鞏莉，華穎，劉大群，陳文烜

1(浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食品科學(xué)研究所，浙江省果蔬保鮮與加工技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江杭州，310021)

2(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 茶與食品科技學(xué)院，安徽合肥，230031)

2011年，我國(guó)成為世界第一大番茄制品出口國(guó)，到2012年我國(guó)已建成番茄加工生產(chǎn)線317條，番茄醬的年產(chǎn)量突破200萬t，出口份額約占全球市場(chǎng)的40%［1］。番茄渣大多為番茄醬加工副產(chǎn)品，全國(guó)年產(chǎn)量超過50萬t。番茄廢渣生產(chǎn)季節(jié)性強(qiáng)，極易造成積壓、浪費(fèi);同時(shí)水分含量大(達(dá)到75%以上)，易發(fā)霉變質(zhì)，污染環(huán)境。鮮番茄渣酸度低(pH約為4.3左右)，并含有單寧、果膠等抗?fàn)I養(yǎng)因子，直接飼喂動(dòng)物，易造成畜禽消化不良，導(dǎo)致畜禽產(chǎn)量、質(zhì)量降低。

目前我國(guó)蛋白質(zhì)飼料缺口每年至少達(dá)1 200萬t［2］，依靠傳統(tǒng)方式提供飼料已遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需要。菌體蛋白是一種新興的蛋白來源，通過微生物發(fā)酵農(nóng)業(yè)廢棄物實(shí)現(xiàn)蛋白飼料的生產(chǎn)，是一種經(jīng)濟(jì)、實(shí)用、高效的蛋白飼料生產(chǎn)方法。微生物發(fā)酵既可以解除纖維素、植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子，又可以通過發(fā)酵產(chǎn)生多種酶，改善發(fā)酵產(chǎn)品品質(zhì)，提高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及蛋白質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)的消化率［3-6］。目前研究較多的有馬鈴薯、秸稈等，且大多使用幾種菌混合發(fā)酵來實(shí)現(xiàn)原料的更好利用［7-9］。用番茄廢渣作為菌體蛋白飼料生產(chǎn)原料的研究還較少，本實(shí)驗(yàn)以番茄廢渣為原料，以黑曲霉、綠色木霉、熱帶假絲酵母和產(chǎn)朊假絲酵母為出發(fā)菌，通過階段性發(fā)酵，優(yōu)化組合，以期獲得高蛋白質(zhì)含量的番茄廢渣飼料。

1 材料與設(shè)備

1.1 原料和試劑

番茄廢渣購(gòu)自寧波銅錢橋食品開發(fā)有限公司，為番茄醬生產(chǎn)廢渣，取當(dāng)天產(chǎn)生的廢渣，分裝并置于-20℃冰箱保存;麩皮，為市售小麥麩皮。

甲基纖維素鈉，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;3，5-二硝基水楊酸，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;多聚半乳糖醛酸，阿法埃莎化學(xué)有限公司;酪氨酸，上?？▋?yōu)生物技術(shù)有限公司，以上試劑均為分析純?cè)噭?/p>

1.2 菌種

黑曲霉 3.031 6(Aspergillus niger)，綠色木霉3.294 2(Trichoderma viride)，熱帶假絲酵母2.058 7(Candida tropicalis)，產(chǎn)朊假絲酵母2.028 1(Candida utilis)，購(gòu)于中科院普通微生物研究所。

1.3 培養(yǎng)基

酵母菌培養(yǎng)基:葡萄糖1%、蛋白胨1%、酵母提取物0.5%，121℃滅菌20 min，室溫保存?zhèn)溆?。液體培養(yǎng)基用于菌種活化，固體培養(yǎng)基用于菌種活菌數(shù)檢測(cè)、菌落觀察。

PDA:將馬鈴薯去皮，切成小塊，添加1 000 mL水，煮沸30 min，用紗布將渣濾去，并將水補(bǔ)足至1 000 mL，葡萄糖 20.0 g、瓊脂 15.0 g、pH 自然，121℃滅菌20 min，室溫保存?zhèn)溆?。液體培養(yǎng)基用于菌種活化培養(yǎng)，固體用于菌落形態(tài)觀察。

