彭 墨 徐 瑋 麥康森 周慧慧 譚 朋杜健龍 艾慶輝*

(1.中國海洋大學(xué)，海水養(yǎng)殖教育部重點實驗室，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料學(xué)重點實驗室，青島 266003;2.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南昌 330045)

水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展與魚油資源有限性的矛盾日益激化，尋找合適的替代脂肪源勢在必行。植物油因具備供應(yīng)穩(wěn)定、相對低的二 英和其他有機污染物含量、較大可獲得性和較高含量不飽和脂肪酸等優(yōu)點，已成為極具潛力的魚油替代者。相對于其他植物油，菜籽油具有適宜的C18∶2n-6［亞油酸(LA)］，低含量的 C18∶3n-3［α-亞麻酸(ALA)］和高含量的C18∶1n-9，被認(rèn)為是能量代謝偏好的底物［1］。有研究表明，菜籽油替代少量魚油不會顯著影響魚體生長和飼料利用［2-9］，但菜籽油全部替代魚油會對魚體生長和品質(zhì)產(chǎn)生顯著影響，如生長速度下降［10］、腹腔或肝臟脂肪過多沉積［11］、肝臟組織發(fā)生病變［12］、肌肉中 n-3 長鏈多不飽和脂肪酸(n-3 LC-PUFA)含量顯著下降［2-5，8-9］等。魚肉對人類營養(yǎng)的最大價值在于其是n-3 LC-PUFA等活性物質(zhì)的來源。攝食高含量n-3 LC-PUFA魚肉后會對人體健康產(chǎn)生積極的影響，如抑制心臟病的發(fā)生和降低炎性反應(yīng)的發(fā)生［13］。因此，對植物油替代效果的衡量不僅需關(guān)注魚體的生長和飼料利用，還需關(guān)注魚體健康和魚肉n-3 LC-PUFA含量。

大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)是我國北方重要的經(jīng)濟養(yǎng)殖種類，因其美味的肉質(zhì)、快速生長的特性及較高的經(jīng)濟價值，在亞洲和歐洲被廣泛養(yǎng)殖。目前，已有的關(guān)于大菱鲆飼料中植物油替代魚油的研究主要涉及豆油、亞麻籽油、橄欖油和紅花油［14-16］，有關(guān)菜籽油在大菱鲆上的替代效果研究還未見報道。本試驗以菜籽油分別替代飼料中 0、33.3%、66.7%和 100.0%的魚油，探究其對大菱鲆生長、脂肪酸組成及脂肪沉積的影響，為大菱鲆飼料中植物油替代魚油提供理論依據(jù)，以緩解魚油短缺難題，更好地促進水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料配方和制備

以白魚粉、豆粕、谷朊粉和酪蛋白作為主要的蛋白質(zhì)源，以菜籽油分別替代 0、33.3%、66.7%和100.0%的魚油，配制粗蛋白質(zhì)含量為50%(干物質(zhì)基礎(chǔ))、粗脂肪含量為12%(干物質(zhì)基礎(chǔ))的4種等氮等脂飼料(表1)。魚油和菜籽油分別購于福山大茂飼料有限公司和寧波奉化大堰阿拉榨油坊，其脂肪酸組成見表2。因魚粉中含有脂肪，魚油中LC-PUFA含量占總脂肪酸的18%～25%(參照李慶民等［17］、Turchini等［18］的方法計算)。以魚油總脂肪酸中含有18%的LC-PUFA計，可推測出全魚油組、33.3%菜籽油組、66.7%菜籽油組和全菜籽油組飼料中n-3 LC-PUFA含量分別約為1.70%、1.25%、0.80%和 0.35%。

