覃軍　梁珠民　李軍成

摘要：為了解某規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟、口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型感染等豬場(chǎng)主要疫病的免疫效果，采集該豬場(chǎng)不同豬群80份血清樣品，用間接血凝試驗(yàn)方法檢測(cè)豬瘟和口蹄疫的抗體水平，用ELISA方法檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征和豬圓環(huán)病毒2型感染的陽(yáng)性率。檢測(cè)結(jié)果，該場(chǎng)豬瘟抗體合格率達(dá)100.0%，口蹄疫抗體合格率達(dá)83.8%，豬繁殖與呼吸綜合征陽(yáng)性率為46.0%，豬圓環(huán)病毒2型感染陽(yáng)性率為40.0%。表明該豬場(chǎng)現(xiàn)行的豬瘟、口蹄疫免疫程序是可行的，而豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型感染免疫程序需要進(jìn)一步優(yōu)化。

關(guān)鍵詞：主要疫??；抗體監(jiān)測(cè)；免疫效果；規(guī)?；i場(chǎng)；豬

中圖分類(lèi)號(hào)： S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）10-0264-03

豬瘟（CSF）、口蹄疫（FMD）、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬圓環(huán)病毒2型感染（PCV-2）是目前養(yǎng)豬生產(chǎn)上非常嚴(yán)重的病毒性傳染病，這4種傳染病中的任何一種一旦發(fā)生，都會(huì)給豬場(chǎng)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，在養(yǎng)豬生產(chǎn)上必須做好CSF、FMD、PRRS、PCV-2這4種傳染病的防疫工作，而免疫接種是目前預(yù)防這4種傳染病最主要的防疫措施。但是，生產(chǎn)上的免疫效果受多種因素的影響，如免疫程序是否合理、疫苗的質(zhì)量及類(lèi)型的選擇是否合理、疫苗保存及運(yùn)輸?shù)臈l件是否符合要求、動(dòng)物的個(gè)體差異、飼養(yǎng)管理、動(dòng)物的健康狀況等，實(shí)際的免疫效果存在不確定性，生產(chǎn)上有必要進(jìn)行抗體水平監(jiān)測(cè)，以了解免疫效果，做好免疫接種工作。本研究應(yīng)用間接血凝試驗(yàn)方法檢測(cè)豬瘟和口蹄疫的抗體水平，用ELISA方法檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型感染的陽(yáng)性率，結(jié)合其免疫程序?qū)γ庖咝ЧM(jìn)行分析，以期為廣大養(yǎng)豬生產(chǎn)者做好疫病防控工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 豬瘟疫苗由中牧集團(tuán)成都藥械廠生產(chǎn)；口蹄疫O型合成肽疫苗由中牧實(shí)業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；豬繁殖與呼吸綜合征疫苗、豬圓環(huán)病毒2型疫苗均為購(gòu)自市場(chǎng)上的商品疫苗。

1.1.2 試劑 豬瘟、口蹄疫間接血凝試驗(yàn)診斷液購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所；豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢科前生物公司。

1.1.3 儀器設(shè)備 96孔110V型醫(yī)用血凝板、移液槍、振蕩器、水浴鍋、酶標(biāo)儀、5 mL 1次性注射器、碘酊棉球、酒精棉球、離心機(jī)等由廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院基礎(chǔ)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.4 血清樣本來(lái)源 所有血清樣本來(lái)源于廣西某500頭基礎(chǔ)母豬規(guī)?；i場(chǎng)，該豬場(chǎng)豬瘟、口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型感染等的免疫程序見(jiàn)表1。

1.1.5 血清制作 隨機(jī)抽取20頭育肥豬、20頭保育豬、20頭妊娠母豬、10頭哺乳母豬及其所哺乳仔豬（2頭/窩）的全血，育肥豬、保育豬和哺乳仔豬從前腔靜脈竇采全血，妊娠母豬和哺乳母豬從耳緣靜脈采全血，用離心機(jī)分離血清，備檢。

