程 偉，常芳國，趙團結(jié)，孔杰杰

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆研究所/國家大豆改良中心/農(nóng)業(yè)部大豆生物學(xué)與遺傳育種重點實驗室(綜合)/作物遺傳與種質(zhì)創(chuàng)新國家重點實驗室，江蘇南京 210095)

大豆灰斑病發(fā)生特點及抗病遺傳育種研究進展

程 偉，常芳國，趙團結(jié)，孔杰杰*

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆研究所/國家大豆改良中心/農(nóng)業(yè)部大豆生物學(xué)與遺傳育種重點實驗室(綜合)/作物遺傳與種質(zhì)創(chuàng)新國家重點實驗室，江蘇南京 210095)

摘要從抗病育種角度出發(fā)，綜述了大豆灰斑病病原菌生物學(xué)特點、生理小種分化與鑒別、病害流行規(guī)律與防控、大豆對灰斑病抗性的鑒定方法與抗病種質(zhì)(基因)發(fā)掘、抗病常規(guī)及分子育種等方面研究進展，并提出了大豆灰斑病抗性育種研究應(yīng)加強病菌致病機理及生理小種劃分、抗病資源(基因)發(fā)掘、常規(guī)與分子育種相結(jié)合等對策。

關(guān)鍵詞大豆；大豆灰斑病；生理小種分化；抗病育種；分子標(biāo)記

大豆灰斑病又稱褐斑病或蛙眼病，病原菌為(CercosporasojinaHara)，稱大豆短胖胞，屬半知菌亞門真菌，其異名為Cercosporidiumsofinum(Hara)Liu & Guo，是世界性病害。1915年首次在日本報道，很多年后陸續(xù)在其他國家也有發(fā)現(xiàn)，如美國、中國、英國、德國等[1-3]。在我國黑龍江、吉林、遼寧、山東、河北等省灰斑病嚴(yán)重，少量在湖北、安徽、江蘇等也有發(fā)生。其中黑龍江省發(fā)病最嚴(yán)重。歷史上大豆灰斑病的發(fā)生與危害出現(xiàn)4次大流行。另外，大豆灰斑病的危害癥狀是侵染大豆的葉、莖、莢和子粒，使品質(zhì)變劣，降低光合速率從而降低產(chǎn)量，造成輕者減產(chǎn)10%～30%，重者減產(chǎn)50%～100%，嚴(yán)重影響商品價值。筆者綜述了大豆灰斑病發(fā)生特點及抗病遺傳育種研究進展，提出了目前該方面研究中存在的問題，并展望了今后的研究方向，以期為大豆灰斑病防治提供參考。

1大豆灰斑病的生理小種與流行規(guī)律

1.1大豆灰斑病病原菌及其生理小種分化大豆灰斑病病原CercosporasojinaHara的分生孢子梗多為5～12根，不分枝，呈淡褐色。孢子有膝狀屈曲，孢痕可見，具1～9個隔，大小(24～108)×(3～9) μm，形狀、大小因培養(yǎng)條件不同略有差異。分生孢子萌發(fā)時從兩端細(xì)胞長出芽管，有時也從中部細(xì)胞長出[4]。黑暗條件下有利于病菌的生長與產(chǎn)孢萌發(fā)，陽光直射對孢子萌發(fā)有明顯抑制作用。在大豆葉葡萄糖培養(yǎng)基上該病菌生長最快，在小白菜瓊脂培養(yǎng)基和番茄瓊脂培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最大[5]。

大豆灰斑病菌具有明顯的生理分化，存在高度的遺傳變異。如Kim等[6]研究表明來自美國6個不同地區(qū)的132個大豆灰斑病原菌的標(biāo)準(zhǔn)化基因型多樣性值在26%～79%，還發(fā)現(xiàn)阿肯色州的灰斑病菌存在有性繁殖現(xiàn)象，可見，生理小種劃分工作重要。目前國內(nèi)外多個國家和地區(qū)已對大豆灰斑病生理小種進行了劃分(表1)。國內(nèi)多個研究應(yīng)用鋼5151、九農(nóng)1號、雙躍4號、合交69-231、Ogden、樺南綠大豆(現(xiàn)改用合豐 22)為鑒別寄主，對黑龍江省為主的灰斑病菌樣進行鑒定，分別鑒定出11～18個生理小種，其中1號小種是東北春大豆產(chǎn)區(qū)的優(yōu)勢小種[7-10]。馬淑梅[11]對2006～2010年黑龍江省大豆灰斑病生理小種的監(jiān)測結(jié)果表明，1號生理小種在各大豆產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)頻率最高，為50.5%，平均為40.1%；其次是7號，出現(xiàn)頻率為35.9%，平均為26.2%。出現(xiàn)頻率較高的還有6、10和11號生理小種，平均出現(xiàn)頻率分別為18.8%、12.0%和9.6%。近期研究表明15號生理小種有增加的趨勢[10-12]。

