石　琳　李　麗　(湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北　恩施　445000)

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宮頸癌組織中MACC1、c-Met蛋白表達相關(guān)性及與盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

石琳李麗(湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北恩施445000)

〔摘要〕目的探討結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(MACC1)、人原癌基因編碼蛋白(c-Met)表達與宮頸癌以及盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法選擇該院2011年7月至2013年12月初發(fā)且術(shù)前未接受過放化療治療的所有宮頸癌手術(shù)患者116例，收集患者的病歷資料，采用免疫組化法檢測MACC1、c-Met蛋白在不同宮頸組織中的表達情況，分析其表達結(jié)果與各臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果MACC1、c-Met蛋白的陽性表達率在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅱ～Ⅲ組織、宮頸癌組織中差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0. 05)，三組之間陽性率的兩兩比較，宮頸正常組織、CINⅡ～Ⅲ組織比較和正常宮頸組織、宮頸癌組織比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0. 05)。MACC1、c-Met蛋白的表達在宮頸癌組織內(nèi)呈正相關(guān)(r= 0. 648，P＜0. 05)。經(jīng)多因素的Logistic回歸分析，MACC1蛋白、肌層浸潤深度是影響盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的因素(OR = 6. 015，3. 901，P＜0. 05)。結(jié)論宮頸癌組織中MACC1、c-Met蛋白的表達有異常，其中MACC1蛋白陽性表達可作為評估宮頸癌在盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨立高危因素，臨床有重要的參考意義。

〔關(guān)鍵詞〕宮頸癌;結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1; c-Met蛋白;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

全球每年新發(fā)宮頸癌約52. 98萬，死亡病例約27. 5萬〔1〕，在我國婦女罹患宮頸癌的比例為15/10萬〔2〕。隨著女性生活方式及習(xí)慣的變化，人乳頭瘤病毒(HPV)的感染呈上升趨勢，這使得宮頸癌的發(fā)生趨于輕齡化，現(xiàn)已證實99%宮頸癌是由HPV感染〔3〕。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進步，通過早期發(fā)現(xiàn)癌前病變并積極采取措施進行治療，可有效阻斷宮頸癌的發(fā)生。有研究認為結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(MACC)1、人原癌基因編碼蛋白(c-Met)在宮頸癌組織中的表達可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展及盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，本文就此進行闡述。

1　資料與方法

1. 1研究對象選擇我醫(yī)院2011年7月至2013年12月初發(fā)且術(shù)前未接受過放化療治療的所有宮頸癌手術(shù)患者116例，收集患者基礎(chǔ)信息、完整的臨床資料、患者的手術(shù)切除組織病理蠟塊。根據(jù)組織的性質(zhì)不同將其分為三組，其中正常宮頸組織組11例，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅱ～Ⅲ組織組15例，宮頸癌組90例。宮頸癌組患者年齡23～70〔平均(45. 65±8. 20)〕歲;按照2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)標準分級:其中IB1期26例，IB2期15例，ⅡA期27例，ⅡB期22例;低分化33例、高中分化57例;有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，無盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例;腺癌24例、鱗癌66例;高危型HPV陽性77例，陰性13例;所有標本均再次做蘇木素-伊紅(HE)染色，經(jīng)我院病理學(xué)專家明確診斷。所有研究標本的收集已告知患者并簽署知情同意書。

1. 2實驗試劑及實驗方法試劑:兔超敏二步法免疫組織化學(xué)檢測試劑盒、MACC1兔抗人多克隆抗體IgG(美國Sigma公司)、c-Met兔抗人多克隆抗體IgG(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)、磷酸鹽緩沖液(PBS)、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒、防脫載玻片、檸檬酸鹽緩沖液、中性樹膠、蘇木色、異丙醇、焦碳酸二乙酯(DEPC)水、無水酒精、三氯甲烷等。方法:將蠟塊進行連續(xù)切片，約3～5 μm。用免疫組化(SP)法進行檢測，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，陰性對照為PBS代替一抗，陽性對照為陽性組織石蠟切片。

1. 3結(jié)果判定在顯微鏡下觀察各種組織細胞的染色情況，陽性呈現(xiàn)棕黃色顆粒狀(或片狀者)，MACC1、肝細胞生長因子(HGF)、c-Met陽性的細胞胞質(zhì)均著色或部分胞膜著色。隨機選取光鏡下20個高倍視野，采用半定量計數(shù)法，每個顯微鏡視野計數(shù)100個細胞，計算陽性細胞數(shù)的百分比，取20個視野的平均值。參照顯色細胞所占的比例進行計分〔4〕。0分:沒有陽性細胞出現(xiàn); 1分:陽性細胞＜1/3; 2分:陽性細胞1/3～2/3; 3分:陽性細胞＞2/3。參照細胞染色的程度進行計分〔4〕; 0分:癌細胞沒有著色成功; 1分:淺黃色; 2分:棕黃色; 3分:黃褐色。結(jié)果判定積分=陽性細胞比例×染色強度，0分則判斷為陰性(－)，≥1分則判定為陽性(+)。

