周銘文 王和偉 葉繼丹，2*

(1.集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廈門(mén)市飼料檢測(cè)與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廈門(mén) 361021;2.農(nóng)業(yè)部東海海水健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廈門(mén) 361021)

?；撬崾且环Nβ含硫氨基酸，雖不參與蛋白質(zhì)的合成，但在動(dòng)物的滲透壓調(diào)節(jié)、神經(jīng)遞質(zhì)釋放、抗氧化等生理代謝中起著重要的作用［1-2］。由于魚(yú)類(lèi)?；撬岷铣傻年P(guān)鍵酶的活性較弱［3］，特別是仔稚魚(yú)期自身幾乎不能合成?；撬幔?］，因此，牛磺酸被認(rèn)為是魚(yú)類(lèi)的一種條件性必需氨基酸，為仔稚魚(yú)生長(zhǎng)發(fā)育所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)［5］。飼料中添加?；撬峥梢悦黠@促進(jìn) 魚(yú)(Seriola quinqueradiata)［6］、牙 鲆 (Paralichthys olivaceus)［7］和 真 鯛(Pagrus major)［8］的生長(zhǎng)，但當(dāng)飼料中缺乏?；撬釙r(shí)真鯛出現(xiàn)綠肝綜合征［9］， 魚(yú)發(fā)生貧血［10］。不同魚(yú)類(lèi)合成牛磺酸的能力也存在差異［4］，即使同一種魚(yú)類(lèi)其不同生長(zhǎng)階段牛磺酸合成能力亦不同［3］。研究表明，在動(dòng)物體內(nèi)?；撬崾且杂坞x氨基酸的形式存在，飼料中牛磺酸含量的高低直接影響大西洋鮭(Salmo salar)［11］和真鯛［12］組織中游離氨基酸的含量。迄今為止，飼料中?；撬岷颗c斜帶石斑魚(yú)(Epinephelus coioides)生長(zhǎng)和組織游離氨基酸含量關(guān)系的研究仍未見(jiàn)報(bào)道，為此，本試驗(yàn)研究了飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)生長(zhǎng)性能、體成分和組織游離氨基酸含量的影響，旨在探討飼料中?；撬岷颗c斜帶石斑魚(yú)不同組織牛磺酸沉積和游離氨基酸含量之間的關(guān)系，確定斜帶石斑魚(yú)對(duì)飼料中牛磺酸的適宜需要量，為斜帶石斑魚(yú)飼料的配制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 飼料配制

以酪蛋白和明膠為蛋白質(zhì)源，設(shè)計(jì)1個(gè)低?；撬岷康男睅唪~(yú)飼料配方，配制成基礎(chǔ)飼料，在基礎(chǔ)飼料中分別添加 0、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%的?；撬?，配制成5種試驗(yàn)飼料，并分別記為D1(對(duì)照)、D2、D3、D4和 D5組。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。飼料原料粉碎過(guò)80目篩網(wǎng)，將所有原料加水混勻后制成粒徑為2.5 mm的顆粒飼料，經(jīng)自然風(fēng)干后于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(air-dry basis) %

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用斜帶石斑魚(yú)幼魚(yú)購(gòu)自廈門(mén)當(dāng)?shù)匾患宜a(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)，運(yùn)至集美大學(xué)養(yǎng)殖基地后放入3個(gè)1 000 L的循環(huán)桶馴養(yǎng)15 d，以適應(yīng)試驗(yàn)飼料和養(yǎng)殖條件。馴養(yǎng)結(jié)束后，選取規(guī)格一致、平均體重(19.14±0.06)g 的斜帶石斑魚(yú)，隨機(jī)放入 15 個(gè)有循環(huán)水的水族箱(有效體積120 L)中，每箱放養(yǎng)20尾魚(yú)，每3個(gè)水族箱隨機(jī)作為1個(gè)飼料組，投喂1種試驗(yàn)飼料。飼養(yǎng)試驗(yàn)進(jìn)行56 d，期間，每天飽食投喂2次(08:30和18:30)，每日記錄投喂量，投喂0.5 h后吸出殘餌，烘干稱(chēng)重，計(jì)算攝食量，同時(shí)排污，排出的水量用沙濾的海水補(bǔ)足。每天觀察試驗(yàn)魚(yú)活動(dòng)情況，養(yǎng)殖試驗(yàn)期間水體溫度為(28±2)℃，溶解氧濃度(5.50±0.85)mg/L，硝酸鹽氮濃度(0.24±0.12)mg/L。

