王留霞

(鄢陵縣人民醫(yī)院兒科，河南 許昌461000)

Wang Liuxia

(Department of Pediatrics，the People’s Hospital of Yanling，Xuchang 461000，China)

Survivin 和Livin 蛋白均是凋亡抑制蛋白家族成員，在多種腫瘤中均存在高表達(dá)，對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移等具有明顯促進(jìn)作用［1］。為進(jìn)一步探討兒童急性白血病的發(fā)病機(jī)制，并為兒童急性白血病治療新方法的探討提供依據(jù)，作者采用免疫組化S-P 法檢測了89 例初診急性白血病患兒中Survivin 和Livin 蛋白的表達(dá)，并探討兩者之間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集鄭州市兒童醫(yī)院和鄢陵縣人民醫(yī)院2010年1月至2014年12月收治的經(jīng)臨床病理確診的急性白血病患兒89 例，均為初診患者，其中男49 例，女40 例;年齡9 個月～14 歲，中位年齡7.5 歲;急性淋巴細(xì)胞白血病58 例，急性髓細(xì)胞白血病31 例。收集同期住院的30 例非惡性血液病患兒作為對照，其中男17 例，女13 例;年齡2 ～15 歲，中位年齡8 歲;疾病類型:特發(fā)性血小板減少性紫癜21 例，營養(yǎng)性貧血9 例)。2 組性別、年齡等基本資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)，具有可比性。

1.2 免疫組化S-P 法檢測Survivin 和Livin 蛋白 2組所有患兒均抽取骨髓標(biāo)本，經(jīng)涂片、自然晾干后，用乙醇乙醚液固定，室溫晾干，保存于－30 ℃冰箱中待測。然后采用免疫組化S-P 法檢測骨髓細(xì)胞中Survivin 和Livin 蛋白表達(dá)情況，操作步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行，并以PBS 液代替一抗作為對照。Survivin和Livin 蛋白鼠抗人單克隆抗體及S-P 免疫組化試劑盒等均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 結(jié)果判定 以細(xì)胞被染成棕黃色且紅細(xì)胞及背景不著色為陽性，高倍鏡(×400)下觀察1 000 個細(xì)胞，計數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)，＜5%為陰性，≥5%為陽性［3］。

1.4 化療方案選擇及療效評估 急性淋巴細(xì)胞白血病采用VDLP 方案(長春新堿、柔紅霉素、門冬酰胺酶、強(qiáng)的松)方案進(jìn)行誘導(dǎo)緩解化療，急性髓細(xì)胞白血病采用DAE 方案(柔紅霉素、阿糖胞苷、VP16)或HAD(高三尖衫酯堿、阿糖胞苷、柔紅霉素)方案進(jìn)行誘導(dǎo)緩解治療?；煰熜Х譃橥耆徑?、部分緩解、未緩解，以完全緩解+部分緩解計算緩解率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0 進(jìn)行統(tǒng)計分析，率的比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析選用Pearson 相關(guān)性分析方法，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 初診急性白血病患兒Survivin 和Livin 蛋白表達(dá)情況 初診急性白血病患兒Survivin 和Livin 蛋白表達(dá)陽性率分別為67.4%、69.7%，高于非惡性血液病患兒的6. 7%、13. 3% (χ2= 33. 180、28. 281，P ＜0.05)。見表1。

表1 初診急性白血病患兒Survivin 和Livin 蛋白表達(dá)情況n(%)

2.2 初診急性白血病患兒Survivin 和Livin 蛋白表達(dá)的相關(guān)性 初診急性白血病患兒Survivin 和Livin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r =0. 428，P ＜0. 05)。見表2。

表2 初診急性白血病患兒Survivin 和Livin 蛋白表達(dá)的相關(guān)性

2.3 初診急性白血病患兒Survivin 和Livin 蛋白表達(dá)與化療緩解率的關(guān)系 所有確診白血病患兒接受白血病化療方案的常規(guī)化療后，Survivin 和Livin 蛋白陽性患 兒 緩 解 率 分 別 為45. 0% (27/60)、46. 8%(29/62)，低于Survivin 和Livin 蛋白陰性患兒的93.1% (27/29)、96. 3% (26/27)(χ2= 18. 960、19.536，P ＜0.05)。

