孫良明 保紅云 張媛媛 萬亞靜 鄭學(xué)雙 孫百玲

（上海綠谷生命園醫(yī)藥有限公司 上海 201707）

丹酚酸B純化用大孔吸附樹脂的篩選

孫良明*保紅云 張媛媛 萬亞靜 鄭學(xué)雙 孫百玲

（上海綠谷生命園醫(yī)藥有限公司 上海 201707）

目的：篩選出適合丹酚酸B純化的大孔吸附樹脂。方法：通過靜態(tài)-動態(tài)吸附實驗對丹酚酸B純化用大孔吸附樹脂進行篩選。以靜態(tài)吸附率、解吸率，動態(tài)吸附率、洗脫率及合格洗脫率為指標考察不同型號及同一型號不同廠家的樹脂純化丹酚酸B的性能。結(jié)果：D101型大孔吸附樹脂較其他型號樹脂更適合丹酚酸B的純化；而天津海光及西安藍曉兩個廠家D101型大孔吸附樹脂純化丹酚酸B的性能略有差異性。結(jié)論：D101型大孔吸附樹脂適用于丹酚酸B的純化。

丹參 丹酚酸B 大孔吸附樹脂

丹酚酸B是中藥丹參水溶性主要成分，具有抗腦及心肌缺血、調(diào)節(jié)血脂代謝、促血管生成及抗血小板等作用[1]，對冠心病、心絞痛[2-3]等疾病療效顯著。大孔吸附樹脂因吸附量大、選擇性高、易洗脫、易再生及操作簡單等優(yōu)點[4-5]，較常用于丹酚酸B的富集與純化[6-8]。目前，大孔吸附樹脂分離純化丹酚酸B一般針對樹脂型號、樹脂用量、除雜劑、洗脫劑、流速等參數(shù)進行研究，尚未進行相同型號不同廠家樹脂洗脫效果的探討。由于目前市場上大孔吸附樹脂種類眾多，生產(chǎn)的大孔吸附樹脂在樹脂材料方面缺乏統(tǒng)一、嚴格的質(zhì)量控制標準，導(dǎo)致大孔吸附樹脂在性能、安全性方面存在較大差異，甚至同一型號不同廠家的樹脂吸附洗脫能力也有不同，因此在研究大孔吸附樹脂分離純化丹酚酸B時，除了確定常規(guī)參數(shù)外，有必要對不同廠家同一型號樹脂進行對比研究。我公司一直致力于丹酚酸B分離純化的研究，具有較成熟的大孔吸附樹脂分離純化丹酚酸B工藝。本研究根據(jù)我公司生產(chǎn)需求及樹脂生產(chǎn)現(xiàn)狀，對不同型號及同一型號不同廠家大孔吸附樹脂對丹酚酸B的吸附洗脫效果進行考察，篩選出純化丹酚酸B效果較佳的大孔樹脂，為其應(yīng)用于丹酚酸B產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器、試劑與材料

1200型高效液相色譜儀，配備四元泵及二極管陣列檢測器、Chemstation數(shù)據(jù)處理軟件（美國Agilent公司）；R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；AB135-S型電子天平（瑞士Mettler Toledo）。

D101型大孔吸附樹脂（西安藍曉科技有限公司，天津海光化工有限公司）；HP20型大孔吸附樹脂（日本三菱樹脂公司）；LX101、LX17型大孔吸附樹脂（西安藍曉科技有限公司）；丹參藥材（購于山東魯安中藥飲片有限公司）；丹酚酸B對照品（中國食品藥品檢定所，95.4%，批號111562-201212）；甲醇為色譜純；水為重蒸水；磷酸為分析純。

2 實驗方法

2.1 上柱溶液的制備

將丹參藥材切粒，取丹參粗顆粒200 g，分別加入70%乙醇1 600、1 400、1 400 ml在80±3 ℃回流提取3次，每次2 h。合并提取液并減壓過濾，濾液在真空度-0.06～-0.1 MPa、溫度為60 ℃下濃縮至約200 ml，濃縮液加4倍量重蒸水充分攪拌，靜置4 h以上，減壓過濾，即得上柱溶液。

