韓　笑　吳瓊石楊　薇(遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院腫瘤科，遼寧　錦州　00)

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腦膠質瘤中絲氨酸蛋白酶抑制劑、血管內皮生長因子表達及對血管生成的影響

韓笑吳瓊石1楊薇2(遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院腫瘤科，遼寧錦州121001)

〔摘要〕目的檢測膠質瘤中絲氨酸蛋白酶抑制劑(Mapsin)、血管內皮生長因子(VEGF)和CD31標記的微血管密度(MVD)的關系，分析其意義。方法以67例膠質瘤患者的臨床資料和術后蠟塊組織作為觀察組，以非腫瘤性的腦組織(病理科存檔)40例作為對照組。應用免疫組化方法檢測兩組中Mapsin、VEGF和CD31的表達。結果觀察組中Mapsin表達的陽性率明顯低于對照組，VEGF表達的陽性率明顯高于對照組，觀察組中MVD值明顯高于對照組，觀察組中Mapsin和VEGF的陽性率、MVD值與腫瘤的最大徑、是否伴有壞死和Ki67增殖指數密切相關。相關分析顯示Mapsin和VEGF、Mapsin和MVD的表達均呈負相關性，VEGF和MVD的表達呈正相關性。結論膠質瘤術后組織中Mapsin的陽性率低、VEGF的陽性率高、MVD值高，Mapsin對腫瘤血管生成可能具有抑制作用，Mapsin和VEGF共同調節(jié)著腫瘤的發(fā)生和進展。

〔關鍵詞〕膠質瘤;絲氨酸蛋白酶抑制劑(Mapsin);血管內皮生長因子(VEGF);微血管密度(MVD);免疫組化

1遼寧醫(yī)學院教學部2遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院骨脊柱甲乳外科

第一作者:韓笑(1982-)，女，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤學研究。

膠質瘤發(fā)生年齡、性別、發(fā)生部位、生長潛能、侵及范圍、形態(tài)特點均有所不同。越來越多證據表明這些不同是由于腫瘤轉化過程中基因和蛋白表達發(fā)生了變化〔1〕。膠質瘤形成過程中間質血管豐富，對腫瘤的生長有重要作用，同時也對判斷膠質瘤的分級有重要幫助〔2〕。絲氨酸蛋白酶抑制劑(Mapsin)是1994年發(fā)現的一種腫瘤抑制基因，在正常組織中有不同程度的表達，當腫瘤性病變進展時，其表達常丟失〔3〕。近年有研究顯示Mapsin可能對腫瘤間質血管形成有一定抑制作用〔4〕。血管內皮生長因子(VEGF)是經典的血管生成促進因子，可以激活腫瘤血管內皮細胞的活性，促進腫瘤間質的血管新生及管腔形成〔5，6〕。CD31是標記血管內皮細胞的特異性蛋白，表達于細胞質中，其陽性的管腔可以代表腫瘤間質的微血管密度(MVD)〔7〕。本文檢測Mapsin、VEGF在膠質瘤中的表達，關注兩者與MVD的關系。

1　資料與方法

1. 1對象2010年1月至2014年2月行手術治療的腦膠質瘤患者67例，留取患者的臨床資料和術后蠟塊組織，并經病理醫(yī)生閱片復診，同時符合WHO中的診斷標準。男37例，女30例;年齡51～86〔平均(62. 7±5. 5)〕歲。同期非腫瘤性的腦組織(病理科存檔)40例為對照組，男20例，女20例;年齡52～83〔平均(64. 5±5. 6)〕歲。兩組一般臨床資料無明顯差別，具有可比性。

1. 2 Mapsin、VEGF和CD31的檢測Mapsin、VEGF和CD31的試劑均為濃縮液，首先按不同比例進行稀釋后行預實驗，預實驗結果均由病理醫(yī)師判讀，選擇染色最理想的濃度用于正式的實驗操作中。正式標本中Mapsin、VEGF和CD31中檢測應用免疫組化二步法，均由病理科技師進行操作，嚴格按說明書進行，做好切片質量的控制，減少人為誤差。

1. 3 Mapsin、VEGF和CD31結果判讀Mapsin和VEGF均以細胞質中出現深棕色為陽性反應的細胞，隨機選擇3個上皮細胞密集且染色較為集中的區(qū)域(熱點區(qū))，計算陽性率(400 倍)，取平均值。以＜25%為陰性，以≥25%為陽性。MVD的計數采用Weidner法〔3〕，其判定不以是否形成管腔或者管腔中有無紅細胞為計數單位，凡是出現與鄰近的微血管明顯分離，染色陽性的單個內皮細胞或者內皮細胞族作為一個血管計數。將切片置于40倍顯微鏡下確定最高血管密度區(qū)域，即熱點區(qū)，然后再于400倍視野下計數，選擇3個最高血管密度區(qū)進行微血管計數，然后求其平均值作為該病例的MVD值。

