黃熙理 邱峰 洪麗美 陳智穎363000福建省漳州市中醫(yī)院婦科

細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)在臨床宮頸癌篩查中的應(yīng)用

黃熙理 邱峰 洪麗美 陳智穎363000福建省漳州市中醫(yī)院婦科

目的：探討細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)在臨床宮頸癌篩查中的應(yīng)用。方法：對(duì)宮頸細(xì)胞行宮頸DNA倍體分析及液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）。結(jié)果：共檢出宮頸細(xì)胞學(xué)和（或）DNA倍體異常693例，液基細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性270例，陽(yáng)性率4.5％。DNA倍體分析系統(tǒng)檢出668例異常，陽(yáng)性檢出率11.1％。以≥3個(gè)DNA異倍體出現(xiàn)作為活檢標(biāo)準(zhǔn)，宮頸病變的敏感性78.9％，特異性43.27％，陽(yáng)性預(yù)期值63.13％，陰性預(yù)期值62.5％。以液基細(xì)胞學(xué)檢查L(zhǎng)SIL以上作為活檢標(biāo)準(zhǔn)，宮頸病變的敏感性43.75％，特異性79.81％，陽(yáng)性預(yù)期值72.72％，陰性預(yù)期值53.55％。結(jié)論：宮頸細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)具有客觀性及較高的敏感性，與宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合應(yīng)用，可減少誤診、漏診，提高檢查的特異性。

宮頸癌；細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)；液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查

宮頸癌位居全球女性癌癥死因的第2位，是最常見的婦科惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害女性健康。在進(jìn)展為癌之前，一系列的癌前病變可存在大約10年，宮頸癌是唯一一種病因明確、可通過(guò)早期篩查預(yù)防和控制的惡性腫瘤。癌前病變的識(shí)別和有效的早期干預(yù)對(duì)降低宮頸癌的患病率和死亡率有著非常重要的意義[1]。為了尋找更為敏感、更為行之有效的檢查方法，本課題組選取2011年4月-2013 年5月就診于漳州市中醫(yī)院婦科門診及體檢中心的婦女4 000例，運(yùn)用常規(guī)細(xì)胞學(xué)與細(xì)胞DNA定量分析的方法進(jìn)行宮頸癌及癌前病變的篩查，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

資料與方法

2011年8月-2013年8月就診于漳州市中醫(yī)院婦科門診及體檢中心的婦女4 000例。調(diào)查人群入選標(biāo)準(zhǔn)：在漳州地區(qū)居?。?.5年的本市及外地戶籍婦女，年齡20～65歲，有2年以上性生活史的婦女，目前未妊娠，無(wú)宮頸手術(shù)史，無(wú)盆腔放射治療史，均未使用避孕藥及其他類固醇類藥物。研究方法如下。

篩查方法：由婦科醫(yī)生對(duì)調(diào)查對(duì)象進(jìn)行常規(guī)婦科檢查，按宮頸細(xì)胞學(xué)檢測(cè)方法在宮頸管及宮頸外口鱗柱交界處刷取宮頸細(xì)胞行液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）及宮頸DNA倍體分析。采用TBS（the Bethesda system）分類法作為細(xì)胞學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)：①正?；蛄夹裕∟ULM）；②不明意義的非典型鱗狀上皮（ASCUS）；③不能排除高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變的非典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASC-H）；④低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）；⑤高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）；⑥不典型腺細(xì)胞（AGS）。⑦鱗狀上皮浸潤(rùn)癌（SCC）。

采用全自動(dòng)細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行宮頸DNA分析，掃描分析染色片中的每一個(gè)細(xì)胞核，根據(jù)123個(gè)細(xì)胞核特征參數(shù)值自動(dòng)分析和計(jì)數(shù)每個(gè)細(xì)胞核，出現(xiàn)DNA指數(shù)＞2.5的DNA倍體異常細(xì)胞則判為篩檢陽(yáng)性。AoCell系統(tǒng)診斷軟件將

