文∕王建勇 潘遠(yuǎn)達(dá) 吳謝華 尹醫(yī)祥

（上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司）

目前我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)處于快速發(fā)展期，大型牧場建設(shè)如雨后春筍般涌現(xiàn)，國內(nèi)良種奶牛數(shù)量已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足需求，只好用較高的價格從國外進(jìn)口奶牛。如何利用好國內(nèi)現(xiàn)有的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)奶牛群體快速擴(kuò)繁是擺在養(yǎng)牛人面前的現(xiàn)實課題，而性別控制技術(shù)的實現(xiàn)和成熟使得這一愿望變?yōu)榱爽F(xiàn)實。性控凍精是通過精子分離技術(shù)分離出來的，可以人為控制遺傳性別的精液。XY精子分離技術(shù)已經(jīng)進(jìn)入商業(yè)化運作階段，是當(dāng)今最先進(jìn)的性別控制技術(shù)。

由于性控凍精在制作上經(jīng)過了分離處理，精子數(shù)較少（200 萬～240 萬個/支)，約為常規(guī)凍精精子數(shù)的1/4。另外，性控凍精在精子分離過程中，精子能量有所消耗，輸入子宮后，在子宮內(nèi)存活的時間要比常規(guī)凍精時間短。因此，性控凍精情期受胎率比常規(guī)凍精要低。為了探討不同因素對奶牛性控凍精受胎率的影響，本文根椐本公司所屬牧場2013年12月～2014年2月對性控凍精的使用情況進(jìn)行了綜合分析。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 性控凍精

選擇美國育種公司遺傳基因優(yōu)秀的驗證公牛性控凍精。精液質(zhì)量及活力:規(guī)格為0.25 mL細(xì)管，每支凍精X精子數(shù)200 萬～240 萬個，解凍后精子活力0.35～0.41。

1.1.2 試驗牛只

本公司所屬牧場的14～16 月齡青年牛，健康、營養(yǎng)均衡且生殖系統(tǒng)發(fā)育正常。

1.2 試驗方案

1.2.1 試驗時間

2013年12月～2014年2月。

1.2.2 發(fā)情鑒定

首先根據(jù)奶牛接受爬跨（站立發(fā)情）為0計時，再結(jié)合直腸檢查判定卵泡的發(fā)育狀況和黏液的性質(zhì)來確定奶牛所處的發(fā)情狀態(tài)。

1.2.3 解凍方法

凍精從液氮罐取出后在35 ℃溫水水浴40 s，在最快的時間內(nèi)進(jìn)行輸精。

1.2.4 輸精方法

采用直腸把握子宮頸輸精法，操作時按照動作輕柔、無污染、無損傷的原則進(jìn)行。輸精部位分為子宮體內(nèi)和有卵泡側(cè)子宮角。

1.2.5 妊娠診斷

配種后30 天先用血檢的方法進(jìn)行早孕檢測，最后在配種后60～70 天進(jìn)行直腸檢查驗胎，確定是否有胎。

1.2.6 繁殖記錄

參加配種的牛只繁殖信息全部記錄在繁殖資料和配種記錄本上，要求詳細(xì)記錄奶牛的發(fā)情表現(xiàn)，所用公牛號，配次，發(fā)情狀況（自然發(fā)情、激素催情），輸精部位等。

表1 不同種公牛性控凍精的受胎率

表2 不同配種員2013 年12 月～2014 年2 月所配母牛的受胎率

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 性控凍精受胎率

從2003年12月～2014年2月，共有2 515 頭次的青年后備牛參加配種，受孕牛只為1 525 頭，總情期受胎率60.6%。其中性控凍精輸精779 頭次，受孕405 頭，情期受胎率52.0%；常規(guī)凍精輸精1 736 頭次，受孕1 120 頭，情期受胎率64.5%。

2.2 不同種公牛性控凍精受胎率的分析

種公牛影響與配母牛的受胎率，對不同種公牛受胎率進(jìn)行分析。不同的種公牛精液經(jīng)分離、冷凍、解凍后，精子活力、存活時間有比較大的差異，給母牛輸精后在受胎率上也反映出這方面的差異，不同種公牛性控凍精的受胎率差異顯著（表1）。