1.2 方法

1.2.1 抗體檢測(cè)方法 豬瘟、口蹄疫抗體水平采用間接血凝試驗(yàn)方法；豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型抗體水平采用Elisa方法；具體操作方法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。本次檢測(cè)豬瘟抗體和口蹄疫抗體最大稀釋度為1 ∶ 256。

1.2.2 結(jié)果判定 豬瘟間接血凝試驗(yàn)抗體效價(jià)小豬≥1 ∶ 16（4log2），母豬≥1 ∶ 64（6log2）為合格，口蹄疫O型抗體效價(jià)≥1 ∶ 128（7log2）為合格；豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型血清D630 nm值>0.42，判為陽(yáng)性，樣品D630 nm值介于038～0.42之間，判為可疑，樣品D630 nm值<0.38，判為陰性。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用對(duì)數(shù)法將原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為以2為底的對(duì)數(shù)的絕對(duì)值表示不同豬群的豬瘟、口蹄疫的抗體效價(jià)，采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果以“平均值+標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

2.1.1 哺乳母豬、哺乳仔豬、保育豬、育肥豬和妊娠母豬的豬瘟血清抗體效價(jià) 所檢80份血清，豬瘟抗體100%合格（表2）。

2.1.3 母豬、哺乳仔豬、保育豬、育肥豬的豬瘟血清抗體效價(jià)差異顯著性檢驗(yàn) 母豬與哺乳仔豬的豬瘟血清抗體效價(jià)差異不顯著；母豬與保育豬的豬瘟血清抗體效價(jià)差異極顯著；母豬與育肥豬的豬瘟血清抗體效價(jià)差異顯著；哺乳仔豬與保育豬的豬瘟血清抗體效價(jià)差異顯著；哺乳仔豬與育肥豬的豬瘟血清抗體效價(jià)差異不顯著；保育豬與育肥豬的豬瘟血清抗體效價(jià)差異不顯著；母豬與商品豬群（哺乳仔豬、保育豬、育肥豬）的豬瘟血清抗體效價(jià)差異顯著（表4）。

2.2 口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2.1 哺乳母豬、哺乳仔豬、保育豬、育肥豬和妊娠母豬的口蹄疫血清抗體效價(jià) 所檢80份血清，口蹄疫血清抗體838%合格（表5）。

2.2.2 血清中口蹄疫抗體效價(jià)分布 所檢血清口蹄疫抗體效價(jià)呈正態(tài)分布（表6）。

2.2.3 母豬、哺乳仔豬、保育豬、育肥豬的口蹄疫血清抗體效價(jià)差異顯著性檢驗(yàn) 母豬與哺乳仔豬的口蹄疫血清抗體效價(jià)差異極顯著；母豬與保育豬的口蹄疫血清抗體效價(jià)差異極顯著；母豬與育肥豬的口蹄疫血清抗體效價(jià)差異極顯著；哺乳仔豬與保育豬的口蹄疫血清抗體效價(jià)差異不顯著；哺乳仔豬與育肥豬的口蹄疫血清抗體效價(jià)差異極顯著；保育豬與育肥豬的口蹄疫血清抗體效價(jià)差異極顯著；母豬與商品豬群（哺乳仔豬、保育豬、育肥豬）的口蹄疫血清抗體效價(jià)差異顯著（表4）。

2.3 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)結(jié)果

豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表7。

3 討論與結(jié)論

從檢測(cè)結(jié)果看，該規(guī)模豬場(chǎng)所檢血清豬瘟抗體效價(jià)100%合格（小豬達(dá)到1 ∶ 16，母豬達(dá)到1 ∶ 64以上為免疫合格），口蹄疫抗體效價(jià)83.8%合格，豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽(yáng)性率為46.3%，豬圓環(huán)病毒抗體陽(yáng)性率為40%。結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)情況來(lái)看，該場(chǎng)豬群能很好地抵御豬瘟野毒株的侵襲，基本能抵御口蹄疫野毒株的侵襲，該豬場(chǎng)現(xiàn)行的豬瘟、口蹄疫免疫程序是切實(shí)可行的，而比較難抵御豬繁殖與呼吸綜合征野毒株和豬圓環(huán)病毒野毒株的侵襲，豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒感染免疫程序需要進(jìn)一步優(yōu)化。endprint