1.3 樣品采集

在試驗(yàn)魚(yú)分組前，隨機(jī)選取10尾魚(yú)作為初始樣品用于全魚(yú)體成分分析。飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，稱(chēng)取每箱魚(yú)總重。從每箱中隨機(jī)取3尾魚(yú)作為全魚(yú)樣品，儲(chǔ)存于-20℃冰箱中待測(cè)。再?gòu)拿肯渲须S機(jī)取5尾魚(yú)，丁香酚麻醉，逐尾采血，采集的血液樣品放置在4℃冰箱中過(guò)夜，第2天取出，用離心機(jī)在10 000 r/min下離心10 min，收集血清。采血后將魚(yú)解剖，摘取內(nèi)臟，并記錄每尾魚(yú)的體長(zhǎng)、體重、內(nèi)臟重和肝臟重。血清和肝臟放入凍存管置于-80℃冰箱中待測(cè)。

1.4 樣品測(cè)定

1.4.1 常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定

水分含量的測(cè)定采用105℃恒溫干燥法。粗蛋白質(zhì)含量的測(cè)定采用凱氏定氮法，用Kjeltec-8400型自動(dòng)凱氏定氮儀進(jìn)行測(cè)定。粗脂肪含量的測(cè)定采用索氏提取法。粗灰分含量的測(cè)定采用馬弗爐(550℃)灼燒法。

1.4.2 ?；撬岷康臏y(cè)定

測(cè)定血清?；撬岷繒r(shí)，先在每毫升血清中加入4%磺基水楊酸1 mL，混勻后15 000 r/min離心15 min，取上清液用氨基酸自動(dòng)分析儀(日立L-8900型)測(cè)定。?；撬釡y(cè)定條件:緩沖液流速為0.4 mL/min，衍生試劑流速為 0.35 mL/min;通道1檢測(cè)波長(zhǎng)為570 nm，通道2檢測(cè)波長(zhǎng)為440 nm;分離柱填料為3μm磺酸型陽(yáng)離子樹(shù)脂，分離柱溫度為 57.0 ℃，反應(yīng)柱溫度為(135.0±0.1)℃。

測(cè)定組織和飼料中?；撬岷繒r(shí)，先準(zhǔn)確稱(chēng)取1～2 g(精確至0.000 2 g)樣品放入10 mL離心管中，加入4%磺基水楊酸溶液約4 mL，超聲波儀超聲勻質(zhì)5 min后，于15 000 r/min離心15 min，將上清液全部轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，沉淀物再用上述方法提取 1次，合并上清液，混勻，用0.02 mol/L鹽酸溶液定容。溶液經(jīng) 0.45μm 濾膜過(guò)濾，濾液上機(jī)測(cè)定牛磺酸含量。

1.4.3 游離氨基酸含量的測(cè)定

測(cè)定組織中的游離氨基酸含量時(shí)，對(duì)樣品的處理方法與測(cè)定?；撬岷繒r(shí)的樣品處理方法相同。在使用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定時(shí)，用混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液調(diào)整儀器操作參數(shù)和洗脫用緩沖液的轉(zhuǎn)換時(shí)間，使各氨基酸達(dá)到最佳分離?；旌习被針?biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)樣品放入進(jìn)樣盤(pán)中，按照日立L-8900型氨基酸自動(dòng)分析儀的操作程序進(jìn)行分析測(cè)定。

1.5 計(jì)算公式

增重率(WGR，%)=100×(末重-初重)/初重;攝食率(FIR，%)=100×總攝食量/［(初重+末重)/2］/飼喂天數(shù);

飼料效率(FE)=(末重-初重)/總攝食量;

肝體指數(shù)(HSI，%)=100×肝臟重/體重;

臟體指數(shù)(VSI，%)=100×內(nèi)臟重/體重;

肥滿度(CF)=100×體重/體長(zhǎng)3;