Czapek’s瓊脂:方法參照標(biāo)準(zhǔn)配制，pH調(diào)至6.0～6.5，121℃滅菌20 min，室溫保存?zhèn)溆谩Ｒ后w培養(yǎng)基用于菌種活化培養(yǎng)，固體用于菌落形態(tài)觀察。

本研究所涉及番茄殘?jiān)囵B(yǎng)基均為在上述幾種培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，添加適當(dāng)比例的番茄殘?jiān)螓熎?具體比例視具體實(shí)驗(yàn)要求確定)。

1.4 儀器與設(shè)備

Metrohm 877 Titrino plus自動(dòng)滴定儀，瑞士萬通;GBC Cintra 20紫外-可見分光光度計(jì)，澳大利亞 GBC公司;Thermo MR23i高速低溫冷凍離心機(jī)，法國(guó)JOUAN公司;UDK127型高效凱式定氮儀，嘉盛(香港)科技有限公司;LDZX-75KBS立式壓力蒸汽滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠;HPX-9162 MBE數(shù)顯電熱培養(yǎng)箱，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司;SPX-150C型恒溫恒濕箱，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司;梅特勒-托利多 HB43-S鹵素水分測(cè)定儀，瑞士萬通。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 菌種的活化

用75%酒精脫脂棉對(duì)安瓿管表面消毒，火焰加熱頂端，滴1滴無菌水使之裂開，鑷子敲下。用無菌試管吸取0.3～0.5 mL液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管，振蕩，吸取全部菌懸液于2只培養(yǎng)試管中，28～30℃培養(yǎng)3～4 d使菌株復(fù)活，再經(jīng)過3代斜面純培養(yǎng)。

2.2 生長(zhǎng)曲線的制作

酵母菌:光電比濁法，在起初4 h內(nèi)，每小時(shí)取樣1次，以后每2 h取樣1次，于600 nm處測(cè)定菌液的OD值，并繪制生長(zhǎng)曲線。

霉菌:采取平板菌落面積法，28～30℃培養(yǎng)，每4 h測(cè)量1次菌落半徑。

2.3 刺激圈實(shí)驗(yàn)

2.3.1 可行性實(shí)驗(yàn)

將綠色木霉、黑曲霉、熱帶假絲酵母和產(chǎn)朊假絲酵母分別接種在使用番茄廢渣制作的固體培養(yǎng)基中，28～30℃培養(yǎng)2～3 d，觀察菌種的生長(zhǎng)狀況。

2.3.2 共生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)

將經(jīng)過稀釋的酵母菌281和587分別接種在酵母菌培養(yǎng)基和番茄廢渣培養(yǎng)基上，將牛津杯放在培養(yǎng)皿中間，將液體培養(yǎng)的綠色木霉和黑曲霉分別取0.2 mL接種到已涂布281和587的培養(yǎng)基上(接在牛津杯中)，培養(yǎng)4～5 d，觀察菌落狀態(tài)。

將綠色木霉和黑曲霉分別點(diǎn)接在酵母菌培養(yǎng)基和番茄廢渣培養(yǎng)基上，待菌落長(zhǎng)出，在菌落中央放上牛津杯，取0.2 mL酵母菌，接種到牛津杯中，培養(yǎng)2～3 d，觀察菌落狀態(tài)。

2.4 單菌種發(fā)酵實(shí)驗(yàn)

2.4.1 番茄廢渣及麩皮最佳配比試驗(yàn)

分別接種兩種霉菌于添加不同比例麩皮的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基總重75 g，再分別添加硫酸銨1 g、尿素0.5 g，培養(yǎng)4 d后分別測(cè)定發(fā)酵液中總糖、還原糖以及蛋白質(zhì)的含量，以確定番茄廢渣的添加量。

2.4.2 發(fā)酵時(shí)間試驗(yàn)

在2.4.1所確定的最佳原料比例的條件下分別接種兩種霉菌，每隔24 h取1次樣，測(cè)定發(fā)酵液中總糖、還原糖的含量，確定最佳的酵母菌接種時(shí)間(即糖分含量達(dá)到最高的時(shí)間)。