飼料制備之前，魚粉和豆粕等飼料原料先經(jīng)粉碎，過320μm篩網(wǎng)，再按配比從小到大逐級定量均勻混合;較大的混合物進入V型攪拌機充分混合25 min。將大豆卵磷脂、菜籽油和魚油混合均勻，隨后將其與已混好的干粉充分混勻，再加入適量的水揉勻，全自動漁用餌料機(F-26Ⅱ，華南理工大學(xué)研制)將其加工制成直徑為3.0 mm的硬顆粒飼料，45～55℃烘干至飼料水分含量為10%左右，待飼料顆粒干燥冷卻后，雙層塑料袋包裝并封口，所制飼料置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆茫苑乐癸暳现颈谎趸?/p>

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(DM basis) %

續(xù)表1

表2 脂肪源和飼料脂肪酸組成(占總脂肪酸的百分比)Table 2 Fatty acid composition of lipid sources and diets(percentage of total fatty acids) %

1.2 飼養(yǎng)管理和樣品采集

試驗用統(tǒng)一規(guī)格的同批次健康大菱鲆幼魚購于青島膠州養(yǎng)殖場。在正式試驗之前，所有試驗魚先用大菱鲆0#料(七好生物科技有限公司提供)暫養(yǎng)1周適應(yīng)養(yǎng)殖系統(tǒng)，再用自制硬顆粒飼料(混合的本試驗配制的4種飼料)暫養(yǎng)1周使其適應(yīng)自制飼料。在饑餓 24 h后，初重為(5.89±0.02)g的大菱鲆幼魚被隨機分到12個桶(300 L，35尾/桶)。每種飼料隨機飼喂3桶試驗魚。每天投喂2次(08:00和18:00)，飽食投喂，養(yǎng)殖周期為92 d。大菱鲆在飼料下沉過程時攝食，攝食后，桶內(nèi)多余的飼料和糞便立即用吸管吸去。記錄攝食量，如有死魚記錄數(shù)量并稱重。海水持續(xù)經(jīng)由水泵泵到泡沫分離器，經(jīng)由生物塔砂濾到高位池后最終進入循環(huán)系統(tǒng)，控制每桶水流速2 L/min。每次攝食完后，循環(huán)水系統(tǒng)排污，在試驗第1個月，每桶更換1/2的水，之后更換70%桶體積水。循環(huán)水系統(tǒng)使用氣石持續(xù)充氧。在養(yǎng)殖過程中，水溫17.5～19.0 ℃;鹽度28.0%～31.0%;溶氧濃度在7 mg/L左右;氨態(tài)氮(NH4-N)、硝態(tài)氮(NO3-N)和亞硝酸鹽氮(NO2-N)濃度均低于100.0μg/L。從試驗第6周開始，投喂5 h后收集桶內(nèi)成形的糞便，放入5 mL離心管，2 000×g離心10 min后保存于-20℃，待后期用于表觀消化率的測定。

在試驗開始之前，隨機挑出15尾魚做全魚常規(guī)營養(yǎng)成分分析。養(yǎng)殖試驗結(jié)束時，所有魚都饑餓處理24 h。每桶各取6尾魚稱重，取背部肌肉、肝臟，稱重。將肝臟和肌肉放入5 mL離心管，液氮速凍，隨后保存在-80℃，待后期用于脂肪酸組成以及水分、粗脂肪含量的測定。此外，每桶取5尾魚放入樣品袋，-20℃保存，待后期用于全魚常規(guī)營養(yǎng)成分分析。

1.3 指標(biāo)測定

1.3.1 常規(guī)營養(yǎng)成分分析

飼料原料、飼料和試驗魚均測定水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量。樣品在105℃烘干到恒重后求得干物質(zhì)含量，然后進行生化組分分析。粗蛋白質(zhì)含量的測定采用凱氏定氮法;粗脂肪含量的測定采用索氏抽提法;粗灰分含量的測定采用馬弗爐灼燒法。每份樣品均重復(fù)測定2次，若相對偏差大于2%，則增加重復(fù)次數(shù)，采用相對偏差在2%以下的2個測定值的平均值為測定結(jié)果。

