冀德富，王小康，郭嫦娥，裴妙榮

（山西中醫(yī)學院，山西 太原 030024）

粉防己中粉防己堿和防己諾林堿的分離制備研究

冀德富，王小康，郭嫦娥，裴妙榮

（山西中醫(yī)學院，山西 太原 030024）

目的：建立粉防己中粉防己堿和防己諾林堿的分離制備方法。方法：采用柱色譜法對粉防己堿和防己諾林堿進行分離，采用薄層色譜法對粉防己堿和防己諾林堿的純化品進行定性鑒別，采用高效液相色譜法對其進行含量測定。結(jié)果：經(jīng)薄層色譜法鑒定粉防己堿與防己諾林堿的純化品與標準品圖譜一致；經(jīng)高效液相色譜法測定，所得樣品中粉防己堿和防己諾林堿的百分含量分別為100.97%和98.54%。結(jié)論：本方法簡便易行，所得粉防己堿與防己諾林堿純度高。關鍵詞 粉防己；粉防己堿；防己諾林堿；分離

粉防己（stephania tetrandra S.Moore）系防己科千金藤屬植物，又稱漢防己、土防己、白木香等，主產(chǎn)于浙江、廣東、廣西、安徽、福建等地，以干燥的根入藥，是我國常用的中藥材，味苦、性寒，歸膀胱、肺經(jīng)，具有利水消腫、祛風除濕、行氣止痛之效。常用于治療水腫腳氣、小便不利、濕疹瘡毒、風濕痹痛等病癥［1-3］。粉防己主要含有生物堿、黃酮、揮發(fā)油、多糖等成分，其中的生物堿類成分為其主要藥效物質(zhì)，含量達1%～2%。粉防己生物堿類主要有粉防己堿、防己諾林堿、輪環(huán)藤酚堿、防己菲堿、二甲基粉防己堿以及小檗胺等，結(jié)構(gòu)上屬于雙芐基異喹啉類生物堿的粉防己堿（C38H42N2O5）和防己諾林堿（C37H40N2O6）為其主要活性成分［4-6］。粉防己堿具有鎮(zhèn)痛、抗炎、降壓、抗矽肺、抗組織器官纖維化、抗心律失常、抗腫瘤、抗腫瘤細胞的多藥耐藥、神經(jīng)保護等廣泛的藥理作用［7-9］。防己諾林堿是一種天然的鈣拮抗劑，對多種疾病有顯著的治療效果，如具有廣譜消炎抗菌作用，抗高血壓、糖尿病、肝纖維化，對腦細胞具有保護作用等。近年來研究發(fā)現(xiàn)，它還有明顯的抗腫瘤作用，如對W.256、艾氏腹水癌S.45均有顯著的抑制作用，對κB細胞和Hela細胞也有抑制作用［10］。因此，粉防己堿和防己諾林堿是很重要的生物堿。本實驗以粉防己為原料，對其進行分離制備研究，為下一步的新制劑研發(fā)奠定基礎。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，MD100-1型電子分析天平（上海天平儀器廠）。粉防己堿對照品（批號：AS518-34-3）和防己諾林堿對照品（批號：AS 518-23-1）均購于成都思科華生物技術有限公司；乙腈、甲醇為色譜醇，乙醇、鹽酸等其他試劑均為分析醇。粉防己藥材購于山西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院草藥房，經(jīng)山西中醫(yī)學院牛燕珍老師鑒定為防己科千金藤屬植物粉防己的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 粉防己堿和防己諾林堿的分離制備

稱取粉防己粗粉300 g，加90%乙醇1 800 mL水浴回流提取1 h，過濾，藥渣再用90%乙醇1 000 mL水浴回流提取40 min，過濾，合并2次乙醇提取液，

回收乙醇至無醇味。

取乙醇提取物浸膏，加1%鹽酸約300 mL，攪拌，放置，過濾，濾渣用1%鹽酸50 mL分次洗滌，合并洗液和濾液后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加氯仿150 mL萃取，分取酸水層，滴加濃氨水調(diào)pH至9～10，加氯仿萃取3次，每次100 mL。合并氯仿液，用蒸餾水洗至近中性，加無水硫酸鈉脫水，過濾，濾液回收溶劑至干，得親脂性生物堿樣品。

稱取中性Al2O3（層析用）100 g，干法裝柱。將親脂性生物堿樣品溶于丙酮中，用8 g吸附劑Al2O3拌勻，揮去丙酮，研細，置于層析柱上，依次以環(huán)己烷、環(huán)己烷-丙酮（9∶1～1∶1）進行梯度洗脫，收集流份，每份約30 mL，合并相同流份，其中用環(huán)己烷-丙酮（4∶1）洗脫的7個流份，經(jīng)薄層色譜鑒定，斑點單一。水浴回收溶劑，用適量丙酮溶解，放置，析出的結(jié)晶即為粉防己堿純化品。用環(huán)己烷-丙酮（3∶2）洗脫的6個流份，經(jīng)薄層色譜鑒定，斑點單一。水浴回收溶劑，用適量丙酮溶解，放置，析出的結(jié)晶即為防己諾林堿純化品。