2.2 丹酚酸B的測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Zorbax C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-5 mmol/L磷酸二氫鉀（30∶70）；進樣量10 μl，流速1.0 ml/min；檢測波長290 nm；柱溫25 ℃；理論塔板數(shù)按丹酚酸B計算不低于1 500，丹酚酸B峰與相鄰峰的分離度應(yīng)大于2.0。

根據(jù)企業(yè)標準規(guī)定，在此檢測條件下，丹酚酸B（色譜）純度 ＞ 80%，峰面積 ＞ 500 mAU·s為合格洗脫液。

2.2.2 對照品溶液的制備

取丹酚酸B對照品15 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2.0 ml，置20 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 樣品溶液的制備

精密吸取上柱溶液或洗脫液200 μl，用流動相稀釋至1.5 ml，0.22～0.45 μm微孔濾膜過濾后備用。

2.3 不同型號大孔吸附樹脂的篩選

2.3.1 靜態(tài)吸附法篩選大孔吸附樹脂

稱取HP20、LX101、D101（天津海光、西安藍曉）、LX17型樹脂適量（相當于干樹脂1 g）置于100 ml錐形瓶中，精密加入上柱溶液30 ml（丹酚酸B 252 μg/ml），室溫下振搖24 h（100 r/min），濾紙過濾，取濾液進行色譜檢測，按照式1計算吸附率；將濾出的樹脂加入到另一錐形瓶中，精密加入30%乙醇30 ml，室溫下振搖24 h，取濾液進行色譜檢測，按照式2計算解吸率。

注：M0、M1和M2分別為上柱液、吸附后濾液和30%乙醇洗脫液中丹酚酸B質(zhì)量（μg）

2.3.2 動態(tài)吸附法篩選大孔吸附樹脂

將檢測合格的大孔吸附樹脂160 g（約250 ml）裝入層析柱（5 cm×35 cm）中，用重蒸水進行沖洗至流出液澄清。用3倍量柱體積（bed volume，BV）的95%乙醇以2.5 ml/min的流速進行洗滌，再用重蒸水沖洗至無醇味。

取上柱溶液450 ml以0.5 BV/h的流速上樣，然后用3 BV的純化水以1.5 BV/h的流速進行水洗，接著用2 BV 10%乙醇溶液以1 BV/h的流速進行洗滌除雜，流出液、水洗液和洗滌液分別取樣并進行HPLC檢測。

最后用4 BV 30%乙醇溶液進行洗脫，流速為1 BV/h，每10 min取樣進行HPLC檢測，根據(jù)式3～5計算吸附率、洗脫率及合格洗脫率，并繪制洗脫曲線。

注：C0、C1、C2和C3分別為上柱液、流出液和水洗液及10%乙醇洗滌液、洗脫液和合格洗脫液中丹酚酸B濃度（mg/ml）； V0、V1、V2和V3為上柱液、流出液和水洗液及10%乙醇洗脫液、洗脫液和合格洗脫液總體積（ml）

2.4 兩廠D101大孔吸附樹脂純化丹酚酸B效果比較

稱取檢測合格的天津海光及西安藍曉生產(chǎn)的D101型樹脂160 g 各5份（柱體積250 ml），濕法裝柱并進行預(yù)處理后，分別量取上柱溶液300、375、450、500 和550 ml同上吸附、洗滌和洗脫，每步取樣并進行色譜檢測，計算吸附率、洗脫率、合格洗脫率。

3 結(jié)果

3.1 不同型號大孔吸附樹脂的篩選

3.1.1 靜態(tài)吸附法篩選大孔吸附樹脂

5種樹脂對丹酚酸B吸附-解吸能力見圖1；綜合比較靜態(tài)吸附率及靜態(tài)解吸率，D101型大孔吸附樹脂對丹酚酸B的吸附解吸效果最好，而LX17型大孔樹脂作為一種極性樹脂對丹酚酸B的吸附解吸能力較差，不利于丹酚酸B的純化。