肝臟和肌肉脂肪含量分析參照Floch等［19］方法略作修改，詳見彭墨等［20］的方法。

1.3.2 脂肪酸組成測定

脂肪酸組成的測定參照Metcalfe等［21］的方法略作修改，詳見彭墨等［20］的方法。

1.3.3 釔含量測定

將糞便和飼料樣品冷凍干燥20 h，研磨成粉，再次冷凍干燥6 h。稱取100 mg糞便(或飼料)于干凈燒瓶中，加入10 mL高氯酸，電爐上灼燒，直到燒瓶中液體呈透明狀。將透明液體轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用雙蒸水定容，0.22μm濾膜過濾后即可借助電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀(ICP-OES，瓦里安公司，美國)測定釔的含量。

1.4 計算公式

存活率(survival rate，SR，%)=100×終末魚數(shù)量/初始魚數(shù)量;

特定生長率(special growth rate，SGR，%/d)=100×(ln終末體重-ln初始體重)/試驗天數(shù);

飼料效率(feed conversion rate，F(xiàn)CR)=(終末體重-初始體重)/飼料干物質(zhì)消耗量;

攝食率(feed intake ratio，F(xiàn)IR，%/d)=100×飼料干物質(zhì)消耗量/［(初始體重+終末體重)/2］/試驗天數(shù);

表觀凈蛋白質(zhì)利用率(apparent net protein utilization，ANPU，%)=100×(末期魚體蛋白質(zhì)含量-初始魚體蛋白質(zhì)含量)/攝食

飼料蛋白質(zhì)的量;

肝體比(hepatosomatic index，HSI，%)=100×肝臟重/體重;

脂肪表觀消化率［apparent digestibility coefficient(ADC)of lipid，%］=100×［1-(飼料中 Y2O3含量/飼料脂肪含量)×(糞便脂肪含量/糞便中Y2O3含量)］。

1.5 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析，在單因素方差分析(one-way ANOVA)達(dá)到顯著水平時(P＜0.05)，采用 Turkey’s檢驗進行多重比較，數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤的形式。

2 結(jié)果

2.1 菜籽油替代魚油對大菱鲆幼魚存活、生長和形體指標(biāo)的影響

由表3可知，全菜籽油組大菱鲆幼魚SR較其他組顯著下降(P＜0.05)，與其他各組間差異不顯著(P＞0.05)。各組大菱鲆幼魚的 FIR在1.51%/d～1.63%/d 范圍內(nèi)，但菜籽油替代水平并未顯著影響大菱鲆幼魚的FIR(P＞0.05)。大菱鲆幼魚的終末體重和SGR均隨菜籽油替代水平的升高而下降，全菜籽油組的終末體重和SGR顯著低于全魚油組(P＜0.05)，其他組間差異不顯著(P＞0.05)。菜籽油替代水平并未顯著影響大菱鲆幼魚的FCR和ANPU(P＞0.05)。大菱鲆幼魚的HSI隨菜籽油替代水平的升高而升高(P＜0.05)，且全菜籽油組的HSI顯著高于全魚油組(P＜0.05)，與其他組間差異不顯著(P＞0.05)。

表3 菜籽油替代魚油對大菱鲆幼魚存活、生長和形體指數(shù)的影響Table 3 Effects of fish oil replacement by rapeseed oil on growth，survival and body parameters of juvenile turbot(Scophthalmus maximus L.)(n=3)

2.2 菜籽油替代魚油對大菱鲆幼魚體成分、肝臟和肌肉脂肪含量以及飼料脂肪表觀消化率的影響

由表4可知，菜籽油替代水平并未顯著影響大菱鲆幼魚的體成分和肌肉脂肪含量以及飼料脂肪表觀消化率(P＞0.05)。大菱鲆幼魚的肝臟脂肪含量隨著菜籽油替代水平的升高而升高，當(dāng)菜籽油替代66.7%和100.0%的魚油時，該組肝臟脂肪含量顯著高于全魚油組(P＜0.05)，且全菜籽油組肝臟脂肪含量還顯著高于33.3%菜籽油組(P＜0.05)，但與 66.7%菜籽油組間差異不顯著(P＞0.05)。