國外研究中，巴西采用10個鑒別寄主鑒別出22個生理小種[13]，美國早期用一套由16個品種組成的鑒別寄主鑒別出11個生理小種[12]。近期，Mian等[14]研究了來自美國、巴西、中國的93個灰斑病病原菌對 38個大豆品種的致病性差異，結(jié)果67個美國菌株可歸為13類，其中54%屬于第1、2類群，15個巴西菌株則屬于其中8個類群，中國的7個菌株分別屬于7個類群。最終篩選出Davis、Peking、Kent、CNS、Palmetto、Tracy、Hood、Lincoln、Lee、Richland、S100、Blackhawk共12個鑒別寄主，鑒定出5～15號共11個生理小種。Scandiani等[15]首次在阿根廷發(fā)現(xiàn)11和12號生理小種(表1)。

1.2病菌的分子鑒定利用分子標(biāo)記能較好地反映出病原菌之間的遺傳關(guān)系。張俊華等[16]用引物對ITS1和ITS4PCR擴增我國東北大豆灰斑病菌16個生理小種的DNA，均得到600 bp片段，繼而用HinfI、RsaI和HaeIII 3種限制性內(nèi)切酶將擴增產(chǎn)物消化，得到15個多態(tài)性片段，可將16個生理小種區(qū)分開來。孫洪利等[17]利用10對多態(tài)性高且穩(wěn)定性好的AFLP引物組合，對黑龍江省121個菌株進行分析，共獲得148個多態(tài)性條帶，以遺傳距離小于0.81為界，將111個單元型劃分為6個類群。丁俊杰等[18]利用11對SSR引物對黑龍江省的24個灰斑病菌菌株進行EST-SSR基因型分析，結(jié)果共檢測出等位變異46.0個，平均每個位點為4.2個，相似系數(shù)范圍為0.091～0.956，平均相似性系數(shù)達到0.589；聚類分析結(jié)果與大豆灰斑病生理小種間呈現(xiàn)出較高的相關(guān)性。

表1　大豆灰斑病生理小種鑒定結(jié)果匯總

Bradley等[19]對來自美國(44個大豆灰斑病生理小種)、巴西(10個)、中國(7個)、尼日利亞(1個)等地共62個菌株進行AFLP標(biāo)記分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小種之間平均遺傳多樣性值高達0.56。聚類分析發(fā)現(xiàn)2個來自喬治亞州的生理小種被聚集到一起，2個來自中國的生理小種被聚集到一起。在美國QoI殺菌劑可以有效控制大豆灰斑病的發(fā)生與流行，近期發(fā)現(xiàn)抗該類殺菌劑的大豆灰斑病菌，研究發(fā)現(xiàn)QoI-抗病包含G143A突變的細(xì)胞色素b基因，導(dǎo)致一種氨基酸替代丙氨酸甘氨酸。其聚合酶鏈反應(yīng)和TaqMan探針開發(fā)可以有效辨別QoI-抗病和QoI感病[20-21]。

1.3病害流行規(guī)律與防控一般在苗期和花期只能見到少數(shù)病斑，但是在大豆鼓粒期后病情發(fā)展迅速。氣象條件、感病品種布局及田間菌源量等條件都會影響大豆灰斑病的發(fā)生和流行。孢子萌發(fā)最適溫度為28～30 ℃，溫度范圍為10～40 ℃，生長最適溫度為25～28 ℃，萌發(fā)和侵染需要較高的濕度。pH為3～9時均可生長，最適溫度下分生孢子在水中1 h即可萌發(fā)，pH為5～6時最適宜。影響病害發(fā)生程度的主要氣象因子是濕度和降雨量，研究發(fā)現(xiàn)，東北地區(qū)大豆灰斑病發(fā)生與7月上旬、下旬降雨量呈顯著正相關(guān)；降雨量大、周期長，相對濕度較大，病害發(fā)生會較重[22-23]。