圖1 5種樹脂靜態(tài)吸附-解吸結(jié)果

3.1.2 動態(tài)吸附法篩選大孔吸附樹脂

5種樹脂動態(tài)洗脫丹酚酸B的結(jié)果表明，D101型（西安、天津）大孔樹脂洗脫曲線的對稱性較好，峰面積較大；而LX101及LX17型樹脂洗脫曲線中丹酚酸B峰面積普遍較小，曲線對稱性較差，有明顯的拖尾現(xiàn)象導(dǎo)致合格洗脫液增多，不利于洗脫液的收集（圖2）。此外，D101型大孔吸附樹脂（西安、天津）吸附率、洗脫率、合格洗脫率均較高，合格洗脫液點數(shù)較少，收集容易，且合格洗脫液質(zhì)量較高；LX101型大孔樹脂對丹酚酸B具有較好的吸附能力，但洗脫能力較差，導(dǎo)致合格洗脫液增多，合格洗脫液質(zhì)量降低，合格洗脫率較低，不利于丹酚酸B的純化（表1）。

圖2 不同型號樹脂洗脫曲線

表1 4種型號樹脂吸附、洗脫比較

3.2 兩廠D101大孔吸附樹脂純化丹酚酸B效果比較

對兩個廠家D101型大孔吸附樹脂進行純化丹酚酸B效果比較，隨著上樣量的增大，它們的吸附率、洗脫率及合格洗脫率均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢；天津海光和西安藍曉D101型大孔吸附樹脂最佳上樣量、吸附率、洗脫率及合格洗脫率分別為21.25vs24.81 mg/g（丹酚酸B/大孔吸附樹脂），91.83%vs92.53%、94.00%vs91.12%、87.22%vs86.01%（表2）。它們均適用于丹酚酸B的純化，只是吸附洗脫性能略有不同。

表2 上樣量對丹酚酸B純化效果的影響

4 討論

本論文采用靜態(tài)和動態(tài)吸附-解吸法對不同型號及同一型號不同廠家的樹脂進行篩選研究，除以吸附率、洗脫率等常規(guī)指標進行評價外，還在規(guī)定合格洗脫液標準的基礎(chǔ)上，增加了以合格洗脫液及洗脫曲線作為評價指標，能更加充分地評價樹脂分離純化丹酚酸B的效果；與其他純化方法相比，本研究能在保證較高吸附率和洗脫率的基礎(chǔ)上得到純度大于80%的丹酚酸B，所建立的大孔樹脂質(zhì)量標準及大孔吸附樹脂純化丹酚酸B的工藝對工業(yè)化生產(chǎn)中樹脂型號、生產(chǎn)廠家篩選具有一定的借鑒意義。

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Screening of macroreticular resin for the purification of salvianic acid B from Salvia miltiorrhiza

SUN Liangming*, BAO Hongyun, ZHANG Yuanyuan, WAN Yajing, ZHENG Xueshuang, SUN Bailing

(Shanghai Green-Valley Shengmingyuan Pharmaceutical Co. Ltd., Shanghai 201707, China)

Objective:To select a kind of macroreticular resin for separating salvianolic acid B from Salvia miltiorrhiza.Methods:Macroreticular resins for the purification of salvianolic acid B were screened by the static-dynamic absorption experiment. The different types of resins and the same type of resins from different companies were evaluated for their abilities to purify salvianolic acid B by measuring the rates of the static and dynamic absorption and elution and the qualified elution rate.Results:Macroreticular resin D101 was more effective for purifying salvianolic acid B than others and its absorption-elution performance to salvianolic acid B was a little bit different between the resins produced in Tianjin Haiguang and Xi’an Lanxiao.Conclusion:Macroreticular resin D101 is suitable to the purification of salvianolic acid B.

Salvia mihiorrhiza; salvianolic acid B; macroreticular resin

R284.2; TQ460.6

A

1006-1533(2015)21-0073-04

2015-07-06）

孫良明（1972-），男，高級工程師，主要從事中藥工藝技術(shù)研究及質(zhì)量管理。E-mail：sunliangming136@sina.com