表4 菜籽油替代魚油對大菱鲆幼魚體成分、肝臟和肌肉脂肪含量以及飼料脂肪表觀消化率的影響Table 4 Effects of fish oil replacement by rapeseed oil on body composition，lipid content in muscle and liver of juvenile turbot(Scophthalmus maximus L.)and dietary lipid apparent digestibility(n=3) %

2.3 菜籽油替代魚油對大菱鲆幼魚肝臟和肌肉脂肪酸組成的影響

隨著菜籽油替代水平的升高，大菱鲆幼魚肝臟中C18∶1及肝臟和肌肉中LA和ALA含量隨之升高，肝臟和肌肉中 C14∶0、C18∶0、C20∶4n-6［花生四烯酸(ARA)］、C20∶5n-3(EPA)和 C22∶6n-3(DHA)含量隨之下降(表5)。相對于全魚油組，66.7%菜籽油組和全菜籽油組肌肉和肝臟中LA和ALA含量顯著升高(P＜0.05)，而EPA和 DHA含量則顯著下降(P＜0.05)。飼料C18∶1含量與大菱鲆幼魚肝臟和肌肉中 C18∶1、LA、ALA、EPA 和DHA含量存在正相關(guān)關(guān)系(圖1)。

表5 菜籽油替代魚油對大菱鲆幼魚肝臟和肌肉脂肪酸組成的影響(占總脂肪酸的百分比)Table 5 Effects of fish oil replacement by rapeseed oil on fatty acid composition in liver and muscle of turbot(Scophthalmus maximus L.)(percentage of total fatty acids) %

續(xù)表5

圖1 飼料C18∶1含量與大菱鲆幼魚肝臟和肌肉中 C18 ∶1、C18 ∶2n-6、C18 ∶3n-3、C20∶5n-3和 C22∶6n-3含量的關(guān)系Fig.1 Relationship between dietary C18 ∶1 content and C18 ∶1n，C18 ∶2n-6，C18 ∶3n-3，C20 ∶5n-3 and C22∶6n-3 contents in liver and muscle of turbot(Scophthalmus maximus L.)

3 討論

本試驗研究發(fā)現(xiàn)，在養(yǎng)殖周期為92 d時，飼料中菜籽油替代66.7%的魚油并未顯著影響大菱鲆幼魚的生長和飼料利用。該結(jié)果與一些海水魚如歐洲 鱸 魚 (Dicentrarchus labrax L.)［6］和 金 頭 鯛(Sparus aurata)［7］的研究結(jié)果一致。但當(dāng)魚油全部被菜籽油替代時，則會顯著影響大菱鲆的生長，這與布魯克嘉魚(Salvelinus fontinalis)［2］、大西洋鮭 魚 (Salmo salar L.)［3-5］、虹 鱒 (Oncorhynchus mykiss)［8］和青魚 (Mylopharyngodon piceus)［9］上的研究不一致，上述這些研究表明菜籽油全部替代魚油并未顯著魚體的生長。Turchini等［18］指出，當(dāng)植物油替代全部魚油時，魚體出現(xiàn)生長下降的原因大多與飼料中的n-3 LC-PUFA不足有關(guān)。本試驗中，大菱鲆幼魚的FE、FIR及飼料的脂肪表觀消化率均未受到菜籽油替代水平的顯著影響，因此全菜籽油組魚體生長下降的原因可能是飼料中n-3 LC-PUFA的含量不能滿足魚體需求。在本試驗中，全魚油組、33.3%菜籽油組、66.7%菜籽油組和全菜籽油組n-3 LC-PUFA的含量分別約為1.70%、1.25%、0.80%和 0.35%。Léger等［22］研究指出，大菱鲆必需脂肪酸需求可能低于0.6%;Gatesoupe等［23］指出，大菱鲆必需脂肪酸需求可能在0.8%。因此，全菜籽油組飼料中0.35%的 n-3 LC-PUFA含量不能滿足魚體對n-3 LC-PUFA的需求，故可能影響大菱鲆對飼料其他營養(yǎng)素的利用。