2.3 不同配種員的受胎率

配種員對受胎率有較大的影響，為了研究其效應(yīng)，對部分配種員在2013年12月～2014年2月期間所配母牛的受胎率進(jìn)行了統(tǒng)計分析（表2）。

從分析結(jié)果可知，同一品種性控凍精由不同配種員進(jìn)行受精，受胎率存在明顯差異。這是由于配種員在發(fā)情鑒定、適時輸精把握、輸精技術(shù)熟練度等技能上存在差異。

此外，大型規(guī)模牧場由于配種頭數(shù)相對較多，配種時間集中，其配種各項技術(shù)環(huán)節(jié)難以精細(xì)化，特別是在適時輸精的掌控上。

2.4 不同輸精部位對受胎率的影響

從表3的結(jié)果可以看出，卵泡側(cè)子宮角輸精受胎率顯著高于子宮體輸精，由于性控凍精在制作上經(jīng)過了分離處理，精子數(shù)較少，子宮角深部輸精可以提高進(jìn)入輸卵管壺腹部的精子數(shù)，有助于提高受胎率，距離受精部位（輸卵管壺腹部）越近，情期受胎率越高。

表3 不同輸精部位的受胎率比較

2.5 奶牛不同發(fā)情狀態(tài)對受胎率的影響

從胡橋牧場奶牛不同發(fā)情狀況性控凍精的受胎率結(jié)果可以看出，PG催情的受胎率與自然發(fā)情的差異不顯著（表4）。

表4 胡橋牧場不同發(fā)情狀況性控凍精的受胎率

表5 德州牧場不同配次性控凍精的受胎率

2.6 不同配次對受胎率的影響

德州牧場不同配次性控凍精的受胎率結(jié)果表明，后備牛第一情期性控凍精的受胎率高于第二情期受胎率，但差異不顯著（表5）。使用性控凍精的目的是快速擴(kuò)繁，后備牛第二情期如果也使用性控凍精，可加大擴(kuò)繁速度。

3 討論

3.1 性控凍精與常規(guī)凍精受胎率

從2003年12月～2014年2月，本公司所屬牧場共有779 頭次青年牛使用性控凍精輸精，性控凍精情期受胎率52.0%。另有1 736 頭次使用常規(guī)凍精輸精，受胎率為64.5%，性控凍精受胎率為常規(guī)凍精的80.0%，差異顯著。0.25 mL的常規(guī)凍精有效精子數(shù)約800 萬個，體外25 ℃存活時間一般達(dá)12 h，性控凍精有效精子數(shù)約230 萬個，存活時間約8 h，這是性控凍精受胎率較低的因素。

3.2 解決性控凍精受胎率制約性因素的措施

從本試驗結(jié)果分析，凍精品種、配種員技術(shù)水平、輸精部位、不同發(fā)情狀態(tài)、配次等因素均影響性控凍精的受胎率，其中以輸精部位對性控凍精受胎率影響更顯著。由于奶牛性控凍精價格相對較高，且受胎率比常規(guī)凍精低，所以在使用性控凍精時應(yīng)嚴(yán)格采取以下措施，有效提高性控凍精的受胎率。

3.2.1 嚴(yán)格選購優(yōu)質(zhì)性控凍精

選購性控凍精時，應(yīng)選購信譽度好，技術(shù)力量雄厚的育種公司產(chǎn)品，不僅要關(guān)注育種值，同時要重視配種受胎率、產(chǎn)犢難易度、女兒懷孕率等信息。

3.2.2 嚴(yán)格選擇受配母牛

嚴(yán)格選擇受配母牛對提高性控凍精受胎率非常必要，以14～16 月齡后備牛最好，牛只健康、營養(yǎng)狀況良好、生殖系統(tǒng)發(fā)育正常。輸精次數(shù)3 次以上的母牛不宜使用。

3.3.3 輸精部位應(yīng)選擇卵泡側(cè)子宮角輸精

本試驗結(jié)果表明，卵泡側(cè)子宮角輸精，可以顯著提高進(jìn)入輸卵管壺腹部的精子數(shù)，有助于提高受胎率。但采用子宮角輸精，容易損傷子宮粘膜，因此，要求輸精操作技術(shù)嫻熟，嚴(yán)格無菌操作。