劉惕若等[24]認(rèn)為大豆灰斑病是一個多循環(huán)病害，葉、莢病情田間流行曲線均呈“S”型。還根據(jù)病粒率與氣象因子的相關(guān)關(guān)系建立了早熟材料和中晚熟材料的灰斑病粒率預(yù)測多元回歸方程，預(yù)測病粒率與實際調(diào)查的病粒率十分接近。顧鑫等[25]利用2005～2013年黑龍江省東部地區(qū)大豆灰斑病發(fā)生情況和相應(yīng)的氣象因子數(shù)據(jù)，采用逐步回歸方法建立包括的回歸預(yù)測方程，可對該地區(qū)大豆灰斑病發(fā)生情況進行中短期預(yù)測。

灰斑病流行與大豆耕種方式、病原菌、品種等因素有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)在美國大豆生產(chǎn)體系中，不施用殺菌劑條件下發(fā)病程度與耕作或免耕方式之間無顯著差異。殺菌劑的應(yīng)用顯著減少了發(fā)病嚴(yán)重程度，產(chǎn)量漲幅為1%～17%。殺菌劑應(yīng)用時，免耕耕作的大豆發(fā)病嚴(yán)重程度沒有顯著降低[26]。

2大豆抗灰斑病種質(zhì)鑒定

2.1抗病鑒定方法與指標(biāo)大豆灰斑病主要侵染幼苗、葉、莖、莢和種子[27]。帶菌種子長出幼苗，子葉上病斑明顯，多是半圓形、圓形、稍凹陷，深褐色。葉片發(fā)病，初為褪綠小圓斑，后逐漸擴展為邊緣褐色，中央灰褐色或灰色、直徑為1～5 mm的病斑，葉背中央有時密生灰色霉層，即為分生孢子梗和分生孢子。嚴(yán)重時導(dǎo)致葉片枯死并脫落。莖部發(fā)病形成橢圓形病斑，褐色。病輕時僅產(chǎn)生褐色小點。豆粒上病斑與葉斑相似，多圓形蛙眼狀，也有的呈不規(guī)則形，邊緣暗褐色，中央灰白色。

目前田間鑒定大豆灰斑病等級多分為5級。曹越平等[28]先按病斑的大小和病斑的有無將病斑分為5種：B 斑、M 斑、N 斑、S 斑、O 斑(直徑> 3 mm、2～3 mm、1～2 mm、<1 mm、0 mm) ，并對上述5種病斑分別賦予 5、4、2、1、0 的權(quán)重系數(shù)；再按病斑數(shù)量的多少將病情分為5個級別：1、2、3、4、5 級。將病斑數(shù)量的級別數(shù)與病斑種類的權(quán)重系數(shù)相乘，其乘積即為病斑型級數(shù)。在進行病情調(diào)查時，以每個植株感染灰斑病較重的葉片為代表，表示該大豆植株的病情。而Sharma等[29]進行數(shù)量抗性鑒定時，根據(jù)整個植株葉片枯萎或壞死所占比例分0～9級(枯萎/壞死)：枯萎、壞死均為0級；1級是 1%～10%/1%～5%；2級是10%～20%/6%～10%；3級是20%～40%/10%～20%；4級是40%～60%/20%～40%；5級是枯萎>60%，壞死>40%；6級為落葉達到33%；7級是落葉>66%; 8級是落葉>66%；9級為整個植株死亡。

2.2抗病種質(zhì)篩選不同地區(qū)和來源的大豆材料對灰斑病菌的抗性存在差異，同一品種對不同的病原菌的抗性也有差異，所以選育抗病材料是抗病育種的基礎(chǔ)。國內(nèi)外均進行了大量研究。我國從5 000余份國內(nèi)外大豆資源中鑒定出一大批優(yōu)異抗源(表2)。如陳慶山[30]從50個主栽品種中篩選出抗8個以上生理小種的品種系17份，其中抗10個生理小種的代表品種有1572、巴24、農(nóng)大13699等。研究發(fā)現(xiàn)進化程度低的原始材料中抗源較多，對166份野生大豆鑒定發(fā)現(xiàn)表現(xiàn)免疫和高抗的分別有57和38份，占58.30%，表明野生大豆中抗源豐富[31-32]。而對東北地區(qū)的916份大豆品種進行抗性鑒定，其中來自黑龍江省、吉林省表現(xiàn)免疫的分別有0.31%、1.55%，表現(xiàn)高抗分別有9.09%和11.46%[33]；對我國南北方大豆品種系進行抗灰斑病鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)和來源的品種、品系均有抗灰斑病的材料，北方高抗材料比例較高，育成品種的比例要高于品系[34]。

