·論著·

用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法測(cè)定尿囊素維E乳膏中維生素E的含量

陸松偉，虞慧華，陳方劍，宋洪杰*(第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部，上海200433)

[摘要]目的：建立測(cè)定尿囊素維E乳膏中維生素E含量的雙波長(zhǎng)紫外分光光度法。方法：采用紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)定維生素E的含量，測(cè)定波長(zhǎng)為285 nm，參比波長(zhǎng)為293.2 nm。結(jié)果：維生素E在31.96～95.88 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為100.80%，RSD為1.21% (n=9)。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、靈敏，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，對(duì)尿囊素維E乳膏質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的提高具有參考意義。

[關(guān)鍵詞]維生素E;尿囊素維E乳膏;含量測(cè)定；分光光度法，紫外線

[中圖分類號(hào)]R917[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

DOI：10.5428/pcar20150510

基金項(xiàng)目軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題-外用特色制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究(13ZJZ11-3)

作者簡(jiǎn)介陸松偉(男),主管藥師.E-mail:chinalsw2000@sina.com；虞慧華(男)，藥師. E-mail:yuhuihua81@126.com;兩人為共同第一作者

[收稿日期]2014-07-31

Determination of vitamin E in allantion vitamin E cream by dual wavelength UV-spectrophotometric method

LU SongWei, YU HuiHua, CHEN FangJian, SONG HongJie*(Department of Pharmacy, Changhai Hospital，Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)

ABSTRACT[]Objective: To establish a dual wavelength UV-spectrophotometric method for the determination of vitamin E in allantion vitamin E cream. Methods: The UV-visible spectrophotometer was used for content determination of vitamin E.The detection wavelength and reference wavelength were 285 nm and 293.2 nm,respectively.Results：The linear range of vitamin E was 31.96-95.88 μg/ml(r=0.999 9).The average recovery was 100.80%,RSD was 1.21%(n=9).Conclusion：The method was more accurate,sensitive,specific and reproducible.It could provide the reference for the improvement of the quality standards of allantion vitamin E cream.

[KEY WORDS]vitamin E;allantion vitamin E cream;content determination; spectrophotometry,ultraviolet

[Pharm Care Res，2015，15(5): 354-356]

*通信作者(Corresponding author)：宋洪杰，E-mail:h_jsong@126.com

尿囊素維E乳膏是第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部自制制劑，臨床主要用于皮膚干燥皸裂、鱗屑病及皮膚損傷的修復(fù)，其主要成分為尿囊素和維生素E。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅測(cè)定尿囊素的含量，對(duì)反映藥效的維生素E未建立質(zhì)控方法。本研究建立了雙波長(zhǎng)紫外分光光度法測(cè)定尿囊素維E乳膏中維生素E的含量，并采用HPLC法作為比較考察了結(jié)果的可靠性，為提高尿囊素維E乳膏的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1儀器和試藥

1.1儀器XS205DU十萬分之一電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；2550型紫外-可見分光光度計(jì)，LC-10ADVP高效液相色譜儀(包括LC-20AD泵、SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器、CBM-20A控制器和LC solution工作站，日本島津公司)；DL-720A 超聲波清洗器(上海之信儀器有限公司)。

1.2藥品和試劑尿囊素維E乳膏(批號(hào)140924、141015、141016,第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院制劑室自制)；維生素E對(duì)照品(含量97%，批號(hào)110405、130801，浙江醫(yī)藥股份有限公司)；無水乙醇為分析醇，水為蒸餾水。

2方法和結(jié)果

2.1溶液的配制(1)對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱取維生素E對(duì)照品(批號(hào)110405)0.319 6 g，置100 ml量瓶中，加無水乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為3.196 mg/ml的維生素E對(duì)照品儲(chǔ)備液。(2)供試品溶液：精密稱取尿囊素維E乳膏3.0 g(約相當(dāng)于維生素E 30 mg)，置燒杯中，加無水乙醇25 ml，置水浴上加熱，充分?jǐn)嚢?，使維生素E溶解，置冰浴中放冷后，濾過，濾液置100 ml量瓶中，同法提取3次，濾液并入量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，再精密量取濾液5 ml，置25 ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。(3)陰性對(duì)照溶液：精密稱取不含維生素E的尿囊素維E乳膏約3.0 g，置燒杯中，按供試品溶液的制備方法制備成陰性對(duì)照溶液。

2.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇分別取維生素E對(duì)照品溶液與陰性對(duì)照溶液于紫外分光光度計(jì)，以無水乙醇作為空白校正，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍掃描，結(jié)果見圖1。

