·論著·

用Chiralpak AD-H手性色譜柱HPLC法拆分阿羅洛爾對映體

裘戈彬1,2，鄭樂藝1，呂權(quán)真1，張勁柏1，聞俊1，洪戰(zhàn)英1*

[1.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥物分析學(xué)教研室，上海市藥物(中藥)代謝產(chǎn)物研究重點實驗室，上海200433；2.解放軍73235部隊，浙江舟山 316000]

[摘要]目的：建立拆分阿羅洛爾手性對映體的手性固定相HPLC法。方法：采用纖維素直鏈淀粉類手性固定相Chiralpak AD-H色譜柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)，考察了流動相比例、流速、堿性添加劑等因素對阿羅洛爾手性對映體拆分效果的影響。結(jié)果：確定了最佳拆分條件：流動相為正己烷-乙醇-二乙胺-三乙胺=30∶70∶0.1∶0.1(V/V)，流速為0.4 ml/min，檢測波長為315 nm，柱溫為25 ℃，阿羅洛爾對映體拆分的分離度為3.033，對映體能夠得到良好的拆分。結(jié)論：該法操作簡便，可用于阿羅洛爾對映體的分離及質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞]阿羅洛爾；手性拆分；淀粉類手性固定相；色譜法，高效液相

[中圖分類號]R917[文獻標(biāo)志碼]A

DOI：10.5428/pcar20150509

基金項目第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新科研項目(2012年度)

作者簡介裘戈彬(男).E-mail: qgb_forever@163.com

[收稿日期]2014-10-01

Enantiomeric separation of arotinolol by Chiralpak AD-H chiral column HPLC method

QIU GeBin1,2,ZHENG LeYi1,Lü QuanZhen1,ZHANG JinBo1,WEN Jun1,HONG ZhanYing1*[1.Department of Pharmaceutical Analysis，School of Pharmacy，Second Military Medical University，Shanghai Key Laboratory for Pharmaceutical (Chinese Materia Medica) Metabolites Research, Shanghai 200433，China;2.73235 PLA Unit,Zhejiang Zhoushan 316000,China]

ABSTRACT[]Objective: To establish a chiral stationary phase HPLC method for the enantiomeric separation of arotinolol．Methods: An amylose chiral stationary phase Chiralpak AD-H column (250 mm×4.6 mm,5 μm) was used. Effects of the proportion of the mobile phase，flow rate and alkaline additives on the separation of arotinolol enantiomers were investigated. Results:The optimized chromatographic conditions were as follows:the mobile phase was hexane∶ethanol∶diethylamine∶triethylamine=30∶70∶0.1∶0.1(V/V) with a flow rate of 0.4 ml/min and the detection wavelength of 315 nm. The column temperature was set at 25 ℃．The arotinolol enantiomers could be well separated and the resolution was 3.033.Conclusion:This method is simple to handle and it could be used for the separation and quality control of arotinolol enantiomers.

[KEY WORDS]arotinolol；chiral separation；amylose chiral stationary phase;chromatography,high performance liquid

[Pharm Care Res，2015，15(5): 351-353]

*通信作者(Corresponding author): 洪戰(zhàn)英，E-mail:hongzhy001@163.com

阿羅洛爾(arotinolol，5-[2-3′-叔丁基氨基-2′-巰基丙基硫]-4-噻唑基)-2-噻吩甲酰胺)是由日本住友制藥株式會社研制的第4代β受體阻滯劑，兼有微弱的α1受體阻斷作用。在臨床上，阿羅洛爾通常用于高血壓、心絞痛、原發(fā)性震顫等的治療。從臨床效果來看，阿羅洛爾的降壓效果比拉貝洛爾好，與卡托普利和長效硝苯地平療效相近。在減慢心率方面，阿羅洛爾比拉貝洛爾、卡維地洛要明顯，與美托洛爾相近[1-3]。現(xiàn)在臨床上使用的阿羅洛爾是外消旋體，據(jù)文獻報道，阿羅洛爾S-(+)對映體的活性要高于R-(-)對映體[4]。光學(xué)異構(gòu)體結(jié)構(gòu)的差異往往會影響藥物的分布、代謝以及與靶蛋白的結(jié)合，因此對映體的拆分對于進一步研究其藥理作用和減少藥物副作用具有重要意義。

