于青海 （山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟(jì)南 250000）

一起豬高致病性藍(lán)耳病的病例報(bào)告

于青海 （山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟(jì)南 250000）

豬高致病性藍(lán)耳病又稱豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)，是以母豬流產(chǎn)及仔豬呼吸系統(tǒng)障礙為主要病征的傳染病，病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)。該病毒傳染性強(qiáng)，而且感染機(jī)體后致免疫抑制及各種并發(fā)癥，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大危害和經(jīng)濟(jì)損失。本研究通過山東某豬場送檢病料，通過臨床癥狀、剖檢變化及實(shí)驗(yàn)室診斷，經(jīng)PCR病原學(xué)鑒定確定是豬藍(lán)耳病。

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的，主要以引起母豬發(fā)熱、厭食和流產(chǎn)、早產(chǎn)、木乃伊胎及弱仔等繁殖障礙及仔豬和生長豬出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)疾病和高度死亡率為特征的一種高度接觸性傳染病。該病在臨床上還表現(xiàn)為耳部皮膚發(fā)紺，因此又被稱為“藍(lán)耳病”。除此之外，臨床上還表現(xiàn)在部分康復(fù)母豬發(fā)情不典型，以及屢配不孕等癥狀。該病于1987年首次發(fā)生在美國的北卡羅來納、衣阿華等州的豬群中，當(dāng)時(shí)被稱為“豬神秘病”，很快該病廣泛流行于歐洲、美洲等養(yǎng)豬國家和地區(qū)，亞洲的日本、韓國、菲律賓、中國和中國臺(tái)灣省亦相繼報(bào)道了該病。PRRSV具有嗜巨噬細(xì)胞性、持續(xù)感染性以及抗體依賴性增強(qiáng)作用等特征。根據(jù)資料顯示，不同PRRSV毒株在毒力性、抗原性以及遺傳性方面均有很大的差異。根據(jù)基因序列以及抗原性差異，將PRRSV分為兩種獨(dú)特的基因型，LV是在歐洲分離的大部分歐洲株原型(European, I型)；而在北美洲用建立的細(xì)胞株分離到類似的病毒，它們稱為VR-2332，VR-2332是北美洲大多數(shù)PRRSV原型(North American，Ⅱ型)。在核酸水平，這兩種基因型僅有約60%的同源性，但是，在臨床上都引起相似的癥狀。1991年，荷蘭學(xué)者Wensvoort等從Lelystad 鎮(zhèn)的豬肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)首次分離到該病病原，稱之為Lelystad病毒(Lelystad virus, LV)。 1992年，美國也分離到該病的病原體，稱之為豬不育與呼吸綜合征病毒(SIRSV)。1992年，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)正式將該病毒命名為豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)。并將該病列為B類傳染病，但是近年來該病給養(yǎng)豬業(yè)帶來的巨大損失已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了某些A類傳染病。我國于1996年，由郭寶清首次在國內(nèi)某豬場分離到了PRRSV，并命名為CH-1a株。2006年下半年，我國南方地區(qū)爆發(fā)了“無名高熱”疫情。以高熱、厭食、嗜睡、嘔吐、拉稀、便秘、呼吸困難咳嗽及全身皮膚發(fā)紅為主要臨床癥狀的急性傳染性疾病，任何年齡段的豬都可發(fā)病。最后確診結(jié)果表明，高熱病的主要致病原為高致病性PRRSV(Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus，HP-PRRSV。到目前為止，在我國境內(nèi)大多數(shù)省份均有PRRS疫情出現(xiàn)過。

