方詩(shī)琦， 冷 康， 段金廒，2， 李存玉，2， 魏娟花， 鄭云楓，2， 彭國(guó)平，2*

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京210023；2.江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇南京210023）

甘草藥渣中黃酮類(lèi)成分及其抗氧化活性的研究

方詩(shī)琦1， 冷 康1， 段金廒1，2， 李存玉1，2， 魏娟花1， 鄭云楓1，2， 彭國(guó)平1，2*

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京210023；2.江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇南京210023）

目的 研究甘草藥渣中黃酮類(lèi)成分及其抗氧化活性，為其資源再利用提供依據(jù)。方法 甘草藥渣提取液中的黃酮成分采用硅膠、C18中壓反相柱色譜和重結(jié)晶進(jìn)行分離純化，波譜分析進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，然后其抗氧化活性采用1，1-二苯基-2-苦肼基 （DPPH）自由基清除及酪氨酸酶抑制實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定。結(jié)果 從中分離鑒定出10個(gè)黃酮類(lèi)化合物，分別為甘草查爾酮甲 （1）、異甘草素 （2）、甘草黃酮C（3）、甘草黃酮 （4）、甘草異黃酮乙 （5）、光甘草酮 （6）、甘草素 （7）、半甘草異黃酮B（8）、甘草異黃酮甲 （9）、芒柄花素 （10）。其中，化合物1、2、5、6清除DPPH自由基作用相對(duì)較強(qiáng)，IC50分別為27.9、61.0、18.2、26.0μg/mL；化合物1～3能較顯著地抑制酪氨酸酶，IC50分別為60.3、4.9、54.9μg/mL。結(jié)論 甘草藥渣中仍含有多種具抗氧化活性的黃酮類(lèi)化合物，應(yīng)進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。

甘草；藥渣；黃酮；抗氧化活性；DPPH自由基；酪氨酸酶

甘草是豆科植物烏拉爾甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflate Bat.和光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根莖［1］，富含三萜和黃酮類(lèi)成分，為常用中藥材。但每年僅甘草制劑及其提取物的消耗量就達(dá)近萬(wàn)噸，由此產(chǎn)生了大量廢棄藥渣，而其往往被直接填埋，導(dǎo)致浪費(fèi)寶貴資源［2］。

目前，甘草在工業(yè)化生產(chǎn)中大多采用水煎煮提取，使得大量脂溶性黃酮類(lèi)物質(zhì)仍殘留在廢棄藥渣中。研究表明，甘草藥渣中的黃酮類(lèi)成分具有良好的抗氧化活性，但目前人們大多僅集中在粗提物或異甘草素、光甘草定等少量化合物［3-4］。實(shí)際上，甘草藥渣中除了這幾種常見(jiàn)黃酮類(lèi)成分外，還含有許多其它類(lèi)型，包括查耳酮（Chalcones）、異黃酮（Isoflavones）、二氫黃酮（Flavanones）等［5-6］，而且從構(gòu)效關(guān)系角度上看，它們也很可能存在較好的抗氧化活性。

本實(shí)驗(yàn)從資源綜合開(kāi)發(fā)利用方面著手，采用中藥資源化學(xué)研究思路與方法，對(duì)甘草藥渣廢棄物中的黃酮類(lèi)活性成分進(jìn)行了研究，并采用體外DPPH自由基清除以及酪氨酸單酚酶抑制實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)行抗氧化活性篩選，旨在發(fā)現(xiàn)甘草藥渣中的抗氧化物質(zhì)，為其進(jìn)一步研究利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

JCS-1000電子天平 （浙江凱豐集團(tuán)有限公司）；分析天平 （十萬(wàn)分之一，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；Bruker ACF-300、ASR-500核磁共振儀（德國(guó)Bruker公司）；Agilent1200 HPLC-QTOF-MS、Agilent 1100 HPLC-TOF-MS質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent Technologies公司）；SPECTRA MAX 190酶標(biāo)儀（美國(guó)AD公司）；96孔板（美國(guó)Costar公司）。柱色譜硅膠H（200～300目，青島海洋化工有限公司）；C18填料 （德國(guó)Merck公司）。甘草素對(duì)照品 （四川省維克奇生物科技有限公司，批號(hào)100706，純度 ＞98%）；1，1-二苯基-2-苦肼基（DPPH）、蘑菇酪氨酸酶（1 000 U/mg）（美國(guó)Sigma公司）；維生素C（VC）、熊果苷 （純度＞98%）、L-酪氨酸（L-Tyrosine）、二甲亞砜（DMSO）（南京賽研生物技術(shù)有限公司）。所用試劑均為分析純 （國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