目前，對外消旋體化合物拆分的主要方法有機械拆分法、晶體接種拆分法、生物拆分法、化學(xué)拆分法以及色譜拆分法。近年來隨著研究的不斷深入，色譜技術(shù)在拆分藥物對映體方面有了極為迅速的發(fā)展，且已成為最有效的拆分法。本研究采用直鏈淀粉類手性固定相(Chiralpak AD-H柱)[5，6]，通過調(diào)整流動相、流速等條件，使阿羅洛爾對映體達到了基線分離。

1儀器和試藥

島津LC-10AT高效液相色譜儀(日本島津公司)；Chiralpak AD-H色譜柱(日本Daicel公司)；正己烷、異丙醇、乙醇、甲醇均為色譜純(Dikma公司)、二乙胺和三乙胺為分析純(國藥集團化學(xué)試劑有限公司);鹽酸阿羅洛爾消旋體對照品(含量99.5%，Dainippon Sumitomo Pharma Co.Ltd)。阿羅洛爾單個對映體由第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥物分析學(xué)教研室制備，HPLC測定純度>98.0%。

2方法

2.1色譜條件色譜柱：Chiralpak AD-H柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為正己烷∶乙醇∶二乙胺∶三乙胺=30∶70∶0.1∶0.1(V/V)，流速為0.4 ml/min，柱溫：25 ℃，檢測波長：315 nm，進樣量：20 μl。

2.2溶液的配制精密稱取鹽酸阿羅洛爾消旋體對照品10 mg，用甲醇溶解并定容至100 ml，得到濃度為0.1 mg/ml的鹽酸阿羅洛爾溶液。

3結(jié)果和討論

3.1流動相對分離度的影響本研究考察了正己烷-異丙醇、正己烷-乙醇兩個流動相體系。由于在不加入堿性添加劑的情況下，阿羅洛爾對映體無法分開，實驗過程中，加入了0.1%二乙胺，在流速0.4 ml/min的條件下，探討流動相種類及比例對對映體分離的影響。在正己烷∶異丙醇=65∶35的體系中，阿羅洛爾保留時間為31.032 min，保留時間過長，因此選擇更換極性更強的乙醇作為流動相添加劑。作者考察了正己烷、乙醇的比例對對映體分離的影響，結(jié)果見表1。

表 1　流動相比例、流速、堿性添加劑對

由表1可見，流動相中乙醇的比例對阿羅洛爾的保留時間有一定的影響，隨著乙醇比例的增加，流動相極性變強，保留時間變短，分離度有所下降。這可能是因為隨著乙醇比例的增加，它與對映體競爭結(jié)合手性固定相位點的能力增加，導(dǎo)致分離度降低。因此，綜合考慮分離度和保留時間兩個因素后，選擇正己烷∶乙醇=30∶70為最佳流動相比例。

3.2流速對分離度的影響本研究分別考察了流速為0.2、0.3、0.4 ml/min時，阿羅洛爾對映體的拆分效果，結(jié)果見表1。由表1可見，降低流速并沒有明顯增加阿羅洛爾的分離度，但大大增加了阿羅洛爾的保留時間。因此，綜合考慮分離結(jié)果和保留時間，最終選擇0.4 ml/min的流速。

3.3堿性添加劑對分離度的影響在流動相中添加適量的二乙胺，可抑制固定相擔(dān)體表面殘存的硅羥基的非立體選擇性吸附，從而增強其手性識別能力。本研究考察了流動相中二乙胺的添加量對分離度的影響。流動相中不加入二乙胺時，兩對映體無法分離、峰形較差，加入二乙胺后峰形較好，二乙胺添加量為0.1%、0.2%、0.3% 時，阿羅洛爾兩對映體的分離度、保留因子以及選擇因子的變化不大，結(jié)果見表1。改變堿性添加劑的種類，將二乙胺更換成三乙胺后，分離效果沒有明顯改善，保留時間、分離度與添加二乙胺時差異不大，但都無法做到基線分離。實驗中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流動相中同時添加0.1%二乙胺和0.1%三乙胺時，雖然分離度沒有明顯增加，但阿羅洛爾達到了基線分離。

3.4手性分離重復(fù)性實驗采用優(yōu)化后的色譜條件，重復(fù)進樣6次，考察分離的重復(fù)性。結(jié)果表明，對映體1和2保留時間的RSD分別是0.55%和0.64%，峰面積的RSD分別是0.70%和0.44%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

4小結(jié)

本研究采用Chiralpak AD-H手性色譜柱，在正相色譜分離條件下成功地拆分了阿羅洛爾對映體，分離度達3.033，并確定了對映體的出峰順序。該方法簡便、快速，為阿羅洛爾對映體的進一步研究提供了有效的分離手段。

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[修回日期]2015-07-23

[本文編輯]陽凌燕