細(xì)胞DNA倍體分析結(jié)果分為：①正常，即DNA指數(shù)＜2.5；②少量細(xì)胞DNA倍體異常（DNA倍體＞5C的細(xì)胞數(shù)1～2 個(gè)）；③細(xì)胞DNA倍體異常（DNA倍體＞5C的細(xì)胞數(shù)≥3個(gè)）；④少量細(xì)胞增生（增生細(xì)胞占檢測(cè)細(xì)胞總數(shù)5％～10％）；⑤細(xì)胞異常增生（增生細(xì)胞占檢測(cè)細(xì)胞總數(shù)＞10％）。確定活檢原則：宮頸DNA檢測(cè)和TBS在雙盲情況下開展。任一檢測(cè)為陽(yáng)性則建議活檢；若均為交界性結(jié)果，也建議活檢；若其中之一為陰性，另一檢測(cè)為交界性結(jié)果，則建議4～6個(gè)月復(fù)查。若均為陰性，建議正常篩查。陰道鏡活檢及病理學(xué)檢查：在陰道鏡的指導(dǎo)下多點(diǎn)活檢取材，病理診斷報(bào)告可分為浸潤(rùn)癌、CIN3或原位癌、CIN2、CIN1、宮頸炎及正常。對(duì)于第1次活檢結(jié)果可能有異議的病例，應(yīng)再進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查（常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷及細(xì)胞DNA定量分析），結(jié)果仍為陽(yáng)性，則再次取活檢，借助麥克奧迪提供的遠(yuǎn)程病理平臺(tái)，請(qǐng)婦科病理專家進(jìn)行會(huì)診。

表1 4 000例TCT檢測(cè)結(jié)果及宮頸DNA檢測(cè)結(jié)果

表3 以細(xì)胞學(xué)LSIL為活檢標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)宮頸病變的檢測(cè)價(jià)值

表2 以DNA倍體異常細(xì)胞≥3個(gè)為活檢標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)宮頸病變的檢測(cè)價(jià)值

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：以宮頸活檢病理診斷為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算液基細(xì)胞學(xué)診斷方法的特異度、靈敏度及DNA倍體分析系統(tǒng)。采用χ2檢驗(yàn)比較兩組計(jì)數(shù)資料，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

TCT檢測(cè)及宮頸DNA檢測(cè)結(jié)果：經(jīng)初步統(tǒng)計(jì)，共檢出宮頸細(xì)胞學(xué)和（或）DNA倍體異常693例，其中液基細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性270例，陽(yáng)性率4.5％，包括ASC-US 148例，ASC-H 23例，LSIL 54例，HSIL 43例，AGC 2例。DNA倍體分析系統(tǒng)檢出668例異常，陽(yáng)性檢出率11.1％，包括細(xì)胞DNA倍體異常227例，細(xì)胞異常增生10例，少量細(xì)胞DNA倍體異常365例，少量細(xì)胞增生66例。見表1。

病理診斷結(jié)果：根據(jù)活檢標(biāo)準(zhǔn)行陰道鏡下宮頸多點(diǎn)活檢，其中有病理檢查資料232例，經(jīng)病理診斷為CIN及宮頸癌患者128例，其中宮頸癌14例，原位癌12例，CINⅡ～Ⅲ58例，CINⅠ44例。慢性宮頸炎104例。

以≥3個(gè)DNA異倍體出現(xiàn)作為活檢標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)宮頸病變的敏感性78.9％，特異性43.27％，陽(yáng)性預(yù)期值63.13％，陰性預(yù)期值62.5％。說(shuō)明細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)具有較高的靈敏度，但特異度較差。見表2。

以液基細(xì)胞學(xué)檢查L(zhǎng)SIL以上作為活檢標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)宮頸病變的敏感性43.75％，特異性79.81％，陽(yáng)性預(yù)期值72.72％，陰性預(yù)期值53.55％，見表3。

討論

尋找更為敏感、特異性強(qiáng)的宮頸癌篩查方法是目前宮頸癌防治研究中的熱點(diǎn)。早期的巴氏染色法經(jīng)濟(jì)有效、簡(jiǎn)單易行，在大面積篩查及基層單位中發(fā)揮了重要作用。但該方法假陰性率較高，受限于主觀因素的影響，包括閱片技術(shù)、染色水平、制作方法、取材過(guò)程等，目前已基本被臨床淘汰。薄層液基細(xì)胞學(xué)可制成清晰的薄層涂片，因其去除了涂片上的雜質(zhì)，其與TBS分類系統(tǒng)聯(lián)合進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確性明顯高于傳統(tǒng)巴氏涂片法[2-4]，但是其檢查的準(zhǔn)確性很大程度上依賴于細(xì)胞學(xué)醫(yī)生的技術(shù)水平，主觀性較強(qiáng)，在一定程度上影響了宮頸癌篩查的效果。