甘草購(gòu)自新疆和靜縣，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)嚴(yán)輝副教授鑒定為光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根莖，符合 《中國(guó)藥典》2010年版項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法

2.1 甘草藥渣的制備 按 《中國(guó)藥典》2010年版“甘草浸膏”項(xiàng)下的提取方法［1］，取甘草藥材 5 kg，加水煎煮3次，每次2 h，濾過(guò)，晾干，即得。

2.2 藥渣中黃酮類(lèi)成分的提取與分離 取 “2.1”項(xiàng)下甘草藥渣，95%乙醇加熱回流提取2次，每次2 h，合并濾液，減壓濃縮至無(wú)醇味，濃縮液加水稀釋至含生藥量0.25 g/mL，共80 L，乙酸乙酯萃取 （體積比為1：1）2次，減壓回收，得到浸膏約200.0 g。然后，將浸膏以硅膠拌樣 （質(zhì)量比為1：1），硅膠柱層析分離，CH2Cl2-MeOH梯度洗脫（500：1→5：1），TLC檢測(cè)合并，反復(fù)套用硅膠、C18中壓反相柱色譜和重結(jié)晶，得到化合物1（600 mg）、2（150 mg）、3（140 mg）、4（150 mg）、5（500 mg）、6（250 mg）、7（160 mg）、8（6 mg）、9（6 mg）、10（25 mg）。

2.3 抗氧化活性評(píng)價(jià)

2.3.1 DPPH自由基的清除活性 在96孔板中加入新鮮配制的0.14 mmo1/L DPPH乙醇溶液100 μL，再加入以無(wú)水乙醇配制的不同濃度待測(cè)溶液各100μL，混勻，室溫下避光靜置30 min。以無(wú)水乙醇為參比溶液，測(cè)定其在517 nm波長(zhǎng)下的吸光度 （A1）；以無(wú)水乙醇等量替換待測(cè)溶液為空白對(duì)照，測(cè)定其吸光度 （A0）；以樣品溶液與無(wú)水乙醇各100μL的混合溶液為樣品對(duì)照，測(cè)定其吸光度 （A2），用來(lái)消除樣品本身顏色所產(chǎn)生的誤差，并以VC作為陽(yáng)性對(duì)照，平行3次，分別計(jì)算清除率，計(jì)算公式如下（參考Naciye Erkan等［7］報(bào)道，并做了相應(yīng)改動(dòng)）。

2.3.2 酪氨酸酶的抑制活性 通過(guò)前期考察，確定了該反應(yīng)體系的溫度及各反應(yīng)液的濃度和體積。本實(shí)驗(yàn)總反應(yīng)體系為200μL，向96孔板中依次加入酶液、磷酸鹽緩沖液PBS（0.067 mol/L，pH為6.8）和DMSO，配制成不同濃度梯度的受試液（包括陽(yáng)性對(duì)照）各40μL，32℃下水浴5 min。然后，加入底物L(fēng)-酪氨酸（2 mmo1/L）80μL，充分混勻后立即開(kāi)始計(jì)時(shí)，見(jiàn)表1。接著，測(cè)定反應(yīng)40 min時(shí)475 nm波長(zhǎng)下的吸光度，平行3次，以相應(yīng)的陰性對(duì)照為參比溶液，計(jì)算受試溶液 （包括陽(yáng)性對(duì)照）對(duì)酪氨酸酶的抑制率，計(jì)算公式如下，并依據(jù)濃度酶抑制率曲線估算IC50的近似值（參考傅博強(qiáng)等［8］報(bào)道，并做了相應(yīng)改動(dòng)）。

注：AA、AB、AC和AD分別對(duì)應(yīng)A組、B組、C組和D組反應(yīng)體系測(cè)定的吸光度。

表1 總反應(yīng)體系Tab.1 TotaIreaction system

3 結(jié)果

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定 具體結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

圖1 化合物1～10的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of com pounds 1-10