2.4.3 霉菌發(fā)酵能力的測(cè)定

在2.4.1確定的條件下分別接種兩種霉菌發(fā)酵，每隔24 h取樣，測(cè)定發(fā)酵產(chǎn)物果膠酶和纖維素酶的含量，并在2.4.2所確定的時(shí)間測(cè)定還原糖和總糖含量，比較兩種菌的發(fā)酵能力。

2.4.4 酵母菌發(fā)酵產(chǎn)蛋白能力的實(shí)驗(yàn)

在15%麩皮添加量的條件下，分別接種兩種酵母菌，每隔24 h取1次樣，測(cè)定發(fā)酵產(chǎn)物中蛋白酶及蛋白質(zhì)的含量，比較酵母菌的發(fā)酵能力。

2.5 混菌種發(fā)酵實(shí)驗(yàn)

2.5.1 霉菌復(fù)配

根據(jù)試驗(yàn)2.4的結(jié)果，對(duì)綠色木霉和黑曲霉按照不同比例復(fù)配，每24 h取樣，測(cè)定總糖、還原糖含量，在發(fā)酵4 d后測(cè)定蛋白質(zhì)含量，確定最佳的復(fù)配比例及最佳的酵母菌接種時(shí)間。

2.5.2 添加酵母菌發(fā)酵試驗(yàn)

在試驗(yàn)2.5.1的基礎(chǔ)上，添加最佳比例的黑曲霉和綠色木霉發(fā)酵，到最佳發(fā)酵時(shí)間，分別添加，281、587、281∶587=1∶1、1∶2、1∶3的酵母菌，以后每隔 24 h測(cè)定蛋白質(zhì)及還原糖和總糖的含量，確定最佳的菌種比例及時(shí)間。

2.6 指標(biāo)測(cè)定方法

總糖和還原糖:參考鄭遠(yuǎn)斌的測(cè)定方法，平行測(cè)定3次。

蛋白質(zhì):參考 GB 5009.5［11］，使用凱式定氮儀，每次取樣0.6～0.7 g，平行測(cè)定2次。

纖維素酶:參考 NY/T 912-2004［12］的方法，樣品研磨粉碎，取1 g測(cè)定，平行測(cè)定3次。

果膠酶:參考曹健康［13］的方法，發(fā)酵產(chǎn)品粉碎，取1 g處理測(cè)定，平行測(cè)定3次。

蛋白酶:參考張長(zhǎng)霞和 SB/T ISO17-1999［14］的方法，平行測(cè)定3次。

水分測(cè)定:使用鹵素水分測(cè)定儀，平行測(cè)定3次。

3 結(jié)果與分析

3.1 最佳接種時(shí)間及刺激圈實(shí)驗(yàn)

3.1.1 最佳接種時(shí)間的確定

由生長(zhǎng)曲線可知(圖未列出)，霉菌的生長(zhǎng)曲線呈對(duì)數(shù)型，在起初24 h內(nèi)緩慢生長(zhǎng)，24 h后迅速生長(zhǎng)，48 h后進(jìn)入生長(zhǎng)旺盛期，細(xì)胞代謝最旺盛，代謝產(chǎn)物豐富，培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成分足夠滿足菌落生長(zhǎng)，菌落周圍的菌絲體生長(zhǎng)旺盛，故選取培養(yǎng)48 h左右的菌落周圍菌絲體作為接種原菌，并選擇此時(shí)期作為添加酵母菌的最佳時(shí)期。

酵母菌在生長(zhǎng)開始6 h內(nèi)生長(zhǎng)較緩慢，7～14 h菌種生長(zhǎng)迅速，進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，此期間細(xì)胞生長(zhǎng)速度最快，代時(shí)最短，酶的活力最強(qiáng)，所以后續(xù)接種實(shí)驗(yàn)中選擇培養(yǎng)12 h左右的菌種接種，可實(shí)現(xiàn)微生物的最有效生長(zhǎng)繁殖和對(duì)原材料的最好利用。16～24 h內(nèi)酵母菌的生長(zhǎng)處于穩(wěn)定期，期間代時(shí)延長(zhǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)能力衰弱，繁殖速度與死亡速度基本相等，菌體數(shù)目達(dá)到最大值，這個(gè)期間是收獲細(xì)胞的最佳時(shí)期。24 h后菌落進(jìn)入衰落期，活菌數(shù)目下降。