國外也開展類似抗源篩選工作，如美國對世界各地1 686份種質(zhì)資源對灰斑病強致病菌株C-32抗性鑒定，發(fā)現(xiàn)有 660 份為抗性(0～3級)材料，韓國資源抗源較多[35]。Mengistu等[36]在2009～2010年通過田間接種大豆灰斑病11號生理小種鑒定發(fā)現(xiàn)，Davis、PI532465、PI567302、PI56748160、PI490766、PI567330、PI567333A、PI567432A、PI567432B、PI567438、PI532463A、PI567477、PI567478、PI567490、PI63945、PI538383、PI538386B、PI567291、PI567319B、PI567316A、PI567333B品種都表現(xiàn)出抗性。

表2　大豆種質(zhì)對我國灰斑病小種抗性鑒定結(jié)果匯總

3抗病育種研究

3.1常規(guī)育種美國開展大豆抗灰斑病育種工作較早，早期選育出的抗病品種有Wabash、Clark等。1986年美國西北部受到灰斑病的嚴(yán)重危害，對P746、Shillageet、PK719、Bragg、VLsoya2、Himso507、Himso10 7個品種進行抗病鑒定，發(fā)現(xiàn)其病情指數(shù)達到了50%。其后育成一批抗病品種，如Doles、Maxcy、Holladay和VLsoya2等。近年來美國公共研究機構(gòu)的育種家開展了較全面的新品種抗性鑒定工作，又選育出一大批抗病品種[45]。

我國在20世紀(jì)80年代就開始了大豆抗灰斑病育種工作。劉忠堂[46]采用一次雜交，連續(xù)接種，定向選擇的方法培育了合豐28、合豐29、合豐33、合豐34號等抗灰斑病大豆品種。迄今已育成推廣合豐號抗病品種20多個。其他單位也育成一大批抗病品種(系)，如東農(nóng)42、東農(nóng)43、1574、9674、593、墾農(nóng)18、合輻93154-2、黑生101、建農(nóng)1號、建豐2、北豆30、北豆35等。東農(nóng)9674、合豐29和合豐34能抗黑龍江省8個以上生理小種[47-48]。由于東北地區(qū)大豆新品種審定要求對灰斑病的抗性達到中抗以上，目前大豆審定品種的抗性水平不斷提高。如通過雜交育種獲得的合農(nóng)64和合農(nóng)59均抗大豆灰斑病品種[49-50]。

3.2抗病基因發(fā)掘與分子標(biāo)記輔助育種大豆對灰斑病生理小種的抗性是由單顯性基因控制，國內(nèi)發(fā)現(xiàn)控制1號、7號和15號小種的Hrcs1、Hrcs7和Rcs15抗病基因[51]。利用東農(nóng)9674(高抗)×東農(nóng)87-104(高感)F2群體發(fā)現(xiàn)3個與抗病基因Rf1的連鎖的RAPD標(biāo)記；為利于分子標(biāo)記分析，還將抗病基因連鎖的RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為共顯性的SCAR標(biāo)記SCS3620&580[52]。張文慧等[53-54]用東農(nóng)40566(抗)和東農(nóng)410(感)雜交衍生群體接種1號生理小種，發(fā)現(xiàn)位于C1連鎖群上的3個SSR標(biāo)記可能抗性基因連鎖。Dong等[55]用Gang 95144-1和Gongjiao 9723-6 2個親本雜交獲得的F2代，接種大豆灰斑病7號生理小種鑒定其抗病基因，并命名為Hrcs7，將抗病基因定位在E連鎖群(15號染色體)，與Satt411的遺傳距離為7.9 cM。姜翠蘭等[56]研究發(fā)現(xiàn)，墾豐16對15號小種的抗性受1對顯性基因控制，定名為Rcs1，抗病基因位于J連鎖群Satt 529和Satt 547之間，遺傳距離分別為18.5和-6.7 cM。對108份大豆新品系進行標(biāo)記檢測，Satt 547和Sat_224的檢測準(zhǔn)確率達到85%以上，可用于分子標(biāo)記輔助選擇育種和抗源篩選。丁俊杰等[18]以黑龍江省103份已鑒定抗大豆灰斑病3個生理小種的品種(系)為材料，同時利用7個標(biāo)記(Satt565、Satt547、Satt431、Sct_186、SOYGPATR、Satt244、Sat_151)構(gòu)建了供試品種(系)的分子身份證。