化合物1：橙黃色針狀結(jié)晶（甲醇），HR-ESIMS m/z：339.159 0［M+H］+，分子式C21H22O4，計(jì)算值339.159 1。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：10.28（1H，s，4-OH），10.10（1H，s，4′-OH），7.52（1H，s，H-6），6.52（1H，s，H-3），7.89（1H，d，J=15.0 Hz，H-β），7.58（1H，d，J=15.0 Hz，H-α），7.97（2H，d，J= 8.7 Hz，H-2′，6′），6.88（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），6.24（1H，dd，J=17.8，10.3 Hz，H-2″），4.95（1H，d，J=17.8 Hz，H-3″），4.92（1H，d，J=10.3 Hz，H-3″），1.45（6H，s，H-4″，5″），3.83（3H，s，2-OCH3）。13C-NMR（DMSO-d6，300MHz）δ：113.5（C-1），158.2（C-2），99.9（C-3），159.6（C-4），126.5（C-5），127.7（C-6），187.3（C=O），117.8（C-α），138.7（C-β），129.6（C-1′），130.6（C-2′，6′），115.2（C-3′，5′），161.6（C-4′），39.5（C-1″），147.5（C-2″），109.9（C-3″），26.9（C-4″，5″），55.4（2-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為甘草查爾酮甲（licochalcone A）。

化合物2：黃色針晶 （甲醇），HR-ESI-MS m/z：257.080 5［M+H］+，分子式C15H12O4，計(jì)算值257.080 8。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz）δ：13.55（1H，s，2′-OH），6.25（1H，d，J=2.1 Hz，H-3′），6.38（1H，d，J=8.9，2.1 Hz，H-5′），8.12（1H，d，J=8.9 Hz，H-6′），7.73（4H，overlapped，H-2，6，α，β），6.82（2H，d，H-3，5）。13C-NMR（DMSO-d6，300 MHz）δ：112.9（C-1′），165.8（C-2′），102.5（C-3′），165.4（C-4′），108.0（C-5′），132.7（C-6′），191.5（C=O），117.4（C-α），144.2（C-β），125.7（C-1），131.1（C-2，6），115.8（C-3，5），160.3（C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物2為異甘草素（isoliquiritigenin）。

化合物3：淡黃色粉末（甲醇），HR-ESI-MS m/z：339.122 8［M+H］+，分子式C20H18O5，計(jì)算值339.122 7。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：12.88（1H，s，5-OH），10.70（1H，s，7-OH），10.36（1H，s，4′-OH），6.28（1H，s，H-6），7.89（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′），6.93（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），6.75（1H，s，H-3），3.43（2H，d，J=6.1 Hz，H-1″），5.19（1H，t，J=6.1 Hz，H-2″），1.63（3H，s，H-4″），1.76（3H，s，H-5″）。13C-NMR（DMSO-d6，300 MHz）δ：163.6（C-2），102.6（C-3），182.0（C-4），103.6（C-4a），159.0（C-5），98.3（C-6），161.5（C-7），106.0（C-8），154.4（C-8a），121.5（C-1′），128.2（C-2′，6′），115.9（C-3′，5′），161.0（C-4′），21.3（C-1″），122.4（C-2″），130.9（C-3″），25.3（C-4″），17.7（C-5″）。以上

數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3為甘草黃酮C（licoflavone C）。

化合物4：淡黃色針晶（甲醇），HR-ESI-MS m/z：323.127 8［M+H］+，分子式C20H18O4，計(jì)算值323.127 8。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：10.81（1H，s，7-OH），10.21（1H，s，4′-OH），7.66（1H，s，H-5），6.97（1H，s，H-8），7.88（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），6.69（1H，s，H-3），3.29（2H，d，J=7.3 Hz，H-1″），5.32（1H，t，J=7.3 Hz，H-2″），1.73（3H，s，H-4″），1.68（3H，s，H-5″）。13C-NMR（DMSO-d6，300 MHz）δ：162.2（C-2），104.4（C-3），176.2（C-4），115.8（C-4a），124.5（C-5），127.2（C-6），160.3（C-7），101.7（C-8），155.6（C-8a），121.9（C-1′），127.9（C-2′，6′），115.8（C-3′，5′），160.5（C-4′），27.5（C-1″），121.8（C-2″），132.3（C-3″），25.5（C-4″），17.6（C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為甘草黃酮（licoflavone）。