?；撬岜Ａ袈?%)=100×(試驗(yàn)魚(yú)組織終末?；撬岷?試驗(yàn)魚(yú)組織初始牛磺酸含量)/試驗(yàn)飼料?；撬岷?。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 13.0分析軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，若存在顯著差異時(shí)，則采用Student-Newman-Keuls法進(jìn)行多重比較，顯著性差異水平為P＜0.05。將各指標(biāo)數(shù)據(jù)值與飼料?；撬岷窟M(jìn)行擬合，建立各指標(biāo)與飼料?；撬岷康南嚓P(guān)關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，各?；撬崽砑咏M試驗(yàn)魚(yú)的增重率、攝食率和飼料效率均顯著增加(P＜0.05)，但各牛磺酸添加組間差異不顯著(P＞0.05)。各?；撬崽砑咏M試驗(yàn)魚(yú)的臟體指數(shù)與對(duì)照組相比均顯著降低(P＜0.05)。各組間試驗(yàn)魚(yú)的肝體指數(shù)和肥滿度無(wú)顯著差異(P＞0.05)。如圖1所示，以飼料中牛磺酸含量為自變量(x)，以增重率為因變量(y)，對(duì)二者進(jìn)行二次回歸分析，得出斜帶石斑魚(yú)飼料中?；撬岬倪m宜含量為1.04%。

表2 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of dietary taurine content on growth performance of grouper(Epinephelus coioides)

圖1 斜帶石斑魚(yú)增重率和飼料中牛磺酸含量的關(guān)系Fig.1 Relationship between dietary taurine content and WGR of grouper(Epinephelus coioides)

2.2 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)體成分的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，各?；撬崽砑咏M試驗(yàn)魚(yú)的全魚(yú)粗蛋白質(zhì)含量顯著增加(P＜0.05)，粗脂肪含量顯著降低(P＜0.05)，但各?；撬崽砑咏M間差異不顯著(P＞0.05)。各組間試驗(yàn)魚(yú)的全魚(yú)粗灰分和水分含量均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

2.3 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟和肌肉中游離氨基酸含量的影響

由表4、表5可知，各?；撬崽砑咏M試驗(yàn)魚(yú)肝臟和肌肉中總非必需氨基酸(TNEAA)和總氨基酸(TAA)含量均顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。各?；撬崽砑咏M試驗(yàn)魚(yú)肝臟和肌肉中游離絲氨酸含量均顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。各牛磺酸添加組試驗(yàn)魚(yú)肝臟和肌肉中游離蛋氨酸含量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，但各牛磺酸添加組間差異不顯著(P＞0.05)。

表3 飼料中牛磺酸含量對(duì)斜帶石斑魚(yú)體成分的影響(濕重基礎(chǔ))Table 3 Effects of dietary taurine content on body composition of grouper(Epinephelus coioides)(wet weight basis) %

表4 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟游離氨基酸含量的影響(濕重基礎(chǔ))Table 4 Effects of dietary taurine content on liver free amino acid contents of grouper(Epinephelus coioides)(wet weight basis) 10-2 mg/g

表5 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)肌肉游離氨基酸含量的影響(濕重基礎(chǔ))Table 5 Effects of dietary taurine level on muscle free amino acid contents of grouper(Epinephelus coioides)(wet weight basis) 10-2 mg/g

續(xù)表5

2.4 飼料?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)組織中?；撬岱植嫉挠绊?/h3>

圖2 飼料中牛磺酸含量對(duì)斜帶石斑魚(yú)組織?；撬岱植嫉挠绊慒ig.2 Effects of dietary taurine content on tissue taurine distribution of grouper(Epinephelus coioides)

試驗(yàn)前試驗(yàn)魚(yú)每100 g肌肉、肝臟和全魚(yú)中?；撬岷糠謩e為 294.70、252.95 和 123.78 mg。圖2顯示，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，試驗(yàn)魚(yú)血清、肝臟、肌肉和全魚(yú)?；撬岷烤S飼料中牛磺酸含量的增加而呈上升趨勢(shì)，各?；撬崽砑咏M試驗(yàn)魚(yú)血清、肝臟、肌肉和全魚(yú)?；撬岷烤@著高于對(duì)照組(P＜0.05)。由表6可知，試驗(yàn)魚(yú)血清、肝臟、肌肉和全魚(yú)?；撬岷颗c飼料中?；撬岷砍曙@著正相關(guān)(r＞0.907，P＜0.05)。從試驗(yàn)魚(yú)肝臟和肌肉對(duì)飼料中牛磺酸的保留來(lái)看，肝臟?；撬岜Ａ袈孰S飼料中?；撬岷康脑黾映噬仙厔?shì)，而肌肉中?；撬岜Ａ袈孰S飼料中?；撬岷康脑黾映氏壬仙笙陆档内厔?shì)，以D3組最高;此外，各組試驗(yàn)魚(yú)肌肉?；撬岜Ａ袈示哂诟闻K(表7)。