3.1.2 可行性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4種菌均可利用番茄廢渣制成的培養(yǎng)基生長(zhǎng)，與自身相應(yīng)培養(yǎng)基比較，雖生長(zhǎng)稍慢，但最終均可達(dá)到生長(zhǎng)較旺盛狀態(tài)，說明4種菌株均可利用番茄廢渣滿足自身的生長(zhǎng)需求，利用番茄廢渣生產(chǎn)菌體蛋白飼料是可行的。

3.1.3 共生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4種菌種兩兩之間是可以共生的。刺激圈大小:熱帶假絲酵母+綠色木霉＞產(chǎn)朊假絲酵母+綠色木霉＞產(chǎn)朊假絲酵母+黑曲霉＞熱帶假絲酵母+黑曲霉，說明熱帶假絲酵母和綠色木霉的共生效果最佳。

在先接種霉菌再接種酵母菌的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在生長(zhǎng)旺盛的霉菌培養(yǎng)基中接種酵母菌，酵母菌可以生長(zhǎng)，有明顯的生長(zhǎng)圈，說明霉菌的代謝產(chǎn)物可以有效地刺激酵母菌的生長(zhǎng)，即酵母菌可以利用霉菌的代謝產(chǎn)物進(jìn)行自身的生長(zhǎng)。

3.2 單菌發(fā)酵實(shí)驗(yàn)

3.2.1 番茄廢渣及麩皮最佳配比試驗(yàn)

由表1可知，隨著麩皮添加量的增加，產(chǎn)物中總糖和還原糖的含量逐步增大，說明麩皮的添加顯著影響著微生物的生長(zhǎng)，對(duì)發(fā)酵起著重要的作用。

表1 不同麩皮添加量下發(fā)酵產(chǎn)品的還原糖、總糖變化情況Table 1 The influence of bran addition on reducing sugar and total sugar

圖1所示為減去原料所含氮之后的蛋白質(zhì)增加量，可見發(fā)酵后產(chǎn)品蛋白質(zhì)含量有明顯的增加，說明通過微生物發(fā)酵提高蛋白質(zhì)含量的實(shí)驗(yàn)是可行的，在麩皮添加量為15%時(shí)，蛋白質(zhì)增加最明顯，即此時(shí)微生物對(duì)原料的利用最充分，發(fā)酵效果最好，故選取麩皮添加量為15%進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 不同麩皮添加量發(fā)酵產(chǎn)品蛋白質(zhì)增加量Fig.1 The increment of protein under different material

3.2.2 發(fā)酵時(shí)間的確定

在麩皮添加量為15%條件下，分別接種兩種霉菌，每隔24 h取1次樣，測(cè)定發(fā)酵液中總糖、還原糖的含量，如表2所示。

表2 還原糖和總糖含量隨發(fā)酵時(shí)間變化情況Table 2 The influence of fermentation time on reducing sugar and total sugar

發(fā)酵過程中能夠產(chǎn)生兩種酶系:酶系1和酶系2，酶系1將番茄廢渣成分分解成可溶性糖，酶系2將這種可溶性的糖轉(zhuǎn)化為還原糖供微生物生長(zhǎng)利用。由表2可知，在發(fā)酵初期，還原糖和總糖含量都呈迅速上升趨勢(shì)，在發(fā)酵2 d后，總糖含量開始下降，還原糖含量趨于穩(wěn)定，說明體系內(nèi)的物質(zhì)被分解利用，在第2 d左右分解成的可溶性糖含量較高，此時(shí)是菌種生長(zhǎng)的最佳時(shí)期，且根據(jù)霉菌的生長(zhǎng)曲線可以看出，霉菌在48 h左右呈旺盛生長(zhǎng)狀態(tài)，所以選在接種霉菌第2 d后接種培養(yǎng)12 h的酵母菌，此時(shí)體系內(nèi)溶性糖含量較高，被霉菌分解利用的較少，可供酵母菌迅速生長(zhǎng)。