本試驗中，菜籽油替代水平并未顯著影響大菱鲆幼魚的體成分。而另有研究表明飼料中菜籽油含量過高時顯著影響青魚的魚體水分含量［9］，結(jié)果的不同可能與養(yǎng)殖魚類和養(yǎng)殖時間有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，大菱鲆幼魚的HSI隨菜籽油替代水平的升高而升高，且全菜籽油組的HSI顯著高于全魚油組。這可能與肝臟脂肪含量升高有關(guān)。大菱鲆幼魚的肝臟脂肪含量隨菜籽油替代水平的升高而升高，其結(jié)果與在青魚［9］和金頭鯛［11］上所得結(jié)果一致。脂肪過多沉積于肝臟可能與肝臟n-3/n-6 PUFA的不平衡密切有關(guān)［24］。本試驗中全魚油組、33.3%菜籽油組、66.7%菜籽油組和全菜籽油組飼料中 n-3/n-6 PUFA 分別為 1.20%、0.88%、0.61%和 0.42%，相 對 應(yīng) 的 4種 飼 料 中 n-3 LC-PUFA的含量分別約為 1.70%、1.25%、0.80%和0.35%。n-3 LC-PUFA一方面能激活過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferatorsactivated receptorα，PPARα)，進而促進脂肪分解［25］;另一方面能抑制固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein 1c，SREBP-1c)的表達(dá)，進而抑制脂肪合成［26］。因此，菜籽油替代魚油后n-3/n-6 PUFA的不平衡和較低n3 LC-PUFA含量可能造成肝臟脂肪過多沉積。

魚類脂肪酸組成與人類健康息息相關(guān)［27］。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，隨菜籽油替代水平的升高，肝臟ARA、EPA和DHA含量以及n-3/n-6 PUFA均隨之下降，而肝臟C18∶1、LA和ALA含量則隨之升高，且與飼料C18∶1之間存在顯著的相關(guān)性。雖然飼料中LA和ALA含量隨菜籽油替代水平的升高而升高，但肝臟和肌肉中ARA、EPA和DHA含量則隨之下降。這可能與大菱鲆沒有或只具有較低轉(zhuǎn)化LA為ARA或ALA為EPA和DHA的能力有關(guān)。盡管大菱鲆△6脂肪酸去飽和酶(Fad)活力較高，但其△5Fad和延長酶(從C18到C20)活力相對較低［28-29］。此外，肝臟和肌肉中ARA含量降低可能還與ARA轉(zhuǎn)化為類二十烷酸產(chǎn)物，如前列腺素2(PGE2)等炎性物質(zhì)有關(guān)，最終影響魚體的免疫能力。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，全菜籽油組存活率低于其他3組。因此，菜籽油高水平替代魚油可能會影響魚體的免疫力，其機理還未知，需進一步深入研究。

4 結(jié) 論

菜籽油替代66.7%的魚油雖未顯著影響大菱鲆幼魚生長和飼料利用，但顯著影響大菱鲆肝臟脂肪含量和肌肉n-3 LC-PUFA含量，故從營養(yǎng)品質(zhì)的角度，在大菱鲆幼魚飼料中菜籽油替代魚油的水平應(yīng)低于66.7%。

致謝:

感謝國家鲆鰈類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS 50-G08)經(jīng)費的資助，感謝同實驗室左然濤博士在試驗方案設(shè)計以及孟玉瓊、王震、韓麗蓉、路凱和陽鋼同學(xué)在飼料制備、養(yǎng)殖試驗及樣品采集時給予的幫助。

［1］ HENDERSON R J.Fatty acid metabolism in freshwater fish with particular reference to polyunsaturated fatty acids［J］.Archiv f?r Tierern?hrung，1996，49(1):5-22.

