陳燕文　王　超王旭光馮永民　安　寧　吳洪鑾　李尚妹　陶靜莉　劉偉敬　劉華鋒　潘慶軍(廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎臟疾病研究所，湛江524001)

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系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血T、B細(xì)胞自噬水平及其臨床意義①

陳燕文王超②王旭光③馮永民安寧吳洪鑾李尚妹陶靜莉劉偉敬劉華鋒潘慶軍(廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎臟疾病研究所，湛江524001)

［摘要］目的:探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)患者外周血T、B淋巴細(xì)胞自噬水平及其臨床意義。方法:入組就診前4周內(nèi)未用藥的SLE患者68例;用流式細(xì)胞術(shù)檢測23例正常人和68例經(jīng)激素和免疫抑制劑治療前后的SLE患者外周血T、B淋巴細(xì)胞的自噬水平及其變化情況，并分析其與補(bǔ)體C3、SLEDAI評(píng)分和血清Anti-dsDNA水平的相關(guān)性。結(jié)果:治療前SLE患者T淋巴細(xì)胞自噬水平顯著高于正常人，活動(dòng)組(SLEDAI score≥10) SLE患者顯著高于穩(wěn)定組(SLEDAI score＜10)，且活動(dòng)組中初發(fā)組(即首次確診)顯著高于復(fù)發(fā)組(P均＜0.05)。而SLE患者B淋巴細(xì)胞自噬水平顯著低于正常人，活動(dòng)組SLE患者顯著低于穩(wěn)定組，且活動(dòng)組中初發(fā)組顯著低于復(fù)發(fā)組(P均＜0.05)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，SLE患者T淋巴細(xì)胞自噬水平與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)(rs= 0.289，P＜0.05)，B淋巴細(xì)胞自噬水平與血清補(bǔ)體C3水平呈正相關(guān)(rs= 0.371，P＜0.01)。經(jīng)激素和免疫抑制劑治療5 d后，SLE患者預(yù)后良好組(SLEDAI降低≥4分)的T淋巴細(xì)胞自噬水平即可顯著降低(P＜0.05) ;治療3 d后，SLE患者預(yù)后良好組的B淋巴細(xì)胞自噬水平即可顯著升高(P＜0.05) ;預(yù)后不良組治療前后T、B淋巴細(xì)胞的自噬水平變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論: SLE患者外周血T、B淋巴細(xì)胞自噬水平異常，其變化與疾病活動(dòng)度相關(guān)，有望作為疾病活動(dòng)度指標(biāo)和潛在的臨床治療靶標(biāo)。

［關(guān)鍵詞］系統(tǒng)性紅斑狼瘡; T細(xì)胞; B細(xì)胞;自噬; LC3-Ⅱ

①本文受國家自然科學(xué)基金(No．81202346，30971370，81270798)和湛江市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B01040)資助。

②共同第一作者，沈陽醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院腎內(nèi)科，沈陽110000。

③共同第一作者，廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床研究中心，湛江524001。

Levels of autophagy in T cells and B cell of patients with systemic lupus erythematosus and its clinical significance

CHEN Yan-Wen，WANG Chao，WANG Xu-Guang，F(xiàn)ENG Yong-Min，AN Ning，WU Hong-Luan，LI Shang-Mei，TAO Jing-Li，LIU Wei-Jing，LIU Hua-Feng，PAN Qing-Jun.Institute of Nephrology，Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Zhanjiang 524001，China