初次發(fā)生時(shí)，臨床表現(xiàn)一般比較嚴(yán)重。一次流行過后，通?？赡苻D(zhuǎn)入亞臨床感染或持續(xù)感染狀態(tài)，隨后呈地方流行性發(fā)生。常與細(xì)菌、支原體、圓環(huán)病毒、豬瘟病毒、偽狂犬病毒、豬流感病毒、豬呼吸道冠狀病毒等混合感染使臨床表現(xiàn)形式復(fù)雜化。盡管世界各養(yǎng)豬大國對(duì)PRRS給予了足夠的重視，但是目前為止人們對(duì)PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白及非結(jié)構(gòu)蛋白的功能、病毒的致病機(jī)制、病毒的持續(xù)感染機(jī)制、機(jī)體對(duì)病毒的免疫機(jī)制等缺乏深入的認(rèn)識(shí)而難于防治，而且一旦豬場發(fā)生PRRS后，需要花很大的費(fèi)用和時(shí)間才能凈群，所以目前PRRS還是威脅各國豬業(yè)的主要疾病之一。

1 發(fā)病情況

山東省某豬場自2015年5月上旬開始，豬群中陸續(xù)有病豬出現(xiàn)，病豬體溫在40.0～40.5℃之間，除發(fā)熱外，別無其他癥狀，生豬飲食正常，精神尚可。該場獸醫(yī)認(rèn)為積熱所致，并無大礙，只在飼料中添加助消化藥。至5月20日上午，飼養(yǎng)員喂豬時(shí)發(fā)現(xiàn)38頭2月齡的豬發(fā)病，病豬躺臥在角落，精神不振，不進(jìn)食，結(jié)膜充血，呼吸急促，，大便十硬，測(cè)量體溫高達(dá)41.5℃。該場獸醫(yī)憑經(jīng)驗(yàn)診斷為豬傳染性胸膜肺炎，先后使用青霉素、鏈霉素、排疫肽等藥物，但不能退其熱，并且癥狀日益加重。至22日上午發(fā)現(xiàn)14頭生豬死亡。

2 臨床癥狀

臨診檢查發(fā)現(xiàn)病豬精神沉郁，食欲不振或廢絕，口渴但不欲飲．部分病豬出現(xiàn)后軀無力、不能站立或共濟(jì)失調(diào)等神經(jīng)癥狀，呼吸用難、喘氣，嚴(yán)重出現(xiàn)腹式呼吸，吸頻率在35～40次/min．脈搏90～l20次/min，體溫在4l～42.5℃之間．皮膚干燥發(fā)紅變紫，少數(shù)毛孔有出血點(diǎn)．尤其以腹下、四肢末梢和耳根等處皮膚更明顯，斑塊呈紫紅色，手壓不褪色，眼睛發(fā)紅，分泌物增多，呈膠黃狀，甚至出現(xiàn)結(jié)膜炎癥狀，無尿或少尿．尿色深黃，糞便硬，病期較長者體型消瘦，被毛粗亂，出現(xiàn)貧血癥狀。

3 剖檢變化

主要病變?yōu)閺浡蚤g質(zhì)性肺炎，肺腫大。間質(zhì)增寬，個(gè)別病例肺臟體積縮小。表面有散在隆起的橡皮狀硬塊，肺臟表面有點(diǎn)狀出血或瘀血，氣管內(nèi)有泡沫狀分泌物，胸腔及腹腔有渾濁的黃色積液，全身淋巴結(jié)旱不同程度的腫大或水腫，淋巴結(jié)顏色暗紫，切面呈大理石樣出血，特別以腹股溝淋巴結(jié)和肺門淋巴結(jié)尤為明顯，會(huì)咽部嚴(yán)重充血。脾臟腫大，邊緣有紫黑色的壞死和梗死。腎臟腫大，顏色變深，呈褐色或土黃色，質(zhì)地較脆，有針尖大出血點(diǎn)或瘀血現(xiàn)象。胃、大腸、小腸發(fā)現(xiàn)仃面積大小不一的潰瘍?cè)罨虺鲅c(diǎn)。肝臟腫脹，呈土黃色，上面有淺灰色壞死灶或潰瘍點(diǎn)。