美國通過經(jīng)典遺傳學(xué)方法已發(fā)現(xiàn)控制1號、2號和5號小種的Rcs1、Rcs2、Rcs3、Rcs5等抗病基因。利用Blackhawk(S)和 Davis(R)2個親本雜交獲得的F2群體以及F2∶3，Wright和Wright6-Rcs3的近等基因系接種3號生理小種，發(fā)現(xiàn)位于J連鎖群(16號染色體)2個標(biāo)記Satt244、Satt547與Rcs3連鎖[57]；進一步加密標(biāo)記，在Rcs3周圍0.3 cM范圍內(nèi)11個SNP，其中AZ573TA150和AZ573CA393可以直接應(yīng)用于分子標(biāo)記輔助育種[58]。近期又將PI 594891、PI 594774對灰斑病的顯性抗病基因精細(xì)定位在13染色體72.6 kb區(qū)間，包含5個注釋基因，其中3個基因(Glyma13g25320、Glyma13g25340、Glyma13g25350)的序列在抗感材料間有差異。已對Glyma13g25340、Glyma13g25350基因SNP變異開發(fā)出KASP標(biāo)記用于標(biāo)記輔助育種[13]。

Sharma等[29]利用Essex×Forrest RIL群體的94個家系接種灰斑病2號生理小種，分別在21和42 d調(diào)查家系抗病反應(yīng)，結(jié)果定位到2個對灰斑病表現(xiàn)部分抗性的主效QTL，1個在6號染色體(C2連鎖群)Satt319標(biāo)記附近，LOD=3.8，R2=52%，1個位于8號染色體Satt632附近，LOD=3.6，R2=15%。通過單標(biāo)記分析，還在A1、B1、F、G、H、I、J、K、L、M 和O分子連鎖群上檢測到13個微效QTL。

4問題與展望

大豆灰斑病生理小種分化明顯，國內(nèi)外對小種劃分都進行了許多研究，國內(nèi)目前采用6個鑒別寄主材料，鑒別出多達18個小種[10]；美國則提名了12個鑒別寄主材料，鑒別出11個小種[14]。由于二者沒有相同鑒別寄主，中美鑒定出的小種間還難以一一對應(yīng)，其致病性等也難以比較，制約了進一步的研究工作。因此，建立一套標(biāo)準(zhǔn)鑒別寄主品種十分必要，有待有關(guān)研究者合作完成。此外，大豆對灰斑病抗性鑒定體系也需要統(tǒng)一和完善，包括小種選用(混合或單用)、處理時期、調(diào)查鑒定標(biāo)準(zhǔn)等。如我國大豆灰斑病病情分級一般按病斑數(shù)量分4～6級[27]，國外有將灰斑病病情分為9級，還有數(shù)量抗性鑒定則更復(fù)雜[28]。

大豆對灰斑病抗性育種工作已取得很大進展。分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)可彌補常規(guī)育種的不足，實現(xiàn)基因型的直接選擇。目前抗大豆灰斑病基因發(fā)掘工作相對落后，雖然已發(fā)現(xiàn)多個抗病基因，但只有Rcs3和位于13染色體的抗病基因被精細(xì)定位[13，58]，可用于分子育種的分子標(biāo)記很少。高通量測序技術(shù)不僅使對大豆轉(zhuǎn)錄組和基因組進行細(xì)致全貌的分析成為可能，更使挖掘高通量多態(tài)性 DNA分子標(biāo)記成為現(xiàn)實，該方面工作需要加強。目前，分子輔助選擇育種只能對主基因控制性狀的選擇，對大量微效多基因控制的性狀的選擇方法與技術(shù)仍待進一步研發(fā)。另一方面，大豆灰斑病菌侵染大豆致病機理研究也有待加強，可發(fā)掘相關(guān)基因通過轉(zhuǎn)基因育種提高大豆抗病性。

化學(xué)防治大豆灰斑病的效果好，但對環(huán)境和土壤都可能產(chǎn)生一定的污染，不利于農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，近期在美國還發(fā)現(xiàn)對防控灰斑病的QoI殺菌劑產(chǎn)生抗性的灰斑病菌[20]。因此，種植抗病品種是防治大豆灰斑病理想方法，并且依賴于抗病品種選育的速度和水平。由于灰斑病原菌小種構(gòu)成復(fù)雜，優(yōu)勢小種變化快，從大豆生產(chǎn)實踐看，仍需在考慮抗病品種的基礎(chǔ)上，充分發(fā)揮耕作栽培方式、化學(xué)防治的作用。

參考文獻

[1] YORINORI J T，SINCLAIR J B.Cercosporasojina: A set of differentiated cultivars races for identification[J].Phytopathology，1982，72：173.

