趙大偉喬秀麗王斌孫麗梅杜麗榮王雙俠柴寶麗張騰霄

（1.綏化學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院 黑龍江綏化 152061；2.黑龍江龍桂制藥有限公司 黑龍江綏化 152061）

蒼耳子-鹽酸洛美沙星溫度敏感原位凝膠劑的制備研究

趙大偉1喬秀麗1王斌1孫麗梅1杜麗榮2王雙俠1柴寶麗1張騰霄1

（1.綏化學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院 黑龍江綏化 152061；
2.黑龍江龍桂制藥有限公司 黑龍江綏化 152061）

以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188等為凝膠劑基質(zhì)制備蒼耳子-鹽酸洛美沙星溫度敏感原位凝膠劑，研究不同組成基質(zhì)的蒼耳子-鹽酸洛美沙星溫度敏感原位凝膠劑的制備，并測(cè)定其膠凝溫度、釋放度。結(jié)果顯示：以25%泊洛沙姆407，2%泊洛沙姆188為基質(zhì)制備的鹽蒼耳子-酸洛美沙星溫度敏感原位凝膠劑在膠凝溫度、釋放度等均較為理想。

原位凝膠；泊洛沙姆407；泊洛沙姆188；蒼耳子；膠凝溫度

原位凝膠劑系指以基質(zhì)和藥物制成的在通常狀況下為液體，但當(dāng)施加藥物至患處后，由于環(huán)境因素的變化，如溫度、離子組成和濃度、酸堿度（pH）等因素發(fā)生改變，高分子基質(zhì)的基團(tuán)或電荷的作用發(fā)生變化，從而使作為高分子聚合物的凝膠基質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，表現(xiàn)為黏度增大，進(jìn)而會(huì)產(chǎn)生相變，由溶液態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榘牍虘B(tài)，通常稱為發(fā)生膠凝。由于凝膠劑給藥方便、無(wú)污染、吸收和見(jiàn)效快、具有緩釋效果等，目前日益為藥物制劑領(lǐng)域所重視。

菊科植物蒼耳（Xanthium sibiricum Patr.）是近年來(lái)越來(lái)越多地受到關(guān)注的一種藥用植物，目前作為中藥主要應(yīng)用的蒼耳子是蒼耳的干燥成熟果實(shí)，蒼耳在我國(guó)大部分地區(qū)均有分布，在黑龍江省尤其分布廣泛，在田間地頭和草原等處生長(zhǎng)較好，生物資源儲(chǔ)量巨大，蒼耳子作為中藥具有對(duì)風(fēng)寒頭痛、鼻淵流涕、風(fēng)疹、皮膚瘙癢、濕痹拘攣等較好作用而應(yīng)用呈現(xiàn)普及之勢(shì)；現(xiàn)代藥理研究表明，蒼耳子具有抗菌消炎、緩解風(fēng)濕癥狀、止血、降低和控制血糖、降血壓、提高呼吸系統(tǒng)興奮性等作用[1,2]。目前蒼耳子的化學(xué)成分主要有酯類、酚酸類、水溶性二萜苷、噻嗪雙酮、大黃酚類等[3,4]。鹽酸洛美沙星（Lomefloxacin Hydrochloride）屬人工合成的氟喹諾酮類廣譜抗生素，化學(xué)名為 (±)-1-乙基-6,8-二氟-1,4-二氫-7-(3-甲基-1-哌嗪基)-4-氧喹啉-3-羧酸鹽酸鹽。鹽酸洛美沙星對(duì)于多種革蘭陽(yáng)性菌和格蘭陰性菌均有抑菌效果，目前在臨床上鹽酸洛美沙星主要用于多種部位的敏感菌感染，如尿路感染、支氣管感染、皮膚軟組織感染、骨關(guān)節(jié)感染、細(xì)菌性前列腺炎、細(xì)菌性痢疾等。鹽酸洛美沙星的抑菌機(jī)制是在于其能夠抑制細(xì)菌DNA螺旋酶的活性，進(jìn)而抑制細(xì)菌DNA的合成，從而起到了抑菌作用。鹽酸洛美沙星作為開(kāi)發(fā)研制較為成熟的廣譜抗生素目前應(yīng)用的較為普及，而蒼耳子的抗炎、殺菌、止血功效也日漸受到重視，將鹽酸洛美沙星和蒼耳子提取物配伍使用，開(kāi)發(fā)新型高效的可應(yīng)用于人體多部位細(xì)菌感染、出血和炎癥的新型原位凝膠劑，對(duì)于中藥和化學(xué)藥物應(yīng)用的相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化是有益的嘗試和探索。本文主要探討以泊洛沙姆系列高聚物為主的不同組成的凝膠劑基質(zhì)對(duì)于制備鹽酸洛美沙星-蒼耳子溫敏原位凝膠劑的可行性研究，具體探討凝膠劑基質(zhì)的組成對(duì)于蒼耳子-鹽酸洛美沙星凝膠劑的膠凝溫度、鹽酸洛美沙星釋放度的影響，確定制備上述凝膠劑的適宜基質(zhì)。