對(duì)發(fā)酵過程的果膠酶和纖維素酶進(jìn)行分析，結(jié)果見圖2和圖3。

圖2 果膠酶活隨發(fā)酵時(shí)間變化情況Fig.2 The influence of fermentation time on pectinase activity

由圖2和圖3可知，果膠酶和纖維素酶的含量隨著發(fā)酵的進(jìn)行均先上升后下降，且在第2天達(dá)到最大值，后迅速下降，這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果跟還原糖和總糖的變化情況一致，說明在第2天，酶系1活性最強(qiáng)，果膠和纖維素被分解利用的最多，得到的總糖最多，在發(fā)酵第2天是接種酵母菌的最佳時(shí)機(jī)。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)生的果膠酶活和纖維素酶活力都高于綠色木霉，說明黑曲霉較綠色木霉有更強(qiáng)的分解纖維素和果膠的能力，更適于番茄廢渣的分解利用。

圖3 纖維素酶活隨發(fā)酵時(shí)間的變化情況Fig.3 The influence of fermentation time on cellulose activity

對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物中蛋白酶及蛋白質(zhì)含量進(jìn)行分析比較，從而考察酵母菌利用番茄廢渣生長(zhǎng)能力，結(jié)果見圖4和圖5。酸性蛋白酶是影響植物蛋白的利用率和發(fā)酵產(chǎn)物中氨基酸含量的重要因素，酸性蛋白酶活性較高的菌種植物蛋白的消化率和氨基酸含量都相對(duì)較高，所以應(yīng)選擇酸性蛋白酶活力較高的菌株，以得到更優(yōu)的產(chǎn)品。

圖4 蛋白酶活隨發(fā)酵時(shí)間變化情況Fig.4 The influence of fermentation time on protease activity

由圖4和圖5可知，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，蛋白酶的活性逐步增強(qiáng)，在第3天以后趨于穩(wěn)定狀態(tài)，且產(chǎn)朊假絲酵母的蛋白酶活性高于熱帶假絲酵母。而蛋白質(zhì)含量則先上升后下降，在第3天達(dá)到最大值，隨后緩慢下降，這可能是由于在第4天后培養(yǎng)基中供微生物生長(zhǎng)發(fā)育的原料不足，酵母菌無法再進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，且此時(shí)酵母菌的生長(zhǎng)處于衰弱期，所以選擇在第4天作為收獲期。

圖5 蛋白質(zhì)含量隨發(fā)酵時(shí)間的變化情況Fig.5 The influence of fermentation time on protein

3.3 混菌種發(fā)酵實(shí)驗(yàn)

3.3.1 霉菌復(fù)配

對(duì)綠色木霉和黑曲霉按照不同比例進(jìn)行復(fù)配，每24 h取1次樣，總糖、還原糖的變化情況如圖6和圖7所示。

圖6 不同配比菌種發(fā)酵產(chǎn)品還原糖含量Fig.6 The reducing sugar content of solid medium composite bacteria fermentation

由圖6和圖7可知，還原糖和總糖的含量都是先上升后下降，還原糖在第3天達(dá)到最大值，而總糖在第2天達(dá)到最大，這可能由于在發(fā)酵第2天，系統(tǒng)中酶系1活性最高，將纖維素等大分子物質(zhì)分解成總糖的能力強(qiáng)，糖含量高，而此時(shí)霉菌處于開始迅速增長(zhǎng)期，所以選擇在第2天接種酵母菌。其中綠色木霉和黑曲霉比例為1∶2時(shí)，還原糖和總糖的含量最高，且此時(shí)糖分的含量分別高于綠色木霉和黑曲霉單獨(dú)發(fā)酵時(shí)的含量(表2)，所以選取綠色木霉與黑曲霉比例1∶2為最佳配比。

圖7 不同配比菌種發(fā)酵產(chǎn)品總糖含量Fig.7 The total sugar content of solid medium composite bacteria fermentation

3.3.2 添加酵母菌發(fā)酵試驗(yàn)