［2］ GUILLOU A，SOUCY P，KHALIL M，et al.Effects of dietary vegetable and marine lipid on growth，muscle fatty acid composition and organoleptic quality of flesh of brook charr(Salvelinus fontinalis)［J］.Aquaculture，1995，136(3/4):351-362.

［3］ TOCHER D R，BELL JG，DICK JR，et al.Polyunsaturated fatty acid metabolism in Atlantic salmon(Salmo salar)undergoing parr-smolt transformation and the effects of dietary linseed and rapeseed oils［J］.Fish Physiology and Biochemistry，2000，23(1):59-73.

［4］ BELL J G，TOCHER D R，HENDERSON R J，et al.Altered fatty acid compositions in Atlantic salmon(Salmo salar)fed diets containing linseed and rapeseed oils can be partially restored by a subsequent fish oil finishing diet［J］.The Journal of Nutrition，2003，133(9):2793-2801.

［5］ TORSTENSEN B E，F(xiàn)R?YLAND L，LIE ?.Replacing dietary fish oil with increasing levels of rapeseed oil and olive oil—effects on Atlantic salmon(Salmo salar L.)tissue and lipoprotein lipid composition and lipogenic enzyme activities［J］.Aquaculture Nutrition，2004，10(3):175-192.

［6］ MOURENTE G，GOOD JE，BELL JG.Partial substitution of fish oil with rapeseed，linseed and olive oils in diets for European sea bass(Dicentrarchus labrax L.):effects on flesh fatty acid composition，plasma prostaglandins E2and F2α，immune function and effectiveness of a fish oil finishing diet［J］.Aquaculture Nutrition，2005，11(1):25-40.

［7］ IZQUIERDO M S，MONTERO D，ROBAINA L，et al.Alterations in fillet fatty acid profile and flesh quality in gilthead seabream(Sparus aurata)fed vegetable oils for a long term period.Recovery of fatty acid profiles by fish oil feeding［J］.Aquaculture，2005，250(1/2):431-444.

［8］ PETTERSSON A，JOHNSSON L，BR?NN?S E，et al.Effects of rapeseed oil replacement in fish feed on lipid composition and self-selection by rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)［J］.Aquaculture Nutrition，2009，15(6):577-586.

［9］ SUN S，YE J，CHEN J，et al.Effect of dietary fish oil replacement by rapeseed oil on the growth，fatty acid composition and serum non-specific immunity response of fingerling black carp，Mylopharyngodon piceus［J］.Aquaculture Nutrition，2011，17(4):441-450.

［10］ 王驥騰，韓濤，田麗霞，等.3種植物油源對軍曹魚生長、體組成和脂肪酸組成的影響［J］.浙江海洋學(xué)院學(xué)報:自然科學(xué)版，2007，26(3):237-246.

［11］ FOUNTOULAKI E，VASILAKI A，HURTADO R，et al.Fish oil substitution by vegetable oils in commercial diets for gilthead sea bream(Sparus aurata L.):effects on growth performance，flesh quality and fillet fatty acid profile:recovery of fatty acid profiles by a fish oil finishing diet under fluctuating water temperatures［J］.Aquaculture，2009，289(3/4):317-326.

［12］ CABALLERO M J，OBACH A，ROSENLUND G，et al.Impact of different dietary lipid sources on growth，lipid digestibility，tissue fatty acid composition and histology of rainbow trout，Oncorhynchus mykiss［J］.Aquaculture，2002，214(1/2/3/4):253-271.

［13］ SIMOPOULOSA P.Essential fatty acids in health and chronic disease［J］.The American Journal of Clinical Nutrition，1999，70(3):560s-569s.

［14］ BELL JG，TOCHER D R，MACDONALD F M，et al.Effects of diets rich in linoleic(18∶2n-6)and α-linolenic(18∶3n-3)acids on the growth，lipid class and fatty acid compositions and eicosanoid production in juvenile turbot(Scophthalmus maximus L.)［J］.Fish Physiology and Biochemistry，1994，13(2):105-118.