一、儀器與材料

HJ-3型恒溫磁力攪拌器(江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠)；MS105電子天平(瑞士梅特勒儀器（中國(guó)）有限公司)；HH-8型數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇環(huán)宇科學(xué)儀器廠)；UV-5800PC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）。

泊洛沙姆407（湖北遠(yuǎn)成賽創(chuàng)科技有限公司）；泊洛沙姆188（湖北遠(yuǎn)成賽創(chuàng)科技有限公司）；鹽酸洛美沙星原料藥（錦州九洋藥業(yè)有限責(zé)任公司）；鹽酸洛美沙星對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；蒼耳子（黑龍江綏化市北林區(qū)采集）；溴甲酚綠（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑有限責(zé)任公司）；氫氧化鈉（分析純，常州恒光化學(xué)試劑有限公司）；冰醋酸（分析純，天津市優(yōu)譜化學(xué)試劑有限公司）；醋酸鈉（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑有限責(zé)任公司）；五效蒸餾水（自制）；無(wú)水乙醇（分析純，天津市濱?？频匣瘜W(xué)試劑有限公司）、氯仿（分析純，天津市康科德科技有限公司）；吐溫-80（化學(xué)純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

二、方法

（一）凝膠劑的制備。參考相關(guān)文獻(xiàn)[5]，將處方量的泊洛沙姆407等精確稱定，溶于一定量的冷水之中，置于冰箱中放置24h，將按處方量稱取的鹽酸洛美沙星原料藥0.50g以適量的蒸餾水配制成水溶液，在磁力攪拌器上與凝膠基質(zhì)攪拌混合，將干燥后的蒼耳子粉碎成粗粉，以50%乙醇（5g：200mL）在回流裝置60℃提取3h，過(guò)濾，乙醇提取液濃縮，回收部分大部分乙醇，烘干，粉碎，過(guò)200目篩，取過(guò)篩后的極細(xì)粉與2mL吐溫-80混合，以適量水配制成溶液，緩緩加入凝膠基質(zhì)之中，加水至100mL，以磁力攪拌器攪拌1h，混合均勻，即得。

（二）人工模擬淚液的配制。精確稱取碳酸氫鈉2.18g、氯化鉀1.38g、氯化鈉6.78g、氯化鈣0.084g以適量蒸餾水?dāng)嚢瑁怪芙?，再加入蒸餾水配制成1000mL溶液，即得人工模擬淚液[6]。

（三）人工模擬鼻液的配制。稱取氯化鉀3.06g、氯化鈉8.77g、氯化鈣1.18g加水溶解至1000mL溶液，即得人工模擬鼻液[7]。

（四）膠凝溫度的測(cè)定。以磁轉(zhuǎn)子法進(jìn)行測(cè)定[8]。所制得的凝膠劑（或其與人工淚液或人工鼻液混合物）50mL于玻璃瓶中，瓶口加橡膠塞密封，在橡膠塞上打孔，插入溫度計(jì)，溫度計(jì)水銀球要求沒(méi)入液面之下，上述被測(cè)凝膠先冷藏至低溫，取出后置于磁力攪拌器上，開(kāi)動(dòng)攪拌，磁力粒攪拌轉(zhuǎn)速控制在150r/min，逐漸升高溫度，觀察到攪拌轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速逐漸減低，待到磁力粒完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)后，記錄溫度。重復(fù)測(cè)定三次，取平均值。