[2] 劉忠堂.解決我省東部地區(qū)大豆灰斑病的途徑[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，1985(1)：20-30.

[3] 廖林.大豆灰斑病研究概況及展望[J].中國農(nóng)學(xué)通報，1992，8(1)：6-9.

[4] 曹越平，李海英，劉學(xué)敏，等.大豆灰斑病菌(CercosporasojinaHara)及其對寄主作用的研究[J].植物病理學(xué)報，2003，33(2)：116-120.

[5] 鐘兆西，王偉，張桂榮.大豆灰斑病菌(Cercosporasojina)生物學(xué)特性的研究[J].大豆科學(xué)，1989，8(3)：288-294.

[6] KIM H，NEWELL A D，COTA-SIECKMEYER R G，et al.Mating-type distribution and genetic diversity ofCercosporasojinapopulations on soybean from Arkansas：Evidence for potential sexual reproduction[J].Phytopathology，2013，103(10)：1045-1051.

[7] 黃桂潮，霍虹，張再興，等.大豆灰斑病菌(CercosporasojinaHara)生理小種鑒定結(jié)果初報[J].大豆科學(xué)，1984(3):7.

[8] 霍虹，馬淑梅，盧官仲，等.黑龍江省大豆灰斑病菌(CercosporasojinaHara)生理小種的研究[J].大豆科學(xué)，1988，7(4)：315-320.

[9] 馬淑梅，李寶英.東北春大豆灰斑病菌生理小種鑒定結(jié)果初報[J].植物病理學(xué)報，1997，27(2)：180.

[10] 顧鑫，丁俊杰，楊曉賀，等.2008～2009年黑龍江省大豆灰斑病生理小種的監(jiān)測[J].大豆科學(xué)，2010，29(3)：540-542.

[11] 馬淑梅.2006～2010年黑龍江省大豆灰斑病菌生理小種監(jiān)測及部分主栽品種抗性鑒定[J].大豆科學(xué)，2011，30(3)：450-454.

[12] 丁俊杰，顧鑫，楊曉賀，等.黑龍江省大豆灰斑病菌生理小種及遺傳關(guān)系分析[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，45(21)：4377-4387.

[13] PHAM A T，HARRIS D K，BUCK J，et al.Fine mapping and characterization of candidate genes that control resistance toCercosporasojinaK.Hara in two soybean germplasm accessions[J].PLoS ONE，2015，10(5):126753.

[14] MIAN M A R，MISSAOUI A M，WALKER D R，et al.Frogeye leaf spot of soybean：A review and proposed race designations for isolates ofCercosporasojinaHara[J].Crop science，2008，48(1)：14-24.

[15] SCANDIANI M，F(xiàn)ERRI M，F(xiàn)ERRARI B，et al.First report of races 11 and 12 ofCercosporasojina， the causal agent of soybean frogeye leaf spot，in Argentina[J].Plant disease，2012，96(7)：1067.

[16] 張俊華，張明，韓英鵬，等.大豆灰斑病菌生理小種PCR-RFLP分子檢測[J].中國油料作物學(xué)報，2010，32(1)：128-131.

[17] 孫洪利，張俊華，韓英鵬，等.黑龍江省大豆灰斑病菌遺傳多樣性[J].中國油料作物學(xué)報，2011，33(1):57-61.

[18] 丁俊杰，姜翠蘭，顧鑫，等.利用與大豆灰斑病抗性基因連鎖的SSR標(biāo)記構(gòu)建大豆品種(系)的分子身份證[J].作物學(xué)報，2012，38(12)：2206-2216.

[19] BRADLEY C A，WOOD A，ZHANG G R，et al.Genetic diversity ofCercosporasojinarevealed by amplified fragment length polymorphism markers[J].Canadian journal of plant pathology，2012，34(3)：410-416.