［Abstract］Objective: To investigate levels of autophagy in T cells and B cell of patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and its clinical significance.Methods: 68 SLE patients without treatment within 4 weeks were enrolled in this study.We accessed the levels of autophagy in T cells and B cells of 23 healthy controls and 68 patients before and after treatment by flow cytometry，and analyzed their correlations with serum levels of C3 and anti-dsDNA antibodies，SLEDAI score，et al．Results: Before treatment，a significantly increased levels of LC3-Ⅱwas observed in SLE patients than healthy controls，the active group(SLEDAI score≥10) was significantly higher than the stable group(SLEDAI score＜10)，and the newly diagnosed group was significantly higher than the recurrent group (all P＜0.05) .While the levels of LC3-Ⅱwas decreased in B lymphocytes in SLE patients，the active group was significantly lower than stable group，and the active group was significantly lower than the newly diagnosed group(all P＜0.05)．Correlation analysis found that，a positively correlation was observed for the levels of LC3-Ⅱwith SLEDAI score in T lymphocyte(rs= 0.289，P＜0.05)，and the levels of C3 were positively correlated the levels of LC3-Ⅱin B lymphocyte(rs=0.371，P＜0.01) .After treatment for five days，levels of autophagy in T lymphocytes of SLE patients with good prognosis(SLEDAI score decreased≥4) significantly decreased(P＜0.05) .Also，three days after treatment，levels of autophagy in B lymphocytes of SLE patients with good prognosis were increased significantly(P＜0.05) .However，SLE patients with poor prognosis had no such difference(P＞0.05)．Conclusion: Levels of autophagy in T and B lymphocytes of SLE patients are abnormal compared to healthy controls，and these changes are associated with disease activity.Also，these changes are expected to be the indicators of disease activity and potential therapeutic targets in SLE.

［Key words］Systemic lupus erythematous; T lymphocytes; B lymphocytes; Autophagy; LC3-Ⅱ

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)是一種免疫調(diào)節(jié)紊亂的自身免疫性疾病，其發(fā)病機(jī)制尚未完全解析［1］。但T、B細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞功能失常，導(dǎo)致自身抗體產(chǎn)生，從而形成大量免疫循環(huán)復(fù)合物，進(jìn)而沉積于各個(gè)臟器的病理過程已獲廣泛認(rèn)知［2］。目前認(rèn)為，自身抗原失耐受的主要機(jī)制是T細(xì)胞異?；罨虲D4+輔助T淋巴細(xì)胞異常分泌細(xì)胞因子［3］，以及B細(xì)胞異?；罨胺只癁樾?yīng)細(xì)胞(漿細(xì)胞)，通過分泌自身抗體，攝取和提呈自身抗原，釋放多種細(xì)胞因子等方式參與自身免疫疾病的啟動(dòng)和維持［4，5］。其中，T、B細(xì)胞活化和凋亡信號(hào)異常是SLE的發(fā)病基礎(chǔ)［6］。研究證實(shí)，輔助性T細(xì)胞(Th細(xì)胞)分化異常和功能失調(diào)在SLE發(fā)生發(fā)展中也起關(guān)鍵作用［7］，如Th細(xì)胞分泌大量的炎癥因子，同時(shí)刺激B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞產(chǎn)生更多自身抗體，進(jìn)而參與SLE的發(fā)?。?，7］。基于T、B細(xì)胞可相互影響，共同參與SLE的發(fā)病，但其具體作用機(jī)制和方式有待進(jìn)入一步探討。

自噬是經(jīng)溶酶體介導(dǎo)的對胞內(nèi)蛋白、衰老細(xì)胞器和胞內(nèi)病原體等進(jìn)行降解的過程，廣泛存在于真核生物中，對穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)境、維持細(xì)胞的生長、分化和功能極其重要［8］。在自噬過程中，內(nèi)源性LC3轉(zhuǎn)化加工成LC3-I，隨著LC3-I和其他自噬相關(guān)蛋白共軛結(jié)合為LC3-Ⅱ，雙層分隔膜逐漸延伸形成自噬體，因此LC3-Ⅱ是自噬體形成的標(biāo)記，檢測該形式的LC3-Ⅱ的水平可作為自噬量化的指標(biāo)［9］。目前，市售anti human LC3抗體可同時(shí)識(shí)別LC3-I和LC3-Ⅱ，但經(jīng)以saponin(皂苷)為代表的表面活性劑處理細(xì)胞可清除LC3-I，保留LC3-Ⅱ［12-14］，因此，用流式細(xì)胞術(shù)檢測經(jīng)saponin處理的細(xì)胞，僅可檢測LC3-Ⅱ，是一種方便快捷的檢測手段。