（五）鹽酸洛美沙星釋放度的測(cè)定。以自制簡(jiǎn)易裝置測(cè)定釋放度，取1000mL燒杯，盛放人工淚液500mL，取一端開(kāi)口的玻璃管一只，加入制備好的凝膠劑1mL，開(kāi)口用醋酸纖維素膜封好，開(kāi)口向下，倒置懸掛于燒杯內(nèi)下部，并且使玻璃管整體沒(méi)入液面之下，開(kāi)動(dòng)磁力攪拌器，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為120r/min，分別在5、10、20、30、60、90、120、240、480min后取樣測(cè)定鹽酸洛美沙星濃度，每次取樣1mL，取樣后要補(bǔ)足同體積的釋放介質(zhì)。釋放度的計(jì)算式為下式：

，其中Qm為鹽酸洛美沙星的釋藥百分度，V總為介質(zhì)的總體積，m為測(cè)定次數(shù)，Ci為開(kāi)始第m次測(cè)定時(shí)，介質(zhì)中鹽酸洛美沙星的濃度；Vi為每次測(cè)定的取樣量，V0為初始時(shí)凝膠劑樣品加入的體積，根據(jù)上式，可以計(jì)算凝膠劑在介質(zhì)中的鹽酸洛美沙星釋藥百分度。

（六）鹽酸洛美沙星含量測(cè)定。參考相關(guān)文獻(xiàn)[9]，移取適量鹽酸洛美沙星溶液于分液漏斗中，加入溴甲酚綠的0.01mol/L氫氧化鈉溶液（1g溴甲酚綠以0.01mol/L氫氧化鈉溶液溶解形成1000mL溶液）2mL，醋酸-醋酸鈉緩沖溶液（pH=3.5）3mL，加適量的蒸餾水，使體積達(dá)到20mL，精確量取并加入氯仿20mL，振搖1min，使充分反應(yīng)，靜置10min，充分分層，分出氯仿層，并以同法制備不含鹽酸洛美沙星溶液的空白氯仿相作為參比，在415nm處測(cè)其氯仿溶液的吸光度[9]。

（七）工作曲線的制備。以分光光度法進(jìn)行測(cè)定含量，精確稱取鹽酸洛美沙星對(duì)照品0.0404g，在50mL容量瓶中以0.1mol/mL醋酸溶液適量使之溶解，以蒸餾水定容至50mL，從中移取10mL溶液于100mL容量瓶，以0.05mol/mL醋酸稀釋至刻度，得到鹽酸洛美沙星對(duì)照品溶液。分別移取鹽酸洛美沙星對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、10.0、14.0mL按2.6方法測(cè)定吸光度，制作工作曲線。

三、結(jié)果與分析

（一）膠凝溫度。分別制備了以泊洛沙姆407、泊洛沙姆407與泊洛沙姆188按不同比例混合的凝膠基質(zhì)的含有鹽酸洛美沙星、蒼耳子提取物的凝膠劑，分別按2.4測(cè)定其膠凝溫度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 膠凝溫度測(cè)定結(jié)果

結(jié)果表明，如果泊洛沙姆407單獨(dú)使用，膠凝溫度較低。目前泊洛沙姆407是原位凝膠應(yīng)用的主流，濃度一般為20% -30%，一般適當(dāng)配合使用泊洛沙姆188，泊洛沙姆188可以使泊洛沙姆407的膠凝溫度適當(dāng)升高，可以有助于獲得膠凝溫度更為理想的原位凝膠。根據(jù)表1的數(shù)據(jù)結(jié)果，25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188，25%泊洛沙姆407和3%泊洛沙姆188相對(duì)較為理想，泊洛沙姆是由聚氧乙烯(PEO)和聚氧丙烯(PPO)鏈段交替連接組成的一類高分子聚合物，兩種類型的結(jié)構(gòu)單位在形成凝膠時(shí)發(fā)揮的作用是不同的，聚氧乙烯(PEO)具有相對(duì)的親水性，因此二者的比例可能決定泊洛沙姆的膠凝溫度，一般說(shuō)來(lái)，PEO比例較高的話，膠凝溫度會(huì)相應(yīng)升高，因?yàn)檫@會(huì)使泊洛沙姆形成的膠束結(jié)構(gòu)的水溶液較為穩(wěn)定，粘度較低。而泊洛沙姆188中的PEO比例高于泊洛沙姆407。根據(jù)上述結(jié)果，選取了25%泊洛沙姆407和1%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和3%泊洛沙姆188三種基質(zhì)制備原位凝膠劑并做進(jìn)一步研究。

