李　斐　(南陽醫(yī)學高等?？茖W校臨床醫(yī)學系，河南　南陽　473000)

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明目地黃丸對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜氧化損傷的保護作用

李斐(南陽醫(yī)學高等?？茖W校臨床醫(yī)學系，河南南陽473000)

〔摘要〕目的探討明目地黃丸對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜氧化損傷的保護作用。方法選擇雄性SD大鼠，給予大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病大鼠模型，分為模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組12只。同時選擇同批次大鼠12只，作為對照組。模型組和對照組不給藥，給予同體積雙蒸水灌胃。高、中、低劑量組分別在糖尿病大鼠喂養(yǎng)12 w后給予明目地黃丸灌胃。測定各組大鼠在給藥前、給藥后的體質(zhì)量、血糖和糖化血紅蛋白(HbA1c)。實驗結(jié)束后，取大鼠視網(wǎng)膜，測定視網(wǎng)膜超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量。結(jié)果模型組治療前、治療后的體質(zhì)量、血糖、HbA1c分別與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0. 01)。模型組SOD活性、GSH-Px酶活性、MDA含量與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0. 01);高、中、低劑量組SOD活性、GSH-Px酶活性、MDA含量分別與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0. 05)。結(jié)論明目地黃丸對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜起到保護作用，可能與其氧化損傷有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕糖尿病;視網(wǎng)膜;明目地黃丸;氧化損傷

糖尿病視網(wǎng)膜病變是糖尿病病程中的常見并發(fā)癥，隨著糖尿病的發(fā)病升高，糖尿病視網(wǎng)膜病變患者也隨著增多。尋找治療糖尿病視網(wǎng)膜病變藥物是目前研究的熱點之一。明目地黃丸是中藥制劑，主要成分是熟地黃、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉、枸杞子、菊花、當歸、白芍、蒺藜、石決明。本文采用鏈脲佐菌素(STZ)制成糖尿病大鼠模型，觀察明目地黃丸對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜的保護作用及其機制。

1　材料和方法

1. 1實驗動物選擇雄性SD大鼠，平均體重為(210±16)g，均購自華中科技大學同濟醫(yī)學院動物實驗中心，均采用標準大鼠飼料喂養(yǎng)，飼養(yǎng)間溫度濕度適宜。

1. 2主要儀器和試劑STZ來自Sigma公司;明目地黃丸由河南省宛西制藥股份有限公司生產(chǎn);超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等試劑盒購自南京建成生物工程研究所;血糖儀購自羅氏公司。

1. 3糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變模型建立和分組、給藥大鼠適應飼養(yǎng)5 d后實施禁食禁食12 h，以60 mg/kg劑量給予大鼠腹腔注射STZ，72 h后，采集大鼠尾靜脈血，測定大鼠血糖情況，大鼠靜脈血血糖超過16. 7 mmol/L作為糖尿病大鼠模型，而后喂養(yǎng)大鼠12 w，建立糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變模型。糖尿病大鼠喂養(yǎng)12 w后，分為四組:模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組12只。同時選擇同批次大鼠12只，作為對照組。模型組和對照組不給藥，給予同體積雙蒸水灌胃。高、中、低劑量組分別在糖尿病大鼠喂養(yǎng)12 w后給予明目地黃丸灌胃，每天劑量分別1 400 mg/kg、700 mg/kg、350 mg/kg，明目地黃丸在雙蒸水中溶解，制成混懸液灌胃。

1. 4指標測定

1. 4. 1測定各種大鼠不同時間的體質(zhì)量和血糖測定各組大鼠在給藥前、給藥后的體質(zhì)量、血糖和糖化血紅蛋白(HbA1c)情況，均為同一實驗人員測定和記錄結(jié)果。

1. 4. 2生化指標測定試驗結(jié)束后取大鼠眼球，對其視網(wǎng)膜進行剝離，在磷酸鹽(PBS)溶液中對所取組織進行研磨，直至成組織勻漿，加入PBS溶液適量后行離心，取上清液，測定其中的SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量。

1. 5統(tǒng)計學處理采用SPSS14. 0進行分析及t檢驗。

2　結(jié)果

2. 1各組大鼠給藥前后的體質(zhì)量、血糖和HbA1c測定模型組治療前、治療后的體質(zhì)量、血糖、HbA1c分別與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0. 01)。見表1。

2. 2各組大鼠視網(wǎng)膜的SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量測定結(jié)果模型組SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0. 01);高、中、低劑量組SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量分別與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0. 05)。見表2。

表1　各組大鼠給藥前后的體質(zhì)量、血糖和HbA1c測定結(jié)果(x ±s，n=12)

3　討論

在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機制中，氧化應激損傷、凋亡等機制參與其中，是多種機制參與下的損傷過程。由于糖尿病時，機體處于高血糖狀態(tài)，在多種損傷途徑刺激下，可導致線粒體的呼吸鏈及還原型輔酶Ⅱ(NADPH)氧化酶活性改變，導致細胞的氧自由基生存增多，導致機體的氧化應激反應程度增加，從而導致視網(wǎng)膜細胞發(fā)生氧化損傷〔1～3〕，而視網(wǎng)膜的SOD活性降低，GSH-Px活性降低，而MDA含量增加〔4，5〕。本文研究說明氧化應激損傷參與了糖尿病視網(wǎng)膜病變。明目地黃丸是中藥制劑，主要成分是熟地黃、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉、枸杞子、菊花、當歸、白芍、蒺藜、石決明。研究表明，明目地黃丸對白內(nèi)障有一定治療作用，其能夠提高晶狀體的抗氧化能力，減少脂質(zhì)過氧化反應，從而起到抗氧化損傷作用〔6，7〕。本文結(jié)果說明明目地黃丸能夠有效提高糖尿病大鼠視網(wǎng)膜的抗氧化損傷能力，能夠有效降低氧化應激對視網(wǎng)膜細胞損傷，對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜損傷起到保護作用。

4參考文獻

1高玉，吳晉暉，柳林.鏈脲佐菌素誘發(fā)性糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜病變模型的建立〔J〕．第二軍醫(yī)大學學報，2010; 31(10): 1053-9.

2王志新，徐高磊，王延芬.氧化應激和抗氧化劑在糖尿病并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展中可能的作用〔J〕．醫(yī)學研究雜志，2013; 4(2): 12-5.

3高宏杰，楊迎霞.中醫(yī)藥治療糖尿病視網(wǎng)膜病變研究進展〔J〕．遼寧中醫(yī)藥大學學報，2012; 8(3): 251-4.

4許麗娟.明目地黃丸合并法可林滴眼液治療早期老年白內(nèi)障臨床觀察〔J〕．海南醫(yī)學院學報，2012; 2(2): 243-4.

5肖培云，楊永壽，許嘉強.明目地黃丸中熊果酸含量測定方法比較〔J〕．大理學院學報，2010; 12(3): 4-6.

6張蕙，張榮春，倪誠.地黃類中成藥臨床應用辨析〔J〕．中華中醫(yī)藥雜志，2013; 7(2): 2178-81.

7趙和軍.明目地黃丸合生脈散治療肝腎陰虧型干眼癥療效觀察〔J〕．新中醫(yī)，2013; 7(4): 104-6.

〔2014-08-19修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

基金項目:河南省教育廳自然科學研究計劃項目(No．12B360019)

〔文章編號〕1005-9202(2015)20-5735-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2015. 20. 023

〔文獻標識碼〕A

〔中圖分類號〕R587. 1

第一作者:李斐(1977-)，女，碩士，副教授，主要從事糖尿病臨床研究。