1. 4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS19. 0軟件進行χ2檢驗、Fisher確切概率法、Spearman等級相關(guān)檢驗和Logistic回歸分析。

2　結(jié)果

2. 1 MACC1、c-Met蛋白在正常宮頸、CINⅡ～Ⅲ以及宮頸癌組織中的表達情況三組之間MACC1、c-Met蛋白表達陽性率〔正常宮頸組織1例(9. 09%)，0例; CINⅡ～Ⅲ組織均為11例(73. 33%);宮頸癌組織72例(80. 00%)，74例(82. 22%)〕比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0. 05)。三組之間陽性率的兩兩比較，宮頸正常組織、CINⅡ～Ⅲ組織比較和正常宮頸組織、宮頸癌組織比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0. 05);但宮頸癌與CINⅡ～Ⅲ比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0. 05)。

2. 2 MACC1、c-Met蛋白在宮頸癌組織內(nèi)表達的相關(guān)性MACC1蛋白和c-Met蛋白在宮頸癌組織內(nèi)表達的陽性率分別為82. 22%、80. 00%。MACC1、c-Met蛋白的表達在宮頸癌組織內(nèi)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0. 648，P＜0. 05)。

2. 3 MACC1、c-Met蛋白與宮頸癌各臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)

經(jīng)單因素分析可知，MACC1、c-Met蛋白陽性表達以及分化程度、肌層浸潤深度、脈管浸潤可能是盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素(P＜0. 05)，年齡、組織類型、腫瘤直徑、臨床分期、HPV高危型不是盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素(P＞0. 05)。見表1。

2. 4影響因素的多因素Logistic回歸分析將可能是影響淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的因素納入多因素的Logistic回歸分析，MACC1蛋白陽性表達、肌層浸潤深度是影響盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的因素(OR= 6. 015，3. 901，P＜0. 05)。見表2。

表1　宮頸癌與盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的單因素分析〔n(%)〕

表2　影響因素的Logistic回歸分析

3　討論

MACC1蛋白是一種調(diào)控腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵基因，位于人類的7號常染色體上(7p21. 1)，其生物學(xué)功能廣泛，在調(diào)節(jié)細胞增殖、分化和存活等方面起著不可代替重要作用，是調(diào)節(jié)HGF/c-Met通路中Met基因的關(guān)鍵因子〔5〕。人體內(nèi)多種組織均有該基因的表達，如垂體、氣管、胃、腸、腎臟組織中有較高表達，但在肺、乳腺、胰腺、卵巢、骨髓等組織中表達較低〔6〕。HGF能刺激肝細胞和內(nèi)皮細胞生長及分泌，c-Met是HGF單一配體激活的原癌基因，MACC1蛋白通過結(jié)合c-Met啟動子，激活HGF/c-Met信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，使c-Met蛋白表達，結(jié)合HGF，HGF誘導(dǎo)MACC1蛋白從細胞質(zhì)進入細胞核。正常情況下，c-Met短暫結(jié)合HGF發(fā)揮生理作用〔7〕，但是在腫瘤細胞中過度表達的HGF和c-Met結(jié)合后，形成MACC1的正反饋效應(yīng)，從而引起細胞惡性增殖、黏膜上皮細胞轉(zhuǎn)化、血管生成、細胞運動加強、腫瘤細胞侵襲及轉(zhuǎn)移等〔8〕。有研究認為MACC1蛋白具有作為一種新的腫瘤診斷標志物的潛在價值〔5〕。MACC1蛋白在胃癌、結(jié)腸癌、肺癌和肝癌組織中均存在異常高表達，且在術(shù)后復(fù)發(fā)的肺癌、晚期結(jié)腸癌、有轉(zhuǎn)移潛能的胃癌、血管轉(zhuǎn)移的肝癌組織中MACC1的異常表達更加明顯，也與患者的預(yù)后聯(lián)系緊密，因此也可作為判定腫瘤轉(zhuǎn)移、預(yù)后的標志物〔9〕。

本實驗結(jié)果與周娜等〔4〕的實驗研究相符合。另外與文獻報道結(jié)果基本一致〔10〕。提示兩種蛋白在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中有重大意義，在將來臨床工作中對于兩種蛋白表達水平的檢測，可能幫助宮頸癌的及早發(fā)現(xiàn)，利于采取措施，阻斷其發(fā)生，并提高患者的預(yù)后及生存率。另外，本實驗與Serrano-Olvera等〔11〕研究結(jié)果相似，顯示組織分化越差、臨床分期越晚，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中MACC1、c-Met蛋白的表達就越異常。多因素分析，結(jié)果與張瑞濤等〔12〕的研究結(jié)果相似。

綜上所述，宮頸癌組織中MACC1、c-Met蛋白的表達有異常，其中MACC1蛋白陽性表達可作為評估宮頸癌在盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨立高危因素，臨床有重要的參考意義。

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〔2014-10-25修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

〔文章編號〕1005-9202(2015)20-5819-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2015. 20. 065

〔文獻標識碼〕A

〔中圖分類號〕R737. 33

第一作者:石琳(1974-)，女，主治醫(yī)師，主要從事婦產(chǎn)科方面的研究。