（二）加入人工淚液或人工鼻液后的膠凝溫度。將以25%泊洛沙姆407和1%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188三種基質(zhì)制成的原位凝膠劑按40:7的比例和40:1的比例與人工淚液和人工鼻液混合，按2.4測(cè)定膠凝溫度，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 與人工淚液或人工鼻液混合后的膠凝溫度

結(jié)果表明，與人工淚液或人工鼻液混合后，三種基質(zhì)原位凝膠劑的膠凝溫度都有所提高，初步分析原因可能是人工淚液和人工鼻液中離子強(qiáng)度較高，對(duì)于泊洛沙姆膠束溶液的穩(wěn)定具有一定的積極作用，因此，考慮這些因素，選用的凝膠劑基質(zhì)泊洛沙姆407濃度不可過(guò)低，泊洛沙姆188使用量要適宜，25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188為基質(zhì)制備的凝膠劑再與人工淚液和人工鼻液混合后膠凝溫度均較適宜，可選擇25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188為基質(zhì)制備凝膠劑。

（三）鹽酸洛美沙星釋放度測(cè)定結(jié)果。以2.7方法制備工作曲線，線性關(guān)系方程為A=0.00876C+0.0019，r=0.9914。結(jié)果表明吸光度與鹽酸洛美沙星的濃度在2.02-56.56μg/mL間呈較好的線性關(guān)系。按2.6法測(cè)定人工淚液中25%泊洛沙姆407，2%泊洛沙姆188為基質(zhì)制備的原位凝膠在不同采樣時(shí)間點(diǎn)的鹽酸洛美沙星含量，每次取樣1mL，至25mL容量瓶中，以蒸餾水定容。移取1mL，按2.6測(cè)定其吸光度，計(jì)算釋放度，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 鹽酸洛美沙星的釋放度

從表中數(shù)據(jù)可以看出，鹽酸洛美沙星-蒼耳子原位凝膠劑對(duì)于鹽酸洛美沙星有較好的緩釋效應(yīng)，一次給藥可維持藥物釋放可達(dá)2—4小時(shí)。

四、結(jié)論

以泊洛沙姆407為基質(zhì)，制備的原位凝膠膠凝溫度隨濃度增大而逐漸降低，若添加少量的泊洛沙姆188，可在濃度適中的情況下制得以泊洛沙姆407為主的基質(zhì)的蒼耳子-鹽酸洛美沙星原位凝膠，由于在模擬人工淚液和模擬人工鼻液中原位凝膠劑的膠凝溫度會(huì)有不同程度的上升。因此，確定制備蒼耳子-鹽酸洛美沙星凝膠劑的基質(zhì)為25%泊洛沙姆407，2%泊洛沙姆188，在人工淚液和人工鼻液中的膠凝溫度為33.1℃和31.9℃，在人工淚液中4h鹽酸洛美沙星基本釋放完全，初步確定以25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188為凝膠劑基質(zhì)制備可應(yīng)用于人體的蒼耳子-鹽酸洛美沙星原位凝膠劑具有可行性。

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[責(zé)任編輯 鄭麗娟]

R944

A

2095-0438（2015）08-0154-03

2015-04-28

趙大偉（1973-），男，黑龍江慶安人，綏化學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院講師，碩士，研究方向:藥物制劑和天然產(chǎn)物提取。

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（12531835）；綏化市科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目（KJZD 20140114）。