通脈降脂咀嚼片質(zhì)量標準提高

袁海銘吳迪

(江西省藥物研究所，江西 南昌 330029)

摘要：[目的]對原有通脈降脂咀嚼片質(zhì)量標準進行提高。[方法]采用HPLC法測定處方中三七的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量。[結(jié)果]三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1進樣量分別在0.238～2.380μg、0.788～7.880μg、0.542～5.420μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為：100.68%、100.06%、99.57%，RSD分別為0.38%、0.50%、0.69%，(n=9)。[結(jié)論]本方法結(jié)果準確，重現(xiàn)性良好，可用于通脈降脂咀嚼片的藥品質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：通脈降脂咀嚼片三七皂苷R1人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1HPLC

1　通脈降脂咀嚼片

通脈降脂咀嚼片由筆管草、川茍、荷葉、三七、花椒等5味藥材組成，具有降脂化濁，活血通脈功能。臨床上常用于治療高血脂癥，防治動脈粥樣硬化。其原有質(zhì)量標準中含量測定指標只有人參皂苷Rb1，為更好地控制通脈降脂咀嚼片的質(zhì)量，本文對原質(zhì)量標準進行了提高，增加了三七皂苷R1、人參皂苷Rg1的含量測定指標，所建立的方法簡便，準確，可有效控制制劑的質(zhì)量。

2　儀器與試藥

島津10A高效液相色譜儀；SCL-10A主控制器；LC-10AT二元梯度泵；SPD-10A紫外檢測器；SIL-10AD自動進樣器；DGU-14A在線脫氣機；CTO-10AS柱溫箱。

超聲波清洗儀(KQ-250，昆山市超聲儀器有限公司)；

超純水機(WP-UP-IV-20，四川沃特爾科技發(fā)展有限公司)。

三七皂苷R1對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110745-200617，供含量測定用)；人參皂苷Rg1對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110703-201027，供含量測定用，含量以96.3%計)；人參皂苷Rb1對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110704-201122，供含量測定用，含量以92.9%計)；乙腈為色譜純，超純水(新鮮制備)；其余試劑均為分析純。

通脈降脂咀嚼片(江西榮裕藥業(yè)集團有限公司)批號：120809、120925、121230、130320、130325、130515、130802、131014、131209、140116。

3　色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表1中的規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長為203nm。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計算應不低于4000。

表1　色譜條件

此條件下三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1與相鄰的峰已達到基線分離，且陰性對照樣品無干擾，見圖1。

A

B

C

4　供試品溶液的制備

4.1提取方法的比較

方法(1)取重量差異項下的本品，研細，取約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率28KHz)40分鐘，放冷，再稱定重量，用水飽和正丁醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，加氨試液洗滌2次，每次15ml，取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

方法(2)系原質(zhì)量標準供試品制備方法：取重量差異項下的本品，研細，取約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流3消失，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘渣用水20ml分次溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次25ml，取正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

經(jīng)兩種提取方法比較，方法(1)含量測定結(jié)果略高，且操作更簡便。結(jié)果見表2。

表2　兩種提取方法比較的結(jié)果

4.2超聲時間的比較

試驗研究中考察了前處理過程中超聲時間對含量測定的影響，結(jié)果表明，用正丁醇超聲30min、40min、60min總皂苷含量無明顯差異，因此選用超聲時間為30min。見表3。

表3　不同超聲時間對含量結(jié)果的影響

5　標準曲線及線性范圍

精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1，對照品及三七皂苷R1對照品適量，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rg 10.4mg、人參皂苷Rb1 0.4mg、三七皂苷R1 0.1mg的混合溶液，分別取上述溶液2μl、5μl、10μl、15μl、20μl，注入液相色譜儀。以峰面積為縱坐標，以進樣量(μg)為橫坐標作線性回歸，得三七皂苷R1的線性回歸方程為：y=211766.63x-3158.78，r=1.0000(n=5)，進樣量在0.238～2.380μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Rg1的線性回歸方程為：y=282420.89x-11726.52，r=0.9998(n=5)，進樣量在0.788～7.880μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Rg1的線性回歸方程為：y=232510.29x-2986.41，r=1.0000(n=5)，進樣量在0.542～5.420μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。測定數(shù)據(jù)及標準曲線分別見表4、圖2。

表4　標準曲線測定數(shù)據(jù)

A

B

C

A.三七皂苷R1標準曲線；B.人參皂苷Rg1標準曲線；C.人參皂苷Rb1。

6　精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次進樣10ul，計算各成分峰面積的RSD分別為：0.42%、0.28%、1.3%，結(jié)果見表5。

表5　精密度試驗結(jié)果

7　重復性試驗

取同一批樣品(批號140116)6份，按上述方法進行測定，計算三七皂苷R1平均含量為0.586mg/片，RSD為1.80%；人參皂苷Rg1平均含量為2.007mg/片，RSD為1.64%；人參皂苷Rb1平均含量為1.316mg/片，RSD為2.53%；總皂苷平均含量為3.905mg/片，RSD為1.51%。結(jié)果見表6。

表6　重復性試驗結(jié)果

8　溶液穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別在0、2、3、4、5、6、7、8、12、24h測定，結(jié)果表明樣品峰面積在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為：1.86%、0.65%、2.0%，結(jié)果見表7。

表7　供試品溶液穩(wěn)定性試驗

9　回收率試驗

精密稱取已知含量的通脈降脂咀嚼片(批號140116)0.75g，共9份，按照低、中、高三種濃度各精密加入三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品，人參皂苷Rb1對照品適量，按上述方法測定，計算回收率，結(jié)果三七皂苷R1的平均回收率為100.68%，RSD為0.38%，人參皂苷Rg1的平均回收率為100.06%，RSD為0.50%，人參皂苷Rb1的平均回收率為99.57%，RSD為0.69。結(jié)果見表8。

表8　回收率試驗測定結(jié)果

10　樣品測定

按上述方法試驗，測定了十批樣品中的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及總皂苷的含量，結(jié)果見表9。

表9　樣品中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Rb1及總皂苷的含量測定結(jié)果

11　討論

11.1經(jīng)提取方法比較，用甲醇及正丁醇超聲提取進行比較，結(jié)果顯示正丁醇超聲含量測定結(jié)果略高，且操作更簡便。

11.2試驗中比較了兩種梯度洗脫，1～25分鐘流動相A為19%，25～50分鐘流動相A從19%→40%；1～25分鐘流動相B為81%，25～50分鐘流動相B從81%→60%。結(jié)果顯示以表1中洗脫方式分離效果與重復性更好。

參考文獻

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