2.2 粉防己堿和防己諾林堿的薄層鑒定

精密稱取1.0 mg的粉防己堿純化品，加甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液；另取粉防己堿對照品，加甲醇溶解，制成1 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法（2010版中國藥典一部附錄ⅥB）實驗，分別吸取5 μL溶液點于同一硅膠G薄層板，共點制3塊相同的硅膠G薄層板，分別用3種展開劑：A：氯仿－丙酮（1∶1），B：環(huán)己烷-丙酮（2∶3），C：氯仿-甲醇（6∶0.5），濃氨水飽和15 min，展開，取出，晾干，噴改良碘化鉍鉀試劑顯色，結(jié)果見圖1。

圖1 粉防己堿的硅膠薄層色譜圖

同法制備防己諾林堿的供試品溶液和對照品溶液，進行薄層點樣，分別用3種展開劑：A：氯仿-丙酮（2∶3），環(huán)己烷-丙酮（1∶1），C：氯仿-甲醇（6∶1），濃氨水飽和15min，展開，取出，晾干，噴改良碘化鉍鉀試劑顯色，結(jié)果見圖2。

圖2 防己諾林堿的硅膠薄層色譜圖

由薄層色譜圖1、圖2可知，粉防己堿和防己諾林堿的純化品與其對照品在3種不同的展開劑中展開的圖譜一致，均顯一個斑點。說明本實驗建立的分離制備方法得到的樣品均比較純。

2.3 粉防己堿和防己諾林堿純化品的含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：依利特Hypersil BDS C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：25℃；檢測波長：277 nm；流速：1.0 mL/min；流動相：乙腈-甲醇-0.2%二乙胺（35∶35∶30）。在此條件下，粉防己堿對照品、粉防己堿供試品、防己諾林堿對照品、防己諾林堿供試品的色譜圖見圖3～圖6。

圖3 粉防己堿標準品色譜圖

圖4 粉防己堿供試品色譜圖

圖5 防己諾林堿標準品色譜圖

圖6 防己諾林堿供試品色譜圖

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取粉防己堿對照品2.17 mg，加甲醇溶解定容至10 mL量瓶中，搖勻，即得。同樣，精密稱取防己諾林堿對照品2.0 mg，同法制得防己諾林堿對照品液。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取粉防己堿純化品2.56 mg，加甲醇溶解定容至10 mL量瓶中，搖勻，即得。同樣，精密稱取防己諾林堿純化品2.51 mg，同法制得防己諾林堿供試品溶液。

2.3.4 標準曲線繪制 分別精密吸取粉防己堿對照品液（0.256 mg/mL）和防己諾林堿對照品液（0.251 mg/mL）4 μL、8 μL、10 μL、12 μL、15 μL、20 μL，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積A為縱坐標，進樣量C為橫坐標，繪制標準曲線，計算粉防己堿的回歸方程：A=295 145C+12 563，相關系數(shù)r=0.999 7，結(jié)果顯示粉防己堿在0.868 μg～4.34 μg范圍進樣量與峰面積呈良好的線性關系。同法得到防己諾林堿的回歸方程：A=327 619C+127 956，相關系數(shù)r=0.999 6，結(jié)果顯示防己諾林堿在0.80 μg～4.00 μg范圍進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.5 樣品測定 分別取“2.3.3”項下的粉防己堿和防己諾林堿供試品溶液各10 μL，注入HPLC儀進行測定，記錄各供試液的峰面積，計算兩者的含量。結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定

由表1可知，本實驗分離得到的樣品純度高，粉防己堿的平均含量為100.97%，防己諾林堿的平均含量為98.54%。

3 討 論

本實驗建立的醇提→酸溶→氨水堿化→氯仿萃取→Al2O3柱色譜法分離制備粉防己中的粉防己堿和防己諾林堿，具有操作簡便，所得樣品純度高等特點。采用高效液相法測定粉防己堿和防己諾林堿的含量，方法精確、靈敏、線性范圍寬，準確度高。實驗中測得樣品粉防己堿和防己諾林堿的百分含量分別為100.97%和98.54%，純度很高，其含量均達到98%以上，可以用來代替對照品測定物質(zhì)含量和滿足其他特殊試劑的需要。

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（編輯：張世霞）

The preparation of tetrandrine and fangchinoline extracted from stephania tetrandrs S.Moore

Ji Defu，Wang Xiaokang，Guo Chang′e，Pei Miaorong
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To establish a method of separating and preparing tetrandrine and fangchinoline from stephania tetrandra S.Moore.Methods：Tetrandrine and fangchinoline were isolated by column chromatography，and then were identified by TLC.The contents of tetrandrine and fangchinoline were determined by HPLC.Results：The chromatograms of the purified product of tetrandrine and fangchinoline were consistent with the standard product.The contents of tetrandrine and fangchinoline in sample were 100.97%，98.54%respectively.Conclusion：This method is simple and practical.The products are very pure.

stephania tetrandra S.Moore；tetrandrine；fangchinoline；separation

R284.2

A

1671-0258（2015）05-0027-03

冀德富，碩士，講師，E-mail：jdfaaa@126.com

裴妙榮，教授，博士生導師，E-mail：peimr602@163.com