對于SLE患者免疫細(xì)胞自噬是否異常，F(xiàn)rédéric［10］和趙繼軍［11］等發(fā)現(xiàn)SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)有自噬泡堆積的現(xiàn)象。已知，PBMC含多種細(xì)胞類型，而T、B細(xì)胞在SLE疾病發(fā)展中起重要作用，但其自噬水平如何，以及治療后自噬水平變化如何，有何臨床意義?尚有待進(jìn)一步深入研究。

本研究通過檢測SLE患者，及其治療前后外周血T、B細(xì)胞自噬通路關(guān)鍵標(biāo)記物L(fēng)C3-Ⅱ的表達(dá)情況，探討SLE患者外周血T、B淋巴細(xì)胞的自噬水平及其臨床意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料入組2011年11月～2012年12月在廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎病內(nèi)科門診和住院的SLE患者68例(男13例，女55例)，診斷均符合1997年美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ACR)修正的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)。收集SLE患者的臨床資料及實(shí)驗(yàn)室檢查數(shù)據(jù)，并計(jì)算患者SLE活動(dòng)指數(shù)(SLE disease activity index，SLEDAI)，根據(jù)SLEDAI評(píng)分(SLEDAI score)將SLE患者分為活動(dòng)組(SLEDAI≥10分) 46例(包括初診活動(dòng)期31例和復(fù)發(fā)活動(dòng)期15例)和穩(wěn)定組(SLEDAI＜10分) 22例?；顒?dòng)組患者平均年齡為(24.3±7.2)歲，穩(wěn)定組患者平均年齡為(30.1±9.2)歲，同時(shí)選取性別和年齡匹配的健康志愿者23例(男6例，女18例)，平均年齡(23.7±5.3)歲為對照組。

1.2試劑和儀器PE anti-human CD19、PE-Cy7 anti human CD3、APC-Cy7 anti human CD4均購自BioLegend公司。anti human LC3抗體(可同時(shí)識(shí)別LC3-I和LC3-Ⅱ)及其同型對照(mouse IgG1)購自MBL公司。FITC anti mouse IgG購自Santa cruz公司。裂解液、固定液、穿透液(saponin)、染色液購自BioLegend和ebioscience公司。流式細(xì)胞儀為BD FACSCantoTMⅡ。

1.3流式細(xì)胞檢測人外周血T、B細(xì)胞自噬標(biāo)記物

1.3.1熒光抗體標(biāo)記采集受試者清晨空腹外周靜脈血3 ml，EDTA抗凝;取2支試管用于制備樣本，先將裂解液分別加入上述試管中，每管6 ml，再將血標(biāo)本1 ml分別加入上述試管并充分裂解;離心后去上清，加入2 ml PBS(10 mmol/L)洗滌，兩試管均加入熒光表面抗體PE-Cy7 CD3(10 μl)、APCCY7 CD4(10 μl)、PE CD19(10 μl)，混勻，避光孵育30 min;再加入固定液100 μl，固定15 min;基于參考文獻(xiàn)［12-14］，繼之加入穿透液(含0.1% saponin) 2 ml/管，充分震蕩，洗滌穿透2次，1 500 r/min×6 min/次。加入穿透液(100 μl/管)重懸細(xì)胞后加含羊血清5%的封閉液進(jìn)行封閉; PBS洗滌2次后在試管1加入0.5 μl的mouse IgG1作為同型對照，試管2加入anti-LC3抗體0.5 μl，混勻，室溫避光孵育30min;加入PBS洗滌2次;加入穿透液(100 μl/管)重懸細(xì)胞后，加入FITC anti mouse IgG(2 μl/管)，室溫避光孵育30 min;再次PBS洗滌2次;加入染色液重懸細(xì)胞(200 μl/管)，流式檢測備用。

1.3.2流式細(xì)胞儀檢測設(shè)置相應(yīng)各通道電壓后，根據(jù)前向散射角和側(cè)向散射角，對整個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行設(shè)門，分別以CD3+定義為CD3+T細(xì)胞; CD3+CD4+定義為CD4+T細(xì)胞; CD3+CD4－定義為CD8+T細(xì)胞; CD3+CD4+CD19+定義為B細(xì)胞。以平均熒光強(qiáng)度(Mean fluorescence intensity，MFI)表示T、B細(xì)胞的LC3-Ⅱ的表達(dá)水平。

