCV2的多重感染 （圖1）。

圖1 病原檢測(cè)結(jié)果

4??結(jié)果分析與討論

據(jù)了解，該豬場(chǎng)仔豬于2日齡PRV滴鼻免疫，21日齡斷奶后2 d首免豬瘟疫苗2頭份，45日齡左右進(jìn)行豬瘟疫苗二免。該豬場(chǎng)之前的抗體水平監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，斷奶仔豬的豬瘟、藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率分別為100%、80%，45日齡左右的保育豬豬瘟、藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率分別為20%、40%，分析可能是由于該豬場(chǎng)在斷奶2 d后即進(jìn)行豬瘟免疫，此時(shí)豬瘟母源抗體效價(jià)較高，中和了疫苗中的抗原，導(dǎo)致豬瘟的免疫效果不理想；同時(shí)，45日齡左右藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率為40%，表明該階段已有部分仔豬出現(xiàn)野毒感染，這與病原檢測(cè)結(jié)果一致。

病原檢測(cè)結(jié)果表明發(fā)病豬群存在3種病毒的多重感染，鑒于豬場(chǎng)未對(duì)PRRSV、PCV2進(jìn)行免疫且HCV免疫失敗，故建議待發(fā)病豬群穩(wěn)定后及時(shí)補(bǔ)免HCV和PRRSV疫苗，種豬積極做好PCV2的疫苗免疫；對(duì)種豬及仔豬做系統(tǒng)的抗體檢測(cè)，以掌握母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，調(diào)整優(yōu)化免疫程序。此外，值得注意的是剖檢時(shí)發(fā)現(xiàn)發(fā)病豬腎臟存在因用藥導(dǎo)致的損傷，故建議暫停發(fā)病豬群的藥物保健，同時(shí)在飼料或飲水中適當(dāng)添加電解多維，飼喂優(yōu)質(zhì)飼料。同時(shí)，進(jìn)一步加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，進(jìn)行嚴(yán)格徹底的清潔和消毒以減輕感染壓力。

2014-11-21)

“攜帶遺傳標(biāo)記的豬圓環(huán)病毒反向遺傳操作平臺(tái)的構(gòu)建”，省校合作計(jì)劃項(xiàng)目，黔科合LH字[2014]7670號(hào)

代振江（1991—），男，在讀碩士，研究方向：動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)。

曾智勇（1978—），男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)研究。