圖1 PRRS病例肺臟病理變化A．間質(zhì)性肺炎,肺臟心、尖葉實(shí)變 B.肺臟大量出血點(diǎn) C.肺臟氣管和支氣管中大量粘液

4 組織學(xué)檢查

病理組織學(xué)技術(shù)是病理解剖學(xué)中最基礎(chǔ)、最重要的研究手段之一，包括病理切片技術(shù)和顯微鏡下的識(shí)片。

4.1 常規(guī)石蠟切片器材

切片機(jī)、切片刀、磨刀具、熔蠟及包埋工具。

4.2 石蠟切片方法

4.2.1 取材 采集大小0.5×0.5×0.5cm3的組織塊。

4.2.2 固定 采集的組織塊立即投入固定液中，常用的固定液是10%中性福爾馬林，固定24h即可。

4.2.3 脫水 已固定好的組織塊進(jìn)行適當(dāng)修整后先經(jīng)流水沖水12～14h，然后用梯度酒精使組織塊充分脫水，脫水常用的酒精梯度和所需時(shí)間是：70%酒精(過夜)→80%酒精(2h)→95%酒精I(xiàn)(30min)→95%酒精Ⅱ(30min)→100%酒精I(xiàn)(20min)→100%酒精Ⅱ(20min)。

4.2.4 透明 脫水的組織塊需用二甲苯透明，其目的在于將組織塊中的無水酒精置換出來，為浸蠟做準(zhǔn)備。透明分兩次進(jìn)行，在二甲苯Ⅰ中停留10min，二甲苯Ⅱ中停留10min。

4.2.5 浸蠟 將透明好的組織塊浸入石蠟內(nèi)(已熔化的石蠟分別裝在2～3個(gè)蠟杯中)，每個(gè)蠟杯中停留時(shí)間約為30min。以上步驟均須在石蠟熔化狀態(tài)下進(jìn)行。

4.2.6 包埋 將浸好石蠟的組織塊放入盛有熔化石蠟的包埋框內(nèi)，使組織塊埋于石蠟中。待蠟塊冷卻后進(jìn)行適當(dāng)修整，并將其粘附與臺(tái)木上。

4.2.7 切片 將制成的組織蠟塊用切片機(jī)3um切成薄片。4.2.8 展片和貼片 將切下的切片用于毛筆托起放入展片槽內(nèi)的水面，讓其自然伸展(水溫要求40～45℃，溫度過低不易于伸展，過高則可將切片熔化)。切片展平，取一潔凈載玻片在切片附近垂直插入水中，緩緩上提，切片可自動(dòng)貼附于載玻片上，然后將其置溫箱中烘干。

4.2.9 脫蠟、進(jìn)水、染色及封藏 組織切片→二甲苯Ⅰ(10min)→二甲苯Ⅱ(10min)→無水酒精(2min)→90%酒精(2min)→80%酒精(2min)→70%酒精(2min)→蒸餾水(3min)→蘇木素染液(5min)→常水沖洗至不脫色為止→1%鹽酸酒精分化(迅速)→自來水藍(lán)化(15min)→85%酒精(迅速)→1%伊紅染液(迅速)→95%酒精I(xiàn)(迅速)→95%酒精Ⅱ(2min)→無水酒精I(xiàn)(2min)→無水酒精Ⅱ(2min)→二甲苯Ⅰ(5min)→二甲苯Ⅱ(5min)→滴加中性樹膠→蓋上玻片→鏡檢。

