劉 錚，陳潔玲，梁小梅，汪振達(dá)

梅毒是皮膚性病科常見的性傳播疾病，發(fā)病率位于性傳播疾病的第2 位，且近年來呈現(xiàn)上升的趨勢[1]。梅毒患者經(jīng)過正規(guī)的驅(qū)梅之后，快速血漿反應(yīng)素試驗（RPR）多在2 年內(nèi)轉(zhuǎn)陰，但也有少數(shù)患者RPR 下降到某個滴度后保持固定，稱為血清固定[2]。近年來研究表明，梅毒血清固定患者多存在著Th1/Th2 失衡，細(xì)胞免疫受到抑制[3]。本研究對梅毒血清固定患者進(jìn)行血清白細(xì)胞介素（IL）-2、IL-12、IL-4、IL-10 水平檢測，以探討梅毒患者細(xì)胞免疫功能與血清固定的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2009 年1 月—2013 年1 月在深圳市第七人民醫(yī)院皮膚性病科門診治療的梅毒患者75 例作為研究對象，所有患者均經(jīng)梅毒螺旋體顆粒凝集試驗確診，其中35 例為梅毒血清固定患者（觀察組），男16 例，女19 例，平均年齡（30.1±6.5）歲（20 ～53 歲），一期、二期、潛伏梅毒例數(shù)分別為5 例、21 例和9 例，血清固定平均時間（3.7±1.4）年（2 ～9 年），RPR檢測滴度1∶1 者7 例，1∶2 者11 例，1∶4 者16 例，1∶8 者1 例。本組患者均接受驅(qū)梅治療，無相關(guān)的臨床癥狀，早期梅毒RPR 持續(xù)陽性＞1 年，晚期梅毒RPR 持續(xù)陽性＞2 年。40 例為治療后RPR 轉(zhuǎn)陰患者（對照1 組），男18 例，女22 例，年齡19 ～51 歲，平均（29.5±7.8）歲，一期、二期、潛伏梅毒例數(shù)分別為9 例、21 例和10 例，兩組患者一般資料相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）。兩組均抽取腦脊液進(jìn)行性病研究實驗室試驗（VDRL）排除神經(jīng)梅毒，并均可排除惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重感染性疾病及其他性傳播疾病。另外選擇同期40 名健康體檢者作為對照2 組，男22 例，女18 例，平均年齡（33.2±9.6）歲（2 ～58 歲），血清 RPR、梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）、人免疫缺陷病毒（HIV） 抗體檢測均為陰性。

1.2 檢測方法

所有研究對象均采集上午空腹靜脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行血清IL-2、IL-12、IL-4、IL-10 水平測定，試劑購自北京金橋生物制品公司。將待測血清、不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、對照血清置于相應(yīng)微孔，溫育1 h，各孔加入抗人IL 抗體 100 μl，37 ℃溫育1 h，洗板4 次，除空白孔外，每孔加入工作液100 μl，37 ℃溫育60 min；洗板 4 次；每孔加入底物50 μl， 避光溫育 25 min，然后每孔加入終止液50 μl，混勻后5 min 內(nèi)測量 A450值，根據(jù)所測A 值得出IL 濃度。采用流式細(xì)胞儀測定3 組自然殺傷（NK）細(xì)胞水平，將100 μl 靜脈血與 20 μl 相應(yīng)抗體混勻，避光溫育 20 min，加入500 μl 溶血素振蕩混勻， 室溫下避光反應(yīng)10 ～15 min， 完全溶血后， 加入 500 μl PBS 緩沖液， 振蕩混勻后， 采用美國Coulter 公司生產(chǎn)的EPILS-XL 型流式細(xì)胞儀檢測，結(jié)果以所占檢測細(xì)胞的百分率表示。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS17.0 統(tǒng)計軟件分析統(tǒng)計數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t 檢驗和方差分析，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組血清IL-2、IL-12 水平低于對照1 組和對照2 組，與對照1 組比較t=4.682、5.314，P=0.000、0.000，與對照2 組比較t=5.082、6.723，P=0.000、0.000，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。觀察組血清IL-4、IL-10 水平高于對照1 組和對照2 組，與對照1 組比較t=2.088、4.541，P=0.040、0.000，與 對 照2 組 比 較t=4.054、6.713，P=0.001、0.000，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。對照1 組和對照2 組血清IL-2、IL-12 水平比較t=0.274、0.578，P=0.785、0.119，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。血清IL-4、IL-10 水平對照1 組高于對照2 組，兩組比較t=2.053、2.197，P=0.043、0.031，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。觀察組和對照1 組NK 細(xì)胞所占百分率分別為（15.1±4.2）%和（16.5±4.4）%，兩組比較t=1.404，P=0.165，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，對照2 組NK 細(xì)胞所占百分率為（20.6±5.2）%，高于觀察組（t=4.992，P=0.000），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

近年來，我國梅毒的發(fā)病率逐年提高，驅(qū)梅治療后的血清固定現(xiàn)象越來越受到皮膚性病科醫(yī)師的重視。有文獻(xiàn)報道，一期、二期和潛伏梅毒血清固定發(fā)生率為3.8%、17.5%和40.5%[4]，且隨病程的延長而增加。由于機(jī)體免疫系統(tǒng)在梅毒螺旋體清除過程中發(fā)揮重要作用，越來越多的皮膚性病研究者將梅毒血清固定的研究聚焦到患者的免疫學(xué)特征上來[5]。