圖1　尿囊素維E乳膏的紫外吸收光譜圖 Figure 1　UV absorption photogram of allantion vitamin E cream A：維生素E對(duì)照品溶液；B：陰性對(duì)照溶液； C：供試品溶液；1：285 nm；2:293.2 nm

由圖1可見，維生素E對(duì)照品在285 nm波長(zhǎng)處有紫外吸收峰，但陰性對(duì)照品存在一定的干擾，而對(duì)供試品溶液的掃描發(fā)現(xiàn)在293.2 nm波長(zhǎng)外的吸光度值與陰性對(duì)照在285 nm波長(zhǎng)處的吸光度(A)值相等。所以選定λ1=285 nm，λ2=293.2 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)，即△A=A1-A2。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取2.1(1)項(xiàng)下維生素E對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml，分別置100 ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度為31.96、47.94、63.92、79.9、95.88 μg/ml的維生素E對(duì)照品溶液。采用紫外-可見分光光度法在285 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A。以A為縱坐標(biāo)，濃度(c)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=0.004 3c-0.001 8(r=0.999 9)，線性范圍為31.96～95.88 μg/ml。

2.4回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取尿囊素維E乳膏陰性對(duì)照品9份，每份3.0 g，分別加入已知濃度的維生素E對(duì)照品適量，制備成相當(dāng)于標(biāo)示量80%、100%、120%的模擬樣品，按2.1(2)項(xiàng)下方法制備，分別在285 nm和293.2 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A值，兩者的差值帶入線性回歸方程計(jì)算含量，結(jié)果平均回收率為100.80%，RSD為1.2%(n=9)，具體見表1。

2.5精密度實(shí)驗(yàn)取63.92 μg/ml維生素E對(duì)照品溶液，重復(fù)測(cè)定5次，日內(nèi)精密度測(cè)定間隔時(shí)間為1 h，日間精密度為24 h，記錄A值，代入線性回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果對(duì)照品溶液的日內(nèi)RSD為0.27%，日間RSD為0.47%(n=5)，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液，分別在285 nm和293.2 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A，重復(fù)測(cè)定5次，每次測(cè)定間隔2 h，記錄A，兩者的差值代入線性回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果RSD為0.20%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1尿囊素維E乳膏中維生素E的回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Table 1Results of recovery tests of vitamin E

in allantion vitamin E cream

配制濃度(ρB/μg·ml-1)實(shí)測(cè)濃度(ρB/μg·ml-1)回收率(%)51.1451.89±0.48101.47±0.9463.9264.91±0.71101.55±1.1176.7076.23±0.6299.39±0.81

2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取同一批(批號(hào) 141015)尿囊素維E乳膏5份，每份約3.0 g，按2.1(2)項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在285 nm和293.2 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A，代入線性回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果測(cè)定RSD為0.26%(n=5)，表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.8樣品含量測(cè)定分別取3個(gè)批號(hào)的尿囊素維E乳膏約3.0 g，每個(gè)批號(hào)各取3份，精密稱定，按2.1(2)項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在285 nm和293.2 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A，代入線性回歸方程計(jì)算含量，并計(jì)算相當(dāng)于標(biāo)示量的百分比。結(jié)果批號(hào)為140924、141015、141016的尿囊素維E乳膏中維生素E的含量分別為(10.48±0.16)、(9.83±0.10)、(10.09±0.04) mg/g(n=3)，結(jié)果符合含量測(cè)定要求。

3用HPLC法驗(yàn)證測(cè)定方法的可靠性

3.1色譜條件[1]ACE-121-1546 C18色譜柱(150 mm×4.6mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水=95∶5，檢測(cè)波長(zhǎng)285 nm，流速1.0 ml/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μl。

3.2溶液的配制(1)對(duì)照品儲(chǔ)備液：按照2.1(1)項(xiàng)下方法制備濃度為3.160 mg/ml的維生素E對(duì)照品儲(chǔ)備液。(2)供試品溶液：精密稱取尿囊素維E乳膏約3.0 g，按照2.1(2)項(xiàng)下方法制備，濾液再用0.45 μm微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置25 ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，即得供試品溶液。