4.3 鏡檢結(jié)果

（1）肺臟病程稍短者，肺泡壁增厚，肺泡內(nèi)無炎性分泌物病，葉間靜脈和肺泡壁毛細(xì)血管內(nèi)充滿紅細(xì)胞。病程加長，病變也越嚴(yán)重，肺泡壁明顯增寬，肺泡壁及支氣管周圍的間質(zhì)中有大量的炎性細(xì)胞浸潤，且肺泡腔內(nèi)有大量脫落的上皮細(xì)胞和炎性細(xì)胞。（2）淋巴結(jié)皮質(zhì)內(nèi)淋巴小結(jié)變性壞死，固有結(jié)構(gòu)遭受破壞，淋巴結(jié)皮髓質(zhì)界限不清楚，細(xì)胞排列松散，靠近被膜的皮質(zhì)區(qū)組織間大量紅細(xì)胞蓄積。髓質(zhì)內(nèi)毛細(xì)血管淤血充血。（3）脾臟小梁尚可分辨，脾小體輪廓不清，但淋巴細(xì)胞和網(wǎng)狀細(xì)胞崩解、碎裂，鞘動(dòng)脈上皮細(xì)胞變性壞死，脾索細(xì)胞腫脹、變性、壞死、崩解，脾臟中可見大量紅細(xì)胞，其中一頭發(fā)病死亡豬的脾臟內(nèi)可見淋巴小結(jié)中心壞死，巨噬細(xì)胞和大量網(wǎng)狀細(xì)胞增生。（4）肝臟肝細(xì)胞顆粒變性，細(xì)胞核濃縮，肝索排列紊亂，中央靜脈和肝竇狀隙擴(kuò)張可見大量紅細(xì)胞、少量淋巴細(xì)胞。（5）腎臟皮質(zhì)和髓質(zhì)充血、出血，腎小球毛細(xì)血管充血，腎小球擴(kuò)張，腎小球周圍間質(zhì)血管充血，腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生水泡變性，不同程度壞死脫落。（6）腸道顯微鏡下可見黏膜上皮細(xì)胞變性，壞死，甚至脫落進(jìn)腸腔。黏膜層有少量紅細(xì)胞，黏膜下層毛細(xì)血管充血，少量淋巴細(xì)胞滲出。（7）大腦表現(xiàn)為非化膿性腦炎的病變，神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，血管內(nèi)大量紅細(xì)胞蓄積，血管周圍2～3層淋巴細(xì)胞環(huán)繞呈現(xiàn)袖套現(xiàn)象，膠質(zhì)細(xì)胞增生。（8）心肌眼觀無明顯病變，顯微鏡下可見心肌纖維顆粒變性。

圖2 PRRS病例肺、腦病理變化A．間質(zhì)性肺炎 B．腦袖套現(xiàn)象

5 病原學(xué)檢測(cè)

無菌采集病豬腦、淋巴結(jié)、肺、血清各5份，經(jīng)豬藍(lán)耳病病毒RT—PCR ORF5基因擴(kuò)增檢測(cè)均為陽性(PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠板電泳，在紫外燈下觀察，結(jié)果為：在818 pb處出現(xiàn)亮帶，并與Mark和陽性對(duì)照亮帶相符合)。

圖3 豬藍(lán)耳病毒基因擴(kuò)增結(jié)果PRRSV ORF5 RT-PCR 產(chǎn)物 1-PRRSV ORF5 RT-PCR 產(chǎn)物 2-陽性對(duì)照M-4500bp的Mark

根據(jù)臨床癥狀、剖檢變化和實(shí)驗(yàn)室診斷，確診該豬場發(fā)生的疫病為豬藍(lán)耳病。

6 防治措施

（1）對(duì)豬舍和用具用氯制劑、甲醛等消毒劑進(jìn)行徹底消毒，及時(shí)清理病死豬、死胎及胎衣，清除豬舍內(nèi)外廢棄物。（2）對(duì)發(fā)病豬立即隔離，果斷淘汰無治療價(jià)值的病豬，做無害化處理，以預(yù)防和控制本病的蔓延。（3）對(duì)沒有臨床癥狀的豬采用藍(lán)耳病活疫苗進(jìn)行緊急免疫，根據(jù)豬只大小，分別使用不同劑量。免疫結(jié)果表明該疫苗免疫效果好，保護(hù)率高。（4）對(duì)處于發(fā)熱期的病豬肌肉注射退熱藥，同時(shí)應(yīng)用抗菌消炎、抗病毒藥物，并結(jié)合補(bǔ)液胃管投藥等多種治療方法。

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