細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)采用第三代液基細(xì)胞學(xué)TCT技術(shù)，進(jìn)行DNA特異性染色，克服了巴氏涂片的不足，通過(guò)軟件自動(dòng)記錄所有的細(xì)胞核并精確分析DNA含量，利用鏡下復(fù)合功能鑒別系統(tǒng)產(chǎn)生的錯(cuò)誤[5]。細(xì)胞核內(nèi)的遺傳物質(zhì)DNA可自我復(fù)制，其基因編碼可通過(guò)指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成而調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)能檢出由致癌因子引起的基因突變所導(dǎo)致DNA含量的改變。細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)能更早地檢測(cè)出癌前病變，因?yàn)榧?xì)胞惡變過(guò)程中DNA含量的改變?cè)缬谛螒B(tài)學(xué)改變，敏感性高。但DNA倍體分析系統(tǒng)對(duì)重疊細(xì)胞可能存在誤判，因?yàn)槟[瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞生長(zhǎng)增殖時(shí)細(xì)胞核內(nèi)DNA含量及結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生改變。

本研究亦顯示，細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)具有較高的靈敏度，但特異度較差。在4 000例合格宮頸樣本中，液基細(xì)胞學(xué)檢查為正常或良性改變的婦女，以≥3個(gè)DNA異倍體出現(xiàn)作為活檢標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)宮頸病變的特異性43.27％，敏感性78.9％，陽(yáng)性預(yù)期值63.13％，陰性預(yù)期值62.5％，對(duì)比液基細(xì)胞學(xué)檢查以LSIL以上作為活檢標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)宮頸病變的敏感性43.75％，特異性79.81％，陽(yáng)性預(yù)期值72.72％，陰性預(yù)期值53.55％

總之，宮頸細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)以其客觀性及較高的敏感性，可克服基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)細(xì)胞學(xué)醫(yī)生缺乏、經(jīng)驗(yàn)不足等缺點(diǎn)，如有條件，與宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合應(yīng)用，可減少誤診、漏診，提高檢查的特異性。

[1]余小琴.宮頸癌篩查及其新進(jìn)展綜述[J].安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2004，10（3）：169-170.

[2] 麻林愛，王愛嬌.3627例液基細(xì)胞學(xué)檢查宮頸病變結(jié)果分析[J].中國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)藥雜志，2009，16（9）：55-56.

[3]董麗娟.TCT在宮頸癌前病變?cè)\斷中的應(yīng)用[J].山東醫(yī)藥，2010，50（10）：71.

[4]薛蘇華.宮頸巴氏涂片與液基細(xì)胞薄層技術(shù)（TCT）的制片染色比較[J].哈爾濱醫(yī)藥，2009，29（5）：64-65.

[5] 霍嬡嬡，景彩萍.宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合細(xì)胞DMA倍體定量分析及宮頸活檢在宮頸病變中的作用[J].延安大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2012，10（1）：31-32.

Application of cellular DNA ploid analysis system in clinical screening of cervical cancer

Huang Xili，Qiu Feng，Hong Limei，Chen Zhiying
Department of Gynaecology，the Traditional Chinese Medicine Hospital of Zhangzhou City，F(xiàn)ujian Province 363000

Research Projects ①Category B subject fund from province ministry of education-Application of cellular DNA ploid analysis system in clinical screening of cervical cancer（JB11091）；②The science and technology development research center of medical and health in ministry of health-The cervical cancer incidence in Zhangzhou region studied by the application of DNA quantitative analysis（W2011GJ13）

Objective：To explore the application of cellular DNA ploid analysis system in clinical screening of cervical cancer.Methods：The cervix cells were checked through cellular DNA ploid analysis system and liquid thin-layer cytology test（TCT）.Results：A total of 693 cases had cervical cytology and（or）DNA ploid abnormalities；270 cases had positive liquid cytology and the positive rate was 4.5％.668 cases were detected abnormality through DNA ploid analysis system and the positive detection rate was 11.1％.With three or more DNA heteroploid appearing as the standard biopsy，the sensitivity of cervical lesions was 78.9％；the specificity was 43.27％；the positive expected value was 63.13％；the negative expected value was 62.5％.With liquid cytology test above LSIL as the standard biopsy，the sensitivity of cervical lesions was 43.75％；the specificity was 79.81％；the positive expected value was 72.72％；the negative expected value was 53.55％.Conclusion：Cervical cellular DNA ploid analysis system had the objectivity and high sensitivity，which combined liquid thin-layer cytology test could reduce the misdiagnose and misdiagnosis and improve the specificity of the check.

Cervical cancer；Cellular DNA ploid analysis system；Liquid thin-layer cytology test

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.21.75

科研項(xiàng)目 ①省教育廳B類課題-細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)在臨床宮頸癌篩查中的運(yùn)用（JB11091）；②衛(wèi)生部醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展研究中心-應(yīng)用DNA定量分析技術(shù)研究宮頸癌在漳州地區(qū)的發(fā)病情況（W2011GJ13）