3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備(1)精密量取3.2(1)項(xiàng)下維生素E對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml，分別置50 ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，得到系列濃度為31.60、63.20、126.40、189.60、252.80 μg/ml的維生素E對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品系列溶液各20 μl，按照3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，濃度(c)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=5 018.1c-24 560，r=0.999 9。結(jié)果表明，維生素E在31.60～252.80 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。(2)精密量取3.2(1)項(xiàng)下維生素E對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 ml分別置50 ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，得到系列濃度為31.60、63.20、94.80、126.40、189.60 μg/ml的維生素E對(duì)照品溶液。采用紫外分光光度法在285 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A。以A為縱坐標(biāo)，濃度(c)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=0.004 5c-0.012 1，r=0.999 9。結(jié)果表明，維生素E在31.60～189.60 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.4樣品含量測(cè)定取3個(gè)批號(hào)(140924、141015、141016)的尿囊素維E乳膏，按3.2(2)項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按3.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算維生素E的含量分別為(10.54±0.06)、(9.74±0.52)、(9.93±0.26) mg/g(n=3)。按2.8項(xiàng)下方法測(cè)定A，計(jì)算維生素E的含量分別為(10.48±0.16)、(9.83±0.10)、(10.09±0.04) mg/g(n=3)，結(jié)果表明采用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法可以準(zhǔn)確地測(cè)定尿囊素維E乳膏中維生素E的含量。

4討論

4.1提取方法的確定維生素E測(cè)定的關(guān)鍵在于樣品中維生素E的提取，本研究采用無水乙醇熱提取，可使維生素E提取完全，再通過冰浴冷卻除去乳膏劑中的基質(zhì)，減少對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾。

4.2檢測(cè)方法的確定對(duì)于含有維生素E制劑的含量測(cè)定方法，經(jīng)過文獻(xiàn)檢索[2,3]和《中華人民共和國藥典》[4]的收載，主要采用HPLC法和GC法,類似制劑中也有HPLC法同時(shí)測(cè)定維生素E和尿囊素的報(bào)道。尿囊素溶于水，微溶于乙醇，而維生素E是脂溶性維生素，在無水乙醇中易溶，在水中不溶，兩種不同極性的藥品同時(shí)檢測(cè)，很難做到。本研究采用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法測(cè)定維生素E 的含量，最主要的原因是醫(yī)院制劑尿囊素維E乳膏產(chǎn)量少、批次多，如果采用HPLC法和GC法，時(shí)間長(zhǎng)，過程也十分繁瑣，而采用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法可以做到快速檢測(cè)。

4.3檢測(cè)波長(zhǎng)的確定根據(jù)處方的實(shí)際情況，在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)參考了本院自制制劑復(fù)方鋅維乳膏中維生素E的含量測(cè)定方法。參考《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅣA，通過測(cè)定一階導(dǎo)數(shù)光譜計(jì)算復(fù)方鋅維乳膏中維生素E的含量，但尿囊素維E乳膏陰性對(duì)照按照測(cè)定一階導(dǎo)數(shù)的方法存在一定的干擾，影響含量測(cè)定，而對(duì)維生素E的對(duì)照品在200～400 nm波長(zhǎng)范圍掃描時(shí)發(fā)現(xiàn)在285 nm波長(zhǎng)處有紫外吸收峰，但陰性對(duì)照存在一定的干擾，而對(duì)供試品溶液的掃描發(fā)現(xiàn)在293.2 nm波長(zhǎng)的A值與陰性對(duì)照在285 nm波長(zhǎng)處的A值相等。因此本研究采用簡(jiǎn)單實(shí)用的雙波長(zhǎng)紫外分光光度法，建立了維生素E 的含量測(cè)定方法。經(jīng)方法學(xué)論證，本方法準(zhǔn)確、靈敏，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可以快速檢測(cè)尿囊素維E乳膏中維生素E的含量，對(duì)尿囊素維E乳膏質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的提高具有參考意義。

【參考文獻(xiàn)】

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Chen FangJian,Lu SongWei,Song HongJie,etal.Determination of vitamin B6and vitamin E contents in Pearl vitamin E cream by HPLC method[J].Pharm Care Res,2015,15(3):201-204.In Chinese with English abstract.

[2]王玉，周肖龍，滿玉清，等.雙波長(zhǎng)紫外分光光度法測(cè)定復(fù)方氫醌乳膏中氫醌的含量[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2007,25(5)：332-333.

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[3]何玉川,張亞茹．高效液相色譜法測(cè)定維生素E乳中維生素E的含量[J]．中國當(dāng)代醫(yī)藥，2013,20(21):64-65．

He YuChuan,Zhang YaRu. Determination of vitamin E in vitamin E emulsion by HPLC[J]．China Mod Med,2013,20(21):64-65．In Chinese with English abstract.

[4]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典.2010年版 二部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：907.

State Pharmacopoeia Committee.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010 ed.Volume 2[S].Beijing：Chinese Medical Science Press,2010：907.In Chinese.

[修回日期]2015-07-05

[本文編輯]陽凌燕