[20] ZHANG G R，NEWMAN M A，BRADLEY C A.First report of the soybean frogeye leaf spot fungus (Cercosporasojina) resistant to quinone outside inhibitor fungicides in North America[J].Plant disease，2012，96(5)：767-767.

[21] ZENG F，ARNAO E，ZHANG G，et al.Characterization of quinone outside inhibitor fungicide resistance inCercosporasojinaand development of diagnostic tools for its identification[J].Plant disease，2015，99(4)：544-550.

[22] 劉學(xué)敏，李本寧.大豆灰斑病流行動態(tài)預(yù)測[J].大豆科學(xué)，1996，15(3)：222-227.

[23] 丁俊杰.三江平原地區(qū)降水量變化與大豆灰斑病相關(guān)性分析[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2013，44(7)：1-5.

[24] 劉惕若，李海燕，甄鴻杰.大豆灰斑病流行強度預(yù)測模型研究[J].中國油料作物學(xué)報，2006，27(3)：54-57.

[25] 顧鑫，楊國珍，丁俊杰，等.黑龍江省東部地區(qū)大豆灰斑病短期預(yù)測模型的建立[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014(12)：67-69.

[26] MENGISTU A,KELLY H M,BELLALOUI N，et al.Tillage，fungicide，and cultivar effects on frogeye leaf spot severity and yield in soybean[J].Plant disease，2014，98(11)：1476-1484.

[27] 方中達.中國農(nóng)業(yè)植物病害[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1996.

[28] 曹越平，楊慶凱.大豆灰斑病抗感標(biāo)準(zhǔn)劃分的研究[J].大豆科學(xué)，2002，21(2)：113-116.

[29] SHARMA H，LIGHTFOOT D A.Quantitative trait loci underlying partial resistance toCercosporasojinarace 2 detected in soybean seedlings in green-house assays[J].Atlas journal of biology，2014，3(1)：175-182.

[30] 陳慶山.大豆灰斑病種質(zhì)資源遺傳多樣性的RAPD和SSR分析[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2001.

[31] 萬學(xué)臣.大豆灰斑病抗源篩選及其與若干性狀的關(guān)系[J].作物品種資源，1987(2)：9.

[32] 姚振純，張玉華.野生大豆田間感染大豆灰斑病簡報[J].大豆科學(xué)，1986，5(4)：349-350.

[33] 張文慧，杜吉到，陳慶山，等.抗大豆灰斑病育種研究進展[J].黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報，2006，18(1)：22-26.

[34] 馬淑梅，韓新華，邵紅濤.大豆主要病害多抗性資源篩選鑒定[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2014(27):12.

[35] MENGISTU A，BOND J，MIAN R，et al.Resistance to frogeye leafspot in selected soybean accessions in MG I through MG VI[J].Plant health progress，2012，10.doi:10.1094/PHP-2012-0521-02-RS.

[36] YANG W，WEAVER D B.Resistance to frogeye leaf spot in maturity groups VI and VII of soybean germplasm[J].Crop science，2001，41(2)：549-552.

[37] 朱希敏，王利財，鄒桂珍.大豆品種資源抗大豆花葉病 (SMV)，灰斑病 (Cercosporasojina) 和霜霉病 (Peronosporamanschurica) 的鑒定和評價[J].大豆科學(xué)，1988(3)：9.

[38] 張麗娟，楊慶凱.大豆抗灰斑病菌多個生理小種資源的篩選[J].大豆科學(xué)，1997，16(1)：38-41.

[39] 吳秀紅.大豆抗灰斑病菌多個生理小種資源的篩選[J].植物遺傳資源學(xué)報，2003，4(4)：341-344.

[40] 馬淑梅，李寶英.黑龍江省大豆品種和資源與本省大豆斑病菌相互作用的研究[J].大豆科學(xué)，1996，15(4)：322-325.

[41] 馬淑梅.大豆種質(zhì)資源對灰斑病抗性鑒定評價[J].植物遺傳資源學(xué)報，2011，12(5)：820-824.

[42]馬淑梅，韓新華.大豆品種資源對灰斑病的抗性鑒定[J].大豆科學(xué)，2014(6)：957-960.

[43]馬淑梅，韓新華，邵紅濤.大豆主要病害多抗性資源篩選鑒定[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2014，30(27)：58-65.

[44]丁俊杰，顧鑫，楊曉賀，等.黑龍江省大豆新品系抗灰斑病鑒定[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2011，42(10)：120-124.