所檢80份血清，母豬與哺乳仔豬的豬瘟血清抗體效價(jià)差異不顯著，說(shuō)明哺乳仔豬能通過(guò)母乳有效地獲得豬瘟母源抗體，在哺乳期間不需要對(duì)哺乳仔豬進(jìn)行免疫接種，做好母豬的免疫接種即可。母豬與哺乳仔豬的口蹄疫血清抗體效價(jià)差異極顯著，說(shuō)明哺乳仔豬不能通過(guò)母乳有效地獲得口蹄疫母源抗體，哺乳仔豬受口蹄疫病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)很大，在疫情壓力較大的情況下應(yīng)考慮選擇應(yīng)激性較小的口蹄疫疫苗對(duì)哺乳仔豬進(jìn)行免疫接種，加強(qiáng)執(zhí)行其他的防疫措施，以提高哺乳仔豬的抵抗口蹄疫的能力。隨著時(shí)間的推移，哺乳仔豬體內(nèi)豬瘟和口蹄疫抗體水平都逐漸下降，在21～25日齡時(shí)，由于對(duì)哺乳仔豬進(jìn)行了豬瘟免疫接種而沒(méi)有進(jìn)行口蹄疫免疫接種，所以哺乳仔豬與保育豬的豬瘟血清抗體效價(jià)差異顯著，口蹄疫血清抗體效價(jià)差異不顯著。在70、120日齡對(duì)育肥豬進(jìn)行口蹄疫免疫接種，豬體內(nèi)產(chǎn)生口蹄疫抗體，所以保育豬與育肥豬的口蹄疫血清抗體效價(jià)差異極顯著。雖然在55～60日齡對(duì)保育豬進(jìn)行了豬瘟免疫接種，但保育豬與育肥豬的豬瘟血清抗體效價(jià)差異不顯著，這可能是緣于二者的豬瘟抗體都維持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的水平，本結(jié)果與何健海等報(bào)道的[1-3]一致。母豬與商品豬群（哺乳仔豬、保育豬、育肥豬）的豬瘟、口蹄疫抗體效價(jià)差異顯著，說(shuō)明經(jīng)過(guò)多次免疫接種，確實(shí)可以提高母豬的抗體水平。無(wú)論是豬瘟還是口蹄疫的抗體效價(jià)都呈正態(tài)分布。

檢測(cè)80份血清豬瘟抗體，育肥豬、母豬達(dá)到較高抗體水平，保育豬抗體滴度中等，可能和體內(nèi)存在某些免疫抑制因素有關(guān)。目前，慢性豬瘟在某些豬場(chǎng)還持續(xù)存在，帶毒母豬傳播給胎豬，先天帶毒的仔豬對(duì)疫苗產(chǎn)生免疫效果不理想，不表現(xiàn)明顯臨床癥狀卻成為持續(xù)傳染源。目前，影響豬瘟免疫效果的因素有：豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型感染、支原體肺炎和豬附紅細(xì)胞體病等；缺乏維生素或微量元素導(dǎo)致免疫系統(tǒng)發(fā)育不健全、某些藥物和霉菌毒素引起免疫抑制等；疫苗運(yùn)輸、保存和使用過(guò)程、稀釋液pH值是否符合要求等。

檢測(cè)80份血清口蹄疫抗體母豬達(dá)到較高水平，基本能抵御一般血清型野毒株的侵襲，但部分育肥豬和保育豬抗體滴度仍偏低，有待加強(qiáng)免疫，以便達(dá)到均衡水平。

檢測(cè)80份血清豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽(yáng)性率為463%，與韋顯凱等的調(diào)查結(jié)果[4]相近。根據(jù)王連想等調(diào)查研究結(jié)果，經(jīng)免疫接種的臨床健康豬場(chǎng)PRRS陽(yáng)性率應(yīng)達(dá)到7914%[5]，該豬場(chǎng)已經(jīng)免疫過(guò)豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗，但是陽(yáng)性率只有463%，明顯偏低，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)豬群進(jìn)行豬繁殖與呼吸綜合征的免疫接種工作。