1.4 SLE的其他指標(biāo)檢測方法補(bǔ)體C3采用免疫速率散射比濁法(廣州丹納醫(yī)療科技有限公司)，anti-dsDNA采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(上?？菩律锛夹g(shù)股份有限公司)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS16.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。根據(jù)Kolmogorov-Smimov正態(tài)性檢驗(yàn)可知該組資料是否為偏態(tài)分布，本文采用非參數(shù)檢測方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料差異比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用中位數(shù)(四分位間距)［M(P25-P75)］表示，Mann-Whitney Test分析;非參數(shù)數(shù)據(jù)的相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)，比較自噬相關(guān)標(biāo)記物L(fēng)C3-Ⅱ與SLEDAI評(píng)分及其他指標(biāo)的相關(guān)性。

2　結(jié)果

2.1 SLE患者外周血T、B細(xì)胞LC3-Ⅱ的比較

2.1.1 SLE患者外周血T細(xì)胞LC3-Ⅱ的表達(dá)CD3+T細(xì)胞LC3-Ⅱ的表達(dá)水平: SLE活動(dòng)組LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度為1 000.5(909.5，1 270)顯著高于穩(wěn)定組263.5(219，341)和對照組282(260，317)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01) ;而穩(wěn)定組與對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) ;在活動(dòng)組中初發(fā)組372.5 (221.5，451.5)低于復(fù)發(fā)組461 (386.5，937)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

CD4+T細(xì)胞LC3-Ⅱ的表達(dá)水平: SLE活動(dòng)組LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度為1 021(929，1281)顯著高于穩(wěn)定組260.5 (205.62，310.13)和對照組289 (272，320)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01) ;穩(wěn)定組與對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) ;在活動(dòng)組中初發(fā)組341(128，484)低于復(fù)發(fā)組396.5 (311，480)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

CD8+T細(xì)胞LC3-Ⅱ的表達(dá)水平: SLE活動(dòng)組LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度為997(899，1290)顯著高于穩(wěn)定組297.75(244.25，358.75)和對照組275(257，306)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01) ;穩(wěn)定組與對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) ;在活動(dòng)組中初發(fā)組411(377.5，481)與復(fù)發(fā)組404(409，1317)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) (見圖1)。

圖1　 SLE患者和正常人T細(xì)胞自噬(LC3-Ⅱ)的表達(dá)情況Fig．1 Expression of autophagy(LC3-Ⅱ) in T cells of SLE patients and health controls

Note: Active SLE=46，inactive SLE=23 and healthy controls= 22，* .P＜0.05.

2.1.2 SLE患者外周血B細(xì)胞LC3-Ⅱ的表達(dá)SLE活動(dòng)組外周血B細(xì)胞LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度為319.5 (206.1，368.8)，低于SLE穩(wěn)定組385 (311.5，451)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05) ;與對照組350 (300.5，511)相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) ; SLE穩(wěn)定組與對照組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) (圖2A)。在活動(dòng)組中初發(fā)SLE外周血B細(xì)胞LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度261(188，361)低于復(fù)發(fā)SLE外周血B細(xì)胞LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度357 (305，387)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05) (圖2B)。

2.2 SLE患者T、B細(xì)胞LC3-Ⅱ水平與補(bǔ)體C3、SLEDAI評(píng)分和Anti-dsDNA的相關(guān)性SLE患者組外周血CD3+T細(xì)胞LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)(rs= 0.289，P＜0.05)，而CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度與血清C3水平、SLEDAI評(píng)分、血清anti-dsDNA水平無相關(guān)關(guān)系。

SLE患者組外周血B細(xì)胞LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度與血清C3水平呈正相關(guān)(rs=0.371，P＜0.01)。而與SLEDAI評(píng)分、血清anti-dsDNA抗體滴度均無相關(guān)關(guān)系(表1)。

圖3　 SLE患者治療前后外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和B細(xì)胞LC3-Ⅱ變化情況Fig．3 Changes of levels of LC3-Ⅱexpression in CD3+T cells，CD4+T cells，CD8+T cells and B cells in SLE patients before and after treatment