3 討論

白血病是嚴(yán)重威脅人類健康生命安全的血液系統(tǒng)惡性克隆性疾病，血液學(xué)指標(biāo)以白血病細(xì)胞的失控性增殖為主要表現(xiàn)，正常的造血功能受到抑制。近年來，隨著環(huán)境污染的加重，白血病的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且有低齡化趨勢，兒童白血病的發(fā)病率明顯增多。研究［2］證實(shí)，細(xì)胞凋亡的異常是在白血病的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用，細(xì)胞凋亡抑制的發(fā)生是導(dǎo)致機(jī)體白細(xì)胞水平的急劇上升的關(guān)鍵。

細(xì)胞凋亡蛋白是整個細(xì)胞凋亡控制系統(tǒng)的關(guān)鍵控制因素，包括促進(jìn)凋亡的蛋白和抑制凋亡的蛋白。其中凋亡抑制蛋白是抑制細(xì)胞凋亡的一類蛋白，該蛋白氨基末端均包含一個BIR 結(jié)構(gòu)，該蛋白水平異常升高導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的不足，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展［3］。Survivin 和Livin 均是凋亡抑制蛋白家族的重要成員。Survivin 的相對分子質(zhì)量為16 500，為相對分子質(zhì)量最小的凋亡抑制蛋白，主要通過與其他蛋白結(jié)合形成染色體通道蛋白復(fù)合體參與調(diào)控紡錘體的組裝和細(xì)胞周期檢測點(diǎn)的調(diào)控［4］。于廣倩等［5］的研究發(fā)現(xiàn)，Survivin 蛋白在急性白血病的骨髓細(xì)胞中存在高表達(dá)，明顯高于非血液病患者，且白血病的急性期Survivin 蛋白表達(dá)水平高于緩解期。Livin 蛋白分為Livinα 和Livinβ，兩者在人體內(nèi)的表達(dá)部位及水平具有明顯差異。Livin 蛋白主要通過與其下游效應(yīng)分子Caspase 結(jié)合形成復(fù)合物發(fā)揮抗凋亡作用，主要Caspase 分子為Caspase3 和Caspase7［6］。Livin 蛋白特異性表達(dá)于人的胚胎組織、胎盤組織以及大多數(shù)人類實(shí)體瘤細(xì)胞，在胎兒發(fā)育過程中多種組織高表達(dá)，如胸腺、腦、腎和肝;在正常成人體內(nèi)，Livin 蛋白主要表達(dá)于心臟、肺、腦、脾、卵巢、骨骼肌和淋巴細(xì)胞，但表達(dá)水平較低［7］。馬彩云等［8］研究發(fā)現(xiàn)，Livin 蛋白在急性白血病患兒骨髓細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于非惡性血液病患兒，且陽性表達(dá)Livin 蛋白的急性白血病患兒的緩解率明顯低于陰性表達(dá)Livin 蛋白的患兒。

本文結(jié)果顯示，初診急性白血病患兒Survivin 和Livin 蛋白表達(dá)陽性率分別為67.4%、69.7%，高于非惡性血液病患兒的6.7%、13.3%，提示急性白血病患兒體內(nèi)存在Survivin 和Livin 蛋白的高表達(dá)。初診急性白血病患兒Survivin 和Livin 蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，提示在白血病的發(fā)生發(fā)展過程中可能具有協(xié)同促進(jìn)作用。Survivin 和Livin 蛋白陽性患兒緩解率分別為45.0%、46.8%，低于Survivin 和Livin 蛋白陰性患兒，提示Survivin 和Livin 蛋白陽性表達(dá)患兒可能對化療不甚敏感。本研究以往研究［6－9］報道的結(jié)果相似。

總之，Survivin 和Livin 蛋白在初診急性白血病患兒中高表達(dá)，可能協(xié)同參與了兒童急性白血病的發(fā)生、發(fā)展，兩者聯(lián)合檢測可用于兒童急性白血病的輔助診斷，而且根據(jù)本文關(guān)于化療緩解率與Survivin 和Livin蛋白緩表達(dá)情況的關(guān)系研究也可為兒童急性白血病的化療方案選擇提供一定的參考依據(jù)。

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