［15］ BEll J G，TOCHER D R，F(xiàn)ARNDALE B M，et al.Effects of essential fatty acid-deficient diets on growth，mortality，tissue histopathology and fatty acid compositions in juvenile turbot(Scophthalmus maximus)［J］.Fish Physiology and Biochemistry，1999，20(3):263-277.

［16］ ALTUNDAG M S，TIRIL S U，OZDEMIR A.Effects of safflower oil supplementation in diet on growth performance and body fatty acid composition of turbot(Psetta maxima)［J］.Aquaculture International，2014，22(2):597-605.

［17］ 李慶民，陳桂范，高實，等.氣相色譜外標(biāo)法測定魚油中EPA和DHA的含量［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，1996，13(4):259-261.

［18］ TURCHINI G M，TORSTENSEN B E，NG W K.Fish oil replacement in finfish nutrition［J］.Reviews in Aquaculture，2009，1(1):10-57.

［19］ FOLCH J，LEES M，SLOANE STANLEY G H.A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues［J］.The Journal of Biological Chemistry，1957，226(1):497-509.

［20］ 彭墨，徐瑋，麥康森，等.亞麻籽油替代魚油對大菱鲆幼魚生長、脂肪酸組成及脂肪沉積的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)報，2014，38(8):1131-1139.

［21］ METCALFE L D，SCHMITZ A A，PELKA JR.Rapid preparation of fatty acid esters from lipids for gas chromatographic analysis［J］.Analytical Chemistry，1966，38(3):514-515.

［22］ LéGER C，GATESOUPE FJ，METAILLER R，et al.Effect of dietary fatty acids differing by chain lengths andωseries on the growth and lipid composition of turbot Scophthalmus maximus L.［J］.Comparative Biochemistry and Physiology Part B:Comparative Biochemistry，1979，64(4):345-350.

［23］ GATESOUPE F J，LEGER C，BOUDON M，et al.Lipid feeding of turbot(Scophthalmus maximus L.):influence on growth of supplementation with methyl esters of linolenic acid and fatty acid acids of w-9 series［J］.Annales d’Hydrobiologie，1977，8:247-254.

［24］ TAKEUCHI T，WATANABE T.Effect of excess amounts of essential fatty acids on growth of rainbow trout［J］.Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1979，45:1517-1519.

［25］ VARGA T，CZIMMERER Z，NAGY L.PPARs are a unique set of fatty acid regulated transcription factors controlling both lipid metabolism and inflammation［J］.Biochimica et Biophysica Acta:Molecular Basis of Disease，2011，1812(8):1007-1022.

［26］ YOSHIKAWA T，SHIMANO H，YAHAGI N，et al.Polyunsaturated fatty acids suppress sterol regulatory element-binding protein 1c promoter activity by inhibition of liver X receptor(LXR)binding to LXR response elements［J］.The Journal of Biological Chemistry，2002，277(3):1705-1711.

［27］ VALDIMARSSON G，JAMES D.World fisheriesutilisation of catches［J］.Ocean ＆ Coastal Management，2001，44(9/10):619-633.

［28］ TOCHER D R，CARR J，SARGENT J R.Polyunsaturated fatty acid metabolism in fish cells:differential metabolism of(n-3)and(n-6)series acids by cultured cells orginating from a freshwater teleost fish and from a marine teleost fish［J］.Comparative Biochemistry and Physiology Part B:Comparative Biochemistry，1989，94(2):367-374.

［29］ GHIONI C，TOCHER D R，BELL M V，et al.Low C18 to C20 fatty acid elongase activity and limited conversion of stearidonic acid，18∶4(n-3)，to eicosapentaenoic acid，20∶5(n-3)，in a cell line from the turbot，Scophthalmus maximus［J］.Biochimica et Biophysica Acta:Molecular and Cell Biology of Lipids，1999，1437(2):170-181.