表1　 SLE患者T細(xì)胞和B細(xì)胞LC3-Ⅱ與補(bǔ)體C3、SLEDAI評(píng)分和Anti-dsDNA的相關(guān)分析Tab．1 Analysis of correlations between expression of LC3-Ⅱin T cells and B cell with serum levels of anti-ds-DNA antibodies and C3 and SLEDAI scores in SLE patients

表2　預(yù)后良好的SLE患者T、B細(xì)胞LC3-Ⅱ水平顯著變化的天數(shù)Tab．2 Days of significantly change of LC3-Ⅱlevels expression in T and B cells of SLE patients with good prognosis

2.3治療后外周血T、B細(xì)胞LC3-Ⅱ的變化情況本研究同時(shí)隨訪了29例SLE患者(A組: 26例預(yù)后良好，B組: 3例預(yù)后較差)，檢測其在本次入院治療前和治療后第7天的外周血T、B細(xì)胞自噬相關(guān)標(biāo)記物的變化情況。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分折與治療前對比:治療后SLE患者外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞LC3-Ⅱ的變化情況: AB兩組LC3-Ⅱ的表達(dá)水平治療前后差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

治療后SLE患者外周血B細(xì)胞LC3-Ⅱ的變化情況: A組LC3-Ⅱ的表達(dá)水平從治療前399(193.5，363.5)升至510(399，649)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01) ; B組，治療前后LC3-Ⅱ表達(dá)分別為207 (203.5，212)和461(224，606)，治療前后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) (圖3)。

2.4 SLE患者經(jīng)藥物治療前后補(bǔ)體C3、SLEDAI以及外周血T、B細(xì)胞LC3-Ⅱ表達(dá)的變化情況隨訪SLE患者經(jīng)激素(醋酸潑尼松、甲潑尼龍琥珀酸鈉)和免疫抑制劑(環(huán)磷酰胺、環(huán)孢素A、霉酚酸酯、硫唑嘌呤、雷公藤多甙)治療前和治療后1、3、5、7 d外周血T、B細(xì)胞LC3-Ⅱ、SLEDAI評(píng)分和補(bǔ)體C3結(jié)果(表2)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分折與治療前配對檢驗(yàn)，治療5 d 后A組(預(yù)后良好組) T細(xì)胞和治療3 d后B細(xì)胞的LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度發(fā)生變化，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而其他指標(biāo)相對變化較慢，補(bǔ)體在治療1個(gè)月才有顯著變化，anti-dsDNA水平變化時(shí)間在6個(gè)月。

3　討論

已知自噬同時(shí)參與生理和病理過程［15-17］，自噬異常存在于多種自身免疫性疾病中［11，18，19］，但SLE相關(guān)的自噬研究較少，部分結(jié)果尚有爭議［9-11，20，23］。明確兩大類免疫細(xì)胞T、B細(xì)胞的自噬活性以及與疾病的轉(zhuǎn)歸關(guān)系尤為重要［21］。

本研究發(fā)現(xiàn)，疾病活動(dòng)期SLE患者外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度顯著高于穩(wěn)定組和對照組，該增多可能由于自噬誘導(dǎo)增加或自噬通路受阻導(dǎo)致［22］。另外，已報(bào)道Th細(xì)胞因子可以誘導(dǎo)自噬［19］，本研究中，與對照組相比，活動(dòng)組SLE患者外周血T細(xì)胞LC3-Ⅱ表達(dá)水平均顯著增加，并與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)關(guān)系。提示在SLE發(fā)病時(shí)T細(xì)胞的LC3-Ⅱ增加可能與細(xì)胞因子的增多有關(guān)，即SLE患者外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞存在自噬被過度誘導(dǎo)的現(xiàn)象，從而活化T細(xì)胞，釋放大量細(xì)胞因子，促進(jìn)炎癥和器官損傷，加重疾病，致SLEDAI評(píng)分升高［6，7，24］。但是我們對SLE活動(dòng)組中初發(fā)組與復(fù)發(fā)組的比較發(fā)現(xiàn)雖然活動(dòng)組LC3-Ⅱ顯著高于穩(wěn)定組及對照組，但是LC3-Ⅱ的增加主要以復(fù)發(fā)SLE組為主，提示SLE治療藥物在治療疾病的同時(shí)也極大地干預(yù)了細(xì)胞的自噬水平。此外，還發(fā)現(xiàn)在活動(dòng)組中初發(fā)SLE外周血CD3+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞LC3-Ⅱ的表達(dá)低于復(fù)發(fā)組，但CD8+T細(xì)胞則無組間差異，提示CD8+T細(xì)胞LC3-Ⅱ的表達(dá)對治療藥物的敏感性可能不如CD3+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞。