3 討論

3.1 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)中，各牛磺酸添加組均提高了斜帶石斑魚(yú)的末重和增重率，這與牙鲆［13］、鱸魚(yú)(Lateolabrax japonicus)［14］、草魚(yú)(Ctenopharyngodon idellus)［15］的研究結(jié)果一致。?；撬崾前被嵫苌?，可以作為誘食劑作用于魚(yú)類(lèi)的嗅覺(jué)器官，增加對(duì)食物的攝?。?6］。本試驗(yàn)中，各牛磺酸添加組斜帶石斑魚(yú)的攝食率與對(duì)照組相比均顯著升高，這說(shuō)明?；撬峥梢源龠M(jìn)斜帶石斑魚(yú)攝食。各?；撬崽砑咏M斜帶石斑魚(yú)攝食率和飼料效率均比對(duì)照組高，這與其增重率的變化一致，據(jù)此推測(cè)?；撬峥赡苁峭ㄟ^(guò)提高斜帶石斑魚(yú)的攝食率和飼料效率來(lái)促進(jìn)生長(zhǎng)的。經(jīng)二次曲線回歸分析，斜帶石斑魚(yú)飼料中牛磺酸的適宜含量為1.04%。這一結(jié)果高于鱸魚(yú)(0.2%)［14］和草魚(yú)(0.6%)［15］，但低于牙鲆(1.5% ～2.0%)［13］。魚(yú)類(lèi)對(duì)?；撬嵝枰康牟煌赡芘c魚(yú)的種類(lèi)有關(guān)。

表6 斜帶石斑魚(yú)血清、肝臟、肌肉和全魚(yú)?；撬岷?y)與飼料中?；撬岷?x)的關(guān)系Table 6 Relationships between taurine content in serum，liver，muscle and whole body(y)of grouper(Epinephelus coioides)and dietary taurine content(x)

表7 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)肌肉和肝臟牛磺酸保留率的影響(濕重基礎(chǔ))Table 7 Effects of dietary taurine content on taurine retention in muscle and liver of grouper(Epinephelus coioides)(wet weight basis) %

3.2 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)體成分的影響

牛磺酸能夠通過(guò)調(diào)節(jié)與蛋白質(zhì)合成代謝相關(guān)激素的分泌來(lái)影響全魚(yú)的蛋白質(zhì)含量，飼料中添加牛磺酸能夠顯著地提高鯉魚(yú)(Cyprinus carpio L.)血清甲狀腺激素含量，從而控制魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)激素的基因表達(dá)和合成，達(dá)到促進(jìn)魚(yú)類(lèi)體蛋白質(zhì)合成的目的［17］。在本試驗(yàn)中，各?；撬崽砑咏M斜帶石斑魚(yú)全魚(yú)粗蛋白質(zhì)含量與對(duì)照組相比均顯著升高，這 與 在 草 魚(yú)［15］、虹 鱒 (Oncorhynchus mykiss)［18］和牙鯛［19］上的研究結(jié)果一致。?；撬嵩隰~(yú)類(lèi)體內(nèi)能夠參與膽汁酸的合成，而膽汁酸能夠促進(jìn)脂類(lèi)合成代謝［20］，進(jìn)而增加全魚(yú)的粗脂肪含量。但在本試驗(yàn)中，各?；撬崽砑咏M斜帶石斑魚(yú)的全魚(yú)粗脂肪含量卻顯著下降，該結(jié)果與在大西洋鮭［11］上的研究結(jié)果一致，可能是由于?；撬嵩隰~(yú)體內(nèi)參與了膽汁酸合成以外的其他代謝合成途徑［21］。各牛磺酸添加組斜帶石斑魚(yú)體內(nèi)蛋白質(zhì)沉積的增加以其體內(nèi)脂肪沉積的降低為代價(jià)，說(shuō)明?；撬峋哂袪I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)再分配的作用，飼料中過(guò)低的牛磺酸含量不利于魚(yú)體內(nèi)蛋白質(zhì)的沉積，而魚(yú)體內(nèi)蛋白質(zhì)沉積的增加也反映在魚(yú)體生長(zhǎng)速度上。