[45]CHAWLAS，BOWENCR，SLAMINKOTL，etal.Apublicprogramtoevaluatecommercialsoybeancultivarsforpathogenandpestresistance[J].Plantdisease，2013，97(5)：568-578.

[46]劉忠堂.抗灰斑病大豆育種技術(shù)的探討[J].大豆科學(xué)，1986，5(2)：147-152.

[47]齊寧，郭泰，劉忠堂，等.高抗灰斑病高產(chǎn)大豆新品種合豐34號的選育[J].中國油料，1994，16(4)：65-66.

[48]郭泰，劉忠堂，齊寧，等.大豆高抗灰斑病品種合豐29號的選育及利用[J].作物品種資源，1997(3)：25-26.

[49]劉成貴，劉秀芝，鄭偉，等.抗灰斑病高油高產(chǎn)大豆新品種合農(nóng)64選育與推廣[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015(3)：1-4.

[50]劉秀芝，劉成貴，王志新，等.早熟高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)抗病大豆新品種合農(nóng)59選育與推廣[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015(2):1-5.

[51]顧鑫，丁俊杰.大豆灰斑病的研究現(xiàn)狀[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2010，26(9)：303-306.

[52]鄒繼軍，楊慶凱.大豆灰斑病抗病基因RAPD標(biāo)記的分子特征及抗，感種質(zhì)的SCAR標(biāo)記鑒定[J].科學(xué)通報，1999，44(23)：2544-2550.

[53]張文慧，陳慶山，楊慶凱，等.大豆灰斑病1號生理小種抗性基因的SSR標(biāo)記分析[J].大豆科學(xué)，2004，23(3)：169-173.

[54]陳立君，郭強，劉迎雪，等.大豆灰斑病1號生理小種抗性基因的SSR標(biāo)記[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2009，25(9)：43-46.

[55]DONGZ，WANGS，LIUJ，etal.PreliminarymappingofsoybeandominantlocusHrcs7conferringresistancetoCercospora sojinarace7[J].Molecularplantbreeding，2011，2(6):37-40.

[56]姜翠蘭，丁俊杰，文景芝，等.大豆對灰斑病菌 15 號小種的抗病基因定位及標(biāo)記檢測[J].植物保護學(xué)報，2011，38(2)：116-120.

[57]MIANMA，WANGT，PHILLIPSDV.MolecularmappingoftheRcs3geneforresistancetofrogeyeleafspotinsoybean[J].Cropscience，1999，39(6):1687-1691.

[58]MISSAOUIAM，HABK，PHILLIPSDV，etal.SinglenucleotidepolymorphismdetectionoftheRcs3geneforresistancetofrogeyeleafspotinsoybean[J].Cropscience，2007，47(4)：1681-1690.

中圖分類號S435.651

文獻標(biāo)識碼A

文章編號0517-6611(2015)30-22-04

基金項目國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(2012AA101106)；長江學(xué)者和創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃項目(PCSIRT13073)；江蘇省現(xiàn)代作物生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心項目(JCIC-MCP)。

作者簡介程偉(1988-)，男，安徽亳州人，碩士研究生，研究方向：大豆遺傳育種。*通訊作者，助教，碩士，從事大豆遺傳育種研究。

收稿日期2015-09-10

Advance in the Disease Occurrence and Resistance Breeding of Frogeye Leaf Spot in Soybean

CHENG Wei, CHANG Fang-guo, ZHAO Tuan-jie,KONG Jie-jie*(Soybean Research Institute of Nanjing Agricultural University/National Center for Soybean Improvement/ Key Laboratory of Soybean Biology and Genetic Improvement, Ministry of Agriculture/National Key Laboratory for Crop Genetics and Germplasm Enhancement, Nanjing, Jiangsu 210095)

AbstractFrom the viewpoint of resistance breeding, some aspects including the pathogen’s characteristics, its physiological race differential and classification, the disease epidemiology and its control, identification methods for resistance and screening of elite resistant germplasm (genes), genetic improvement for resistance to frogeye leaf spot were reviewed. Some discussions involved. It is necessary to strengthen the research on the mechanism of disease occurrence, race identification system, discovery of elite resistant lines (genes) and combination of convention and molecular breeding for resistance to frogeye leaf spot.

Key wordsSoybean; Frogeye leaf spot; Race differentiation; Resistance breeding; Molecular marker