隨訪研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過5 d治療后，病情好轉(zhuǎn)的SLE患者LC3-Ⅱ的表達(dá)水平下降，進(jìn)一步支持自噬參與了SLE的發(fā)病，并且現(xiàn)有的激素和免疫抑制劑存在自噬調(diào)控的作用［25，26］。

此外，研究結(jié)果顯示疾病活動(dòng)期SLE患者外周血B細(xì)胞LC3-Ⅱ的表達(dá)低于對照組，并與補(bǔ)體C3呈正相關(guān)，推測SLE患者外周血B細(xì)胞自噬在誘導(dǎo)階段即受到抑制，已有文獻(xiàn)證實(shí)自噬基因ATG5是B細(xì)胞存活的重要影響因素［27］，即敲除Atg5可使B細(xì)胞存活率明顯下降，即激活自噬是自身免疫性B細(xì)胞存活的一種機(jī)制［23］。我們的結(jié)果顯示B細(xì)胞的自噬可能受抑制，理論上B細(xì)胞的存活和功能亦可能受損，然而SLE發(fā)病過程中B細(xì)胞和T細(xì)胞可相互作用，如疾病活動(dòng)期T細(xì)胞自噬被過度誘導(dǎo)，分泌多種炎癥因子促使B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞，并分泌大量自身抗體［6，7，24］，進(jìn)而激活補(bǔ)體途徑，導(dǎo)致血清補(bǔ)體C3水平降低?；赟LE發(fā)病中T淋巴細(xì)胞的主導(dǎo)地位，推測其可調(diào)控B細(xì)胞因自噬受抑制而引起的功能缺陷。同時(shí)通過分析初發(fā)組與復(fù)發(fā)組SLE患者的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)LC3-Ⅱ的表達(dá)低于復(fù)發(fā)組，推測現(xiàn)行治療藥物(激素和免疫抑制劑)對B細(xì)胞自噬存在著廣泛的影響。但目前關(guān)于免疫抑制劑對B細(xì)胞自噬情況的影響報(bào)道較少。

最后，隨訪研究還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過治療7 d后，病情好轉(zhuǎn)的SLE患者LC3-Ⅱ的表達(dá)水平增加，推測這種抑制作用，隨著疾病的好轉(zhuǎn)逐漸減弱。同時(shí)預(yù)后良好的患者治療第三天后LC3-Ⅱ的平均熒光強(qiáng)度表達(dá)顯著升高，因此該指標(biāo)有望成為判斷藥物療效的早期敏感指標(biāo)。

綜上，SLE患者外周血T、B淋巴細(xì)胞自噬水平異常，其變化與疾病活動(dòng)度相關(guān)，可作為預(yù)后的標(biāo)志物，為SLE治療提供了一個(gè)潛在的靶點(diǎn)。

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［收稿2015-03-28修回2015-04-13］

(編輯倪鵬)

·臨床免疫學(xué)·

doi:10．3969/j．issn．1000-484X．2015．10．018

通訊作者及指導(dǎo)教師:劉華鋒(1969年－)，男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事免疫性腎小球疾病發(fā)病機(jī)制方面的研究，E-mail: hf－liu@ 263．net。潘慶軍(1978年－)，男，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事自身免疫性疾病防治方面的研究，E-mail: stilwapan@ gmail．com。

作者簡介:陳燕文(1989年－)，女，主要從事自身免疫性疾病的防治研究，E-mail: cyw1025@ 126．com。

文章編號(hào)1000-484X(2015) 10-1380-06

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

中圖分類號(hào)R392