3.3 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)組織中游離氨基酸含量的影響

動(dòng)物體內(nèi)游離氨基酸的含量明顯受飼料組成的影響［22-23］。在本試驗(yàn)中，對(duì)照組斜帶石斑魚(yú)肝臟和肌肉中大部分游離氨基酸含量均顯著高于各牛磺酸添加組，表明飼料中?；撬岷客瑯訉?duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟和肌肉中游離氨基酸含量產(chǎn)生了影響，這一結(jié)果與在真鯛［12］上得出的結(jié)果一致。絲氨酸和蛋氨酸是魚(yú)類(lèi)?；撬岷铣蛇^(guò)程中的關(guān)鍵氨基酸［24］，本試驗(yàn)中，對(duì)照組斜帶石斑魚(yú)肝臟和肌肉中游離絲氨酸和蛋氨酸含量均顯著高于各牛磺酸添加組，說(shuō)明斜帶石斑魚(yú)攝入牛磺酸不足時(shí)，機(jī)體會(huì)調(diào)動(dòng)更多的游離絲氨酸和蛋氨酸用于牛磺酸的合成。在本試驗(yàn)中，?；撬岵粌H對(duì)肝臟和肌肉中游離蛋氨酸和絲氨酸含量產(chǎn)生了顯著的影響，對(duì)肝臟和肌肉中大部分游離氨基酸含量也同樣產(chǎn)生了顯著的影響。各牛磺酸添加組斜帶石斑魚(yú)肝臟和肌肉中游離氨基酸含量均低于對(duì)照組，其具體的原因不明，還需要對(duì)斜帶石斑魚(yú)體內(nèi)含硫氨基酸的代謝機(jī)制做更進(jìn)一步的研究。

3.4 飼料中?；撬岷繉?duì)斜帶石斑魚(yú)組織中?；撬岱植嫉挠绊?/h3>

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，石斑魚(yú)肌肉、肝臟、血清和全魚(yú)?；撬岷颗c飼料中牛磺酸含量呈良好的線性關(guān)系，這表明斜帶石斑魚(yú)具有將外源攝入的?；撬嶂苯有罘e到魚(yú)體組織中的能力。?；撬嵩隰~(yú)體內(nèi)的分布與?；撬岷铣蛇^(guò)程中的關(guān)鍵酶——半胱次磺酸脫羧酶(CSAD)［4］在這些組織中的活性有關(guān)［25-26］。?；撬嵩谛睅唪~(yú)不同組織中的含量差異較大，其中以肌肉中的含量最高，這個(gè)結(jié)果與Qi等［3］對(duì)大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)的研究結(jié)果一致。肝臟?；撬岜Ａ袈孰S著飼料中?；撬岷康脑黾映手饾u升高趨勢(shì)，而肌肉?；撬岜Ａ袈蕜t隨著飼料中牛磺酸含量的增加呈現(xiàn)先升高后降低趨勢(shì)，反映出斜帶石斑魚(yú)肝臟和肌肉組織對(duì)外源?；撬岬拇x與利用有所不同。無(wú)論牛磺酸添加量多與少，肌肉?；撬岜Ａ袈适冀K高于肝臟，說(shuō)明肌肉對(duì)?；撬岬男罘e能力比肝臟強(qiáng)，而?；撬嵩谘劬Α⒛X等一些特定組織中的含量尤其高［27］，說(shuō)明這些特定組織代謝需要更多的?；撬釁⑴c，以利于這些組織生理功能的發(fā)揮，這也表明了魚(yú)類(lèi)不同的組織對(duì)?；撬岬男罘e能力不同［11，28］。

4 結(jié)論

①飼料中牛磺酸含量影響斜帶石斑魚(yú)的生長(zhǎng)性能和體成分，一定含量(0.4%～1.2%)的牛磺酸能促進(jìn)斜帶石斑魚(yú)生長(zhǎng)和攝食，降低全魚(yú)脂肪沉積，增加全魚(yú)蛋白質(zhì)沉積。

②飼料中適量添加?；撬峥山档托睅唪~(yú)組織中游離氨基酸含量，增加體內(nèi)?；撬岬睦鄯e。

③以增重率為衡量指標(biāo)，斜帶石斑魚(yú)飼料中?；撬岬倪m宜含量為1.04%。

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