史文靜，楊建剛，肖志強

(1.陜西中藥研究所，陜西 咸陽 712000;2.陜西新藥技術開發(fā)中心，陜西 西安 710075)

腎康平膠囊是由山茱萸、菟絲子、金銀花等七味中藥組成的中藥復方制劑，具有保肝、清熱利尿、益腎化濁的功效，在臨床上主要用于熱淋澀痛、急性腎炎水腫、慢性腎炎急性發(fā)作等癥［1］。為有效控制腎康平膠囊的質量，以山茱萸中主要成分馬前苷為指標性成分，采用HPLC 測定腎康平膠囊中馬錢苷含量，并進行方法學研究，為腎康平膠囊質量標準研究提供一定的理論基礎。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

對照品馬錢苷(批號111640-201005)，購自中國藥品生物制品檢定所;腎康平膠囊(批號20140301，20140302，20140303)，自制;乙腈，色譜純;超純水。

Agilent 1260 型高效液相色譜儀;AG-135 型電子天平;KQ-300VDE 型超聲波清洗器。

1.2 色譜條件

色譜柱為Kromasil C18(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)，流 動 相 為 乙 腈-水(15 ∶ 85 )，流 速1.0 mL/min，檢測波長240 nm，室溫進樣，進樣量20 μL。理論板數(shù)按馬錢苷峰計算應不低于4 000;用外標法計算含量。

1.3 溶液制備

1.3.1 對照品溶液 取馬錢苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇溶解，制成含馬錢苷0.43 g/L 的對照品儲備液。1.3.2 供試品溶液 取膠囊內容物約1.0 g，精密稱定，置于100 mL 具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min。放冷，稱定重量，用50%甲醇補足減失重量，搖勻，微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液。

1.3.3 陰性樣品溶液 按處方比例，稱取除制山茱萸以外的其余藥味，按腎康平膠囊制備工藝制成缺馬錢苷的陰性樣品，按照1.3.2 節(jié)方法制成陰性樣品溶液。

1.4 實驗方法

取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，按照色譜條件測定，結果見圖1。

圖1 對照品(A)、腎康平膠囊(B)和空白(C)的HPLC 圖Fig.1 HPLC map of contrasts(A)，Shenkangping capsule(B)and solvent(C)

由圖1 可知，馬錢苷的保留時間約4.62 min，供試品色譜中馬錢苷峰與雜峰分離效果良好，陰性對照樣品在相應位置上無干擾峰。

2 結果與討論

2.1 供試品溶液制備方法的選擇

以50%甲醇為溶劑，分別考察了超聲提取、加熱回流等方法的提取效果，其中超聲提取法的提取效果最好，檢測雜質峰明顯減少，馬錢苷峰分離良好，同晏桂敏等研究結果一致［2］。

2.2 流動相的選擇

考察了乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)［3］、四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)［4］及乙腈-水(15∶ 85)［5］等流動相。結果表明，乙腈-水(15∶85)為流動相能達到滿意的分離效果，供試品中馬錢苷峰達到基線分離，峰形對稱，且分離度較好，出峰時間為4.62 min。

2.3 線性關系考察

分別精密吸取濃度0.43 g/L 的馬錢苷對照品儲備液0.3，0.5，1.0，1.5，2.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，用80% 甲醇稀釋，并定容，得濃度為0.012 9，0.021 5，0.043，0.064 5，0.086 g/L 對照品溶液。分別精密吸取20 μL 注入液相色譜儀，按色譜條件測定峰面積，并以峰面積對濃度進行作圖，得線性方程A=36 445C－108.1，R2= 0.999 9。表明馬錢苷在0.012 9 ～0.086 g/L 范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.4 精密度

吸取濃度0.043 g/L 的馬錢苷對照品溶液，重復進樣6 次，結果馬錢苷峰面積RSD 為0.48%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性

取腎康平膠囊(批號20120701)內容物約1.0 g，精密稱定，制備6 份供試品溶液。精密吸取供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，10 h 進樣，記錄馬錢苷峰面積。結果RSD 為0.92%(n =6)，表明腎康平膠囊供試品在10 h 內穩(wěn)定。

2.6 重復性

取腎康平膠囊(批號20140301)內容物約1.0 g，精密稱定，制備6 份供試品溶液進行測定。結果RSD 為1.58%(n =6)，表明本方法重復性良好。

2.7 加樣回收率

取已知濃度的腎康平膠囊(批號20140301)內容物約0.5 g，共6 份，精密稱定，加入具塞錐形瓶中，分別精密加入濃度0. 43 g/L 的對照品溶液1 mL，再精密加入50%甲醇24 mL，精密稱定，超聲處理30 min，放置室溫，精密稱定，用50%甲醇補足重量。制備供試品，按色譜條件測定，記錄峰面積，計算回收率，結果見表1。

表1 馬錢苷加樣回收率(n=6)Table 1 Recovery tests of loganin

由表1 可知，平均回收率為100.13%，表明本方法回收率良好，RSD 為1.78%(n=6)。

2.8 供試品含量測定

取腎康平膠囊3 批的內容物，制備供試品溶液，按色譜條件進樣測定，計算馬錢苷的含量，結果見表2。

表2 腎康平膠囊中馬錢苷含量測定結果(n=3)Table 2 Content determination results of loganin in samples

3 結論

本文采用HPLC 測定腎康平膠囊中馬錢苷的含量，Kromasil C18色譜柱，以乙腈-水(15∶85)為流動相，檢測波長240 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃。結果表明，馬錢苷在0.012 9 ～0.086 g/L 呈良好的線性關系，R2=0.999 9，加樣回收率99.02%(n =6)，RSD 值1.78%。本方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可用于腎康平膠囊中馬錢苷的質量控制。

［1］ 李雅梅，李華，李春榮.山茱萸化學成分及其藥理作用研究進展［J］.武警醫(yī)學院學報，2010，19(6):500-502.

［2］ 晏桂敏，林燕飛，孫靜蕓，等. 山茱萸中馬前苷含量測定的樣品處理方法改進［J］.中國藥業(yè)，2005，14(10):38-39.

［3］ 程世云，鄧祖磊，黃麗丹，等.山茱萸藥材HPLC 特征圖譜研究［J］.中國藥事，2012，26(12):1353-1356.

［4］ 王裴芳，謝麗，許保海.六味地黃顆粒中馬前苷含量測定的研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16(8):52-53.

［5］ 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典［S］. 一部. 北京:化學工業(yè)出版社，2010:26.