T 淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子在梅毒螺旋體的清除中發(fā)揮重要作用。T淋巴細(xì)胞可分為CD4+、CD8+兩類，CD4+T 淋巴細(xì)胞主要可分化為Th1、Th2 細(xì)胞，Th1細(xì)胞是介導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫的主要物質(zhì)，IL-2、IL-12和干擾素(IFN)-γ 等均為Th1 細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，其中IL-2 可增強(qiáng)CD4+T 淋巴細(xì)胞活性，并刺激NK細(xì)胞增生，增強(qiáng)其殺傷病原微生物的功能；IL-12 可促使T 淋巴細(xì)胞和NK 細(xì)胞增生，并使其活性增強(qiáng)，并對Th2 細(xì)胞分泌的IL-4 功能具有抑制作用，使機(jī)體的免疫反應(yīng)向Th1 型方向發(fā)展[6]。Th2 細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5、 IL-6、IL-10 等細(xì)胞因子，介導(dǎo)機(jī)體的體液免疫反應(yīng)[4]。IL-4 對活化的B 淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞有促進(jìn)增生的作用，IL-10 通過抑制IL-2、IL-12 和IFN-γ 的分泌，抑制機(jī)體的細(xì)胞免疫，促進(jìn)體液免疫。

本研究結(jié)果顯示，觀察組Th1 型細(xì)胞因子IL-2、IL-12 均顯著低于兩個對照組， Th2 型細(xì)胞因子IL-4、IL-10 均顯著高于兩個對照組（P ＜0.05），表明血清固定患者Th2 型細(xì)胞因子占據(jù)明顯優(yōu)勢，與蔡川川等[7]研究結(jié)果一致。由此筆者認(rèn)為，血清固定患者可能存在IL 水平的異常，Th2 細(xì)胞因子較Th1 型細(xì)胞因子占有一定優(yōu)勢。梅毒患者早期以細(xì)胞免疫為主，Th1 型細(xì)胞因子含量較高，隨著病程的延長，體液免疫被激活，抑制了Th1 介導(dǎo)的細(xì)胞免疫，Th1 型細(xì)胞因子含量過早降低，甚至消失，使部分梅毒螺旋體逃過細(xì)胞免疫，引起慢性感染，成為血清固定發(fā)生的重要原因[8]。NK 細(xì)胞不需要特殊抗體即可直接殺傷靶細(xì)胞，機(jī)體內(nèi)NK 細(xì)胞水平反應(yīng)了免疫功能。本研究顯示觀察組NK 細(xì)胞所占百分率低于對照2 組，支持梅毒血清固定患者免疫功能受損這一推測，其原因可能為梅毒血清固定患者血液中含有與免疫球蛋白碎片有關(guān)的免疫抑制因子，而這些免疫因子是導(dǎo)致機(jī)體NK 細(xì)胞活性降低的重要原因[6]。

表1 3組患者血清IL-2、IL-4、IL-10、IL-12水平比較 ±s，ng/L）

表1 3組患者血清IL-2、IL-4、IL-10、IL-12水平比較 ±s，ng/L）

注：與對照1組比較，aP＜0.05；與對照2組比較，bP＜0.05

組 別 例數(shù) IL-2 IL-4 IL-10 IL-12觀察組 35 381.7±108.9ab 315.1±92.3 ab 189.4±53.9 ab 21.7±8.4 ab對照1組 40 516.4±136.3 274.4±76.5b 135.6±48.7b 32.5±9.1對照2組 40 524.6±131.5 242.6±61.2 112.5±45.3 35.8±9.6 F值 5.637 8.915 9.546 4.319 P值 0.006 0.000 0.000 0.028

綜上所述，梅毒血清固定患者存在細(xì)胞免疫功能抑制，導(dǎo)致病原體難以徹底清除，可能是血清固定形成的原因之一。早期進(jìn)行Th1、Th2 細(xì)胞因子檢測，對存在細(xì)胞免疫抑制的患者進(jìn)行針對性治療，可調(diào)節(jié)Th1/ Th2 平衡，改善患者免疫狀態(tài)，有利于早期治愈。

[1] 應(yīng)作霖, 王豐. 梅毒患者血清固定臨床分析 [J]. 皮膚病與性病, 2012, 34(2):106,110.

[2] 段逸群, 張偉明. 梅毒“血清固定”及其應(yīng)對策略 [J]. 皮膚病與性病, 2012, 34(4):196-199.

[3] 李軍, 王林娜, 左亞剛, 等. 梅毒血清抵抗患者臨床分析及免疫功能研究 [J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2009, 89(12):813-816.

[4] 朱永蒙, 郝玉琴, 劉新華. 卡介菌多糖核酸對早期梅毒血清固定患者相關(guān)免疫指標(biāo)的影響及臨床療效分析研究 [J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志, 2013, 23(21):45-48.

[5] 趙玉磊, 蘇曉紅. 梅毒血清固定機(jī)制研究進(jìn)展 [J]. 實用皮膚病學(xué)雜志, 2014, 7(2):122-124.

[6] 謝海莉, 趙進(jìn), 李偉, 等. 梅毒血清固定患者外周血白細(xì)胞介素水平的檢測 [J]. 中國皮膚性病學(xué)雜志, 2013, 27(5):485-486,501.

[7] 蔡川川, 陳嶸祎, 李芳谷, 等. 潛伏梅毒患者及其性伴血清Th1/ Th2細(xì)胞因子變化 [J]. 廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2011, 29(6):605-607.

[8] 謝海莉, 趙進(jìn), 李偉, 等. 梅毒血清固定患者細(xì)胞免疫功能檢測分析[J]. 中國皮膚性病學(xué)雜志, 2013, 27(1):49-51.