1. 4統(tǒng)計學方法應用SPSS13. 0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗或線性相關性分析。

2　結果

2. 1兩組Mapsin、VEGF陽性率和MVD值的比較觀察組中Mapsin的陽性率明顯低于對照組，觀察組中VEGF的陽性率明顯高于對照組，觀察組中MVD值明顯高于對照組。見表1。

表1　兩組中Mapsin、VEGF陽性率和MVD值的比較〔n(%)，x±s〕

2. 2 Mapsin、VEGF和MVD在觀察組不同臨床特征中的比較觀察組中Mapsin和VEGF的陽性率、MVD值與腫瘤的最大徑、是否伴有壞死和Ki67增殖指數密切相關。見表2。

表2　 Mapsin、VEGF陽性表達率和MVD在觀察組不同臨床特征中的比較〔n(%)，x±s〕

2. 3觀察組中Mapsin、VEGF和MVD的相關性Mapsin和VEGF(r=－0. 45，P = 0. 048 3)、Mapsin和MVD(r =－0. 49，P = 0. 045 3)的表達均呈負相關，VEGF和MVD的表達呈正相關性(r=0. 55，P=0. 010 9)。

3　討論

膠質瘤病變進展過程具有以下特點:①可發(fā)生在中樞神經系統(tǒng)的任何部位，特別是大腦半球;②好發(fā)于成年人和老年人;③組織學特點和生物學行為變化很大;④向周圍和遠處腦組織彌漫浸潤與組織學分級無明顯關系;⑤腫瘤形成后具有惡性程度不斷增加的傾向，直到發(fā)展為膠質母細胞瘤。以上因素均與腫瘤形成過程中蛋白表達失調和間質血管增生有關〔8〕。Mapsin是從正常乳腺上皮細胞中分離出來的cDNA序列中，含有2 548個核苷酸，其編碼的蛋白是絲氨酸蛋白酶抑制劑的一種，具有375個氨基酸，內部有8個半胱氨酸殘基，具有特異的三維結構穩(wěn)定的作用〔9，10〕。馬瑛等〔11〕通過對35例上皮性卵巢癌標本進行Mapsin表達的檢測，發(fā)現Mapsin在卵巢癌中表達下降，同時與VEGF具有負相關性，認為Mapsin對上皮性卵巢癌的血管生成、腫瘤的侵襲和轉移有明顯的抑制作用。VEGF是當今研究最多的血管生成因子，可以誘導基質血管形成，也可以促進血管內皮細胞的增生。其表達與多種因子具有協同作用〔12，13〕。VEGF分泌增多時可以使血管內皮細胞增殖，同時引起血管內皮細胞分裂、重塑，使血管內皮細胞形成枝芽狀生長，同時經血流沖擊形成管腔〔14〕。

本文結果提示Mapsin正常表達具有抑制腫瘤形成的作用，而低表達是誘發(fā)膠質瘤形成的因素。Mapsin高表達時抑制腫瘤的機制有:①有效地抑制血管生成;②可以增加細胞的黏附能力，抑制腫瘤細胞的轉移〔15〕;③結合Ⅰ型和Ⅱ型膠原，增加細胞的黏附作用，抑制腫瘤細胞的遷移作用;④對腫瘤的侵襲性生長有一定抑制作用〔16，17〕。本文結果提示膠質瘤中存在著大量的血管生成促進因子和較高密度的微血管，使腫瘤細胞的營養(yǎng)供應豐富，代謝活躍，細胞增生繁殖能力增強。Mapsin低表達時可以促進腫瘤的生長，加速腫瘤細胞的壞死形成，同時促進腫瘤細胞的失控性增殖過程，使腫瘤的侵襲能力增強，腫瘤的進展加快。Mapsin高表達是抑制VEGF表達及血管密度形成的因素，而低表達時可以促進VEGF的分泌，高效促進腫瘤的血管新生〔18，19〕。

綜上，膠質瘤術后組織中Mapsin的陽性率低、VEGF的陽性率高、MVD值高，Mapsin與VEGF、MVD具有協同作用，Mapsin對腫瘤血管生成可能具有抑制作用，共同調節(jié)著腫瘤的發(fā)生和進展。

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〔2014-07-16修回〕

(編輯苑云杰)

〔文章編號〕1005-9202(2015)20-5831-03;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2015. 20. 071

〔文獻標識碼〕A

〔中圖分類號〕R739