檢測(cè)80份血清豬圓環(huán)病毒抗體陽(yáng)性率為40%，少部分樣品抗體滴度高，說(shuō)明該豬場(chǎng)感染豬圓環(huán)病毒的壓力較大。建議加強(qiáng)對(duì)豬群免疫豬圓環(huán)病毒。豬圓環(huán)病毒經(jīng)常是造成斷奶仔豬消瘦、發(fā)病的病因，盡管圓環(huán)商品苗不能殺滅體內(nèi)原有野毒，但可減少帶毒豬對(duì)外排毒，降低種豬群以及其他斷奶仔豬的感染壓力。近年來(lái)，圓環(huán)病毒引起與母豬繁殖障礙以及保育豬呼吸道綜合癥等有關(guān)的問(wèn)題逐漸被重視，包括弱仔、死胎、母豬返情、配不上以及繼發(fā)細(xì)菌性或病毒性拉稀等，建議豬場(chǎng)選擇優(yōu)質(zhì)毒株以及良好免疫佐劑生產(chǎn)的圓環(huán)病毒疫苗對(duì)全群豬免疫并至少半年檢查疫苗抗體動(dòng)態(tài)水平。

一般認(rèn)為，在豬繁殖與呼吸綜合征和豬圓環(huán)病毒感染的情況下，會(huì)導(dǎo)致豬免疫抑制甚至失敗，在本次所檢測(cè)的項(xiàng)目中，口蹄疫和豬瘟的抗體都達(dá)到了較高的水平，說(shuō)明通過(guò)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和保健等工作，是可以取得較好的防疫效果的。該規(guī)模豬場(chǎng)1年來(lái)沒(méi)有發(fā)生過(guò)豬瘟疫情，但受到豬口蹄疫的威脅，發(fā)生了嚴(yán)重的豬繁殖與呼吸綜合征和豬圓環(huán)病毒病。豬繁殖與呼吸綜合征的主要表現(xiàn)為妊娠母豬食欲廢絕，體溫41.5 ℃，呼吸困難，早產(chǎn)，產(chǎn)下死胎、木乃伊胎；產(chǎn)房哺乳仔豬體溫41 ℃，食欲不振，呼吸極度困難，耳朵發(fā)紺，被毛粗亂，下痢。采早產(chǎn)胎兒和發(fā)病哺乳仔豬的肺臟和淋巴結(jié)送到實(shí)驗(yàn)室采用PCR方法檢測(cè)，確定所發(fā)生的疫病為豬繁殖與呼吸綜合征。豬圓環(huán)病毒病的主要表現(xiàn)為仔豬斷奶后1～2周發(fā)病，病豬食欲下降，逐漸消瘦，被毛粗亂，下??；部分豬皮膚有紅色丘狀物，采病豬的淋巴結(jié)、腎臟和脾臟送到實(shí)驗(yàn)室采用PCR方法檢測(cè)，確定所發(fā)生的疫病為豬圓環(huán)病毒2型感染。該豬場(chǎng)豬群的健康狀況與本次抗體水平檢測(cè)結(jié)果相吻合。

目前，在豬防疫方面缺乏全國(guó)統(tǒng)一的免疫程序，有實(shí)力的豬場(chǎng)應(yīng)該定期抽取一定比例的血清樣品進(jìn)行抗體水平監(jiān)測(cè)[6]，評(píng)估免疫效果，不斷優(yōu)化免疫程序，制定一份適合本場(chǎng)的免疫程序，同時(shí)也要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和保健等工作，以期取得更好的防疫效果。小規(guī)模豬場(chǎng)或個(gè)體散養(yǎng)戶(hù)應(yīng)加強(qiáng)與大規(guī)模豬場(chǎng)的技術(shù)交流，盡可能優(yōu)化自己的防疫措施。

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