由圖8可知，蛋白質(zhì)的含量總體呈上升趨勢(shì)，在第4天達(dá)到最大值，后處于穩(wěn)定狀態(tài)，添加酵母菌后，單獨(dú)添加熱帶假絲酵母的培養(yǎng)基中蛋白質(zhì)含量較高，同時(shí)高于只添加霉菌單獨(dú)發(fā)酵的培養(yǎng)基，所以選擇添加霉菌后單獨(dú)添加熱帶假絲酵母為最佳發(fā)酵方案。

圖8 不同配比菌種發(fā)酵蛋白質(zhì)含量Fig.8 The protein content of different composite baeteria fermentation

4 討論

微生物是個(gè)龐大的體系，其結(jié)構(gòu)與功能也是多樣化的，某些微生物對(duì)特定的底物有強(qiáng)的降解能力，但卻缺乏對(duì)其他物質(zhì)的降解能力，所以需要通過微生物之間的協(xié)同作用，共同作用于底物，使底物得到更好的分解利用，從而得到較優(yōu)的發(fā)酵產(chǎn)品［15-17］。葉龍翔等用黑曲霉、酵母菌和木霉(1∶2∶1)混菌固體發(fā)酵硫苷的降解率最高達(dá)到89.49%。王曉凡等［18］用多菌復(fù)合固態(tài)發(fā)酵菜籽粕硫苷降解率達(dá)到91.36%，顯著提高了原料利用率。Khan［19］等利用混菌發(fā)酵，濾紙酶活(FPA)和葡聚糖內(nèi)切酶(CMC)酶活分別達(dá)到1.43 U/mL，2.40 U/mL，發(fā)酵第4天還原糖含量可達(dá)2.58 g/L，得到顯著提高。由于微生物本身機(jī)制的復(fù)雜性，微生物之間的共生狀態(tài)也是復(fù)雜的，并非所有的微生物之間都是互利共生的，所以要選取最佳的發(fā)酵方式，需要了解菌種之間的共生狀態(tài)，后進(jìn)行試驗(yàn)研究。黑曲霉是公認(rèn)的代謝產(chǎn)物可直接用于食品工業(yè)的高產(chǎn)果膠酶菌株，而綠色木霉由于含有能夠同時(shí)降解殼聚糖和纖維素的雙功能酶［20-23］，也得到廣泛應(yīng)用，研究發(fā)現(xiàn)綠色木霉和黑曲霉存在互惠共生關(guān)系，兩者可進(jìn)行混菌發(fā)酵對(duì)番茄廢渣進(jìn)行降解處理。

總糖的含量代表著發(fā)酵環(huán)境中菌種酶系1將原材料降解成大分子多糖及小分子糖的能力，總糖含量越多說明降解原材料的能力越強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明黑曲霉發(fā)酵過程中所得總糖較綠色木霉多，且纖維素酶和果膠酶的測(cè)定結(jié)果也同樣地說明黑曲霉酶活較強(qiáng)，霉菌混均發(fā)酵實(shí)驗(yàn)也顯示在在綠色木霉∶黑曲霉=1∶2的情況下原材料可得到較好的降解。且在發(fā)酵第2天時(shí)總糖含量最大，還原糖利用較少，是添加酵母菌的最佳時(shí)期。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在只添加熱帶假絲酵母的情況下可得到較高蛋白質(zhì)含量的發(fā)酵產(chǎn)品，符合發(fā)酵目的及要求。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，選擇麩皮添加量為15%既可有效地進(jìn)發(fā)酵又確保了以番茄廢渣為主要原料，所以發(fā)酵原料即為15%麩皮和番茄廢渣。最佳菌種配比為:綠色木霉∶黑曲霉=1∶2，發(fā)酵48 h后添加熱帶加絲酵母，再發(fā)酵4 d收取發(fā)酵產(chǎn)品。此時(shí)發(fā)酵產(chǎn)品干物質(zhì)中蛋白質(zhì)含量高達(dá)35.00%，符合蛋白飼料的要求。

［1］ 吳輝.中國(guó)加工番茄制品未來發(fā)展空間很大［N］.中國(guó)食品報(bào)，2014，3，4(7).

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