化合物5：淡黃色粉末（甲醇），HR-ESI-MS m/z：353.102 4［M+H］+，分子式C20H16O6，計(jì)算值353.102 0。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：12.85（1H，s，5-OH），10.83（1H，s，7-OH），8.85（1H，s，2′-OH），6.23（1H，d，J=1.9 Hz，H-6），6.40（1H，d，J=1.9 Hz，H-8），6.33（1H，d，J=8.3 Hz，H-5′），6.89（1H，d，J=8.3 Hz，H-6′），8.18（1H，s，H-2），5.68（2H，d，J=10.0 Hz，H-3″），6.67（1H，d，J=10.0 Hz，H-4″），1.38（6H，s，H-5″，6″）。13C-NMR（DMSO-d6，300 MHz）δ：155.7（C-2），120.5（C-3），180.6（C-4），104.6（C-4a），161.8（C-5），98.8（C-6），164.1（C-7），93.6（C-8），157.7（C-8a），111.2（C-1′），151.2（C-2′），109.7（C-3′），153.6（C-4′），107.4（C-5′），131.3（C-6），75.4（C-2″），128.8（C-3″），116.9（C-4″），27.4（C-5″，6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為甘草異黃酮乙（licoisoflavone B）。

化合物6：淡黃色結(jié)晶（甲醇），HR-ESI-MS m/z：337.107 1［M+H］+，分子式C20H16O5，計(jì)算值337.107 1。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.98（1H，d，J=8.8 Hz，H-5），6.97（1H，dd，J=8.8，1.9 Hz，H-6），6.91（1H，d，J= 1.9 Hz，H-8），其他波譜數(shù)據(jù)與化合物5基本相同，而且與文獻(xiàn)［14］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物6為光甘草酮（glabrone）。

化合物7：白色針晶 （甲醇）。HPLC分析發(fā)現(xiàn)，該化合物與甘草素對(duì)照品的Rf值一致，故鑒定化合物7為甘草素（liquiritigenin）。

化合物8：淡黃色粉末（甲醇），HR-ESI-MS m/z：353.101 2［M+H］+，分子式C20H16O6，計(jì)算值353.096 1。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.90（1H，d，J=1.5 Hz，H-2′），6.71（1H，d，J=1.5 Hz，H-6′），其他波譜數(shù)據(jù)與化合物5基本相同，而且與文獻(xiàn)［13，15］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物8為半甘草異黃酮B（semilicoisoflavone B）。

化合物9：黃色粉末 （甲醇），HR-ESI-MS m/z：355.117 8［M+H］+，分子式C20H18O6，計(jì)算值355.117 6。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：3.24（2H，d，J=6.9 Hz，H-1″），5.17（1H，t，J=6.9 Hz，H-2″），1.60（3H，s，H-4″），1.70（3H，s，H-5″）。13C-NMR（DMSO-d6，300 MHz）δ：22.3（C-1″），123.5（C-2″），129.4（C-3″），25.3（C-4″），17.7（C-5″），其他波譜數(shù)據(jù)與化合物5基本相同，而且與文獻(xiàn)［16］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物9為甘草異黃酮甲（licoisoflavone A）。

化合物10：黃色針晶（甲醇），HR-ESI-MS m/z：269.080 6［M+H］+，分子式C16H12O4，計(jì)算值269.080 8。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz）δ：10.75（1H，s，7-OH），7.96（1H，d，J=8.8 Hz，H-5），6.92（1H，dd，J=8.8，2.0 Hz，H-6），6.87（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），7.49（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′），6.97（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），8.31（1H，s，H-2），3.77（3H，s，4′-OCH3）。13C-NMR（DMSO-d6，300 MHz）δ：153.0（C-2），124.2（C-3），174.5（C-4），127.2（C-4a），116.6（C-5），115.0（C-6），162.5（C-7），102.0（C-8），158.9（C-8a），123.1（C-1′），130.0（C-2′，6′），113.5（C-3′，5′），157.4（C-4′），55.1（4′-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物10為芒柄花素（formononetin）。

3.2 化合物對(duì)DPPH自由基的清除作用 自由基消除反應(yīng)是抑制機(jī)體過(guò)氧化過(guò)程的主要機(jī)制之一，待測(cè)物對(duì)自由基的消除能力反映了其抗氧化活性的

高低，而DPPH可通過(guò)自身顏色消褪程度來(lái)反映樣品的自由基消除能力和抗氧化活性［18］。本實(shí)驗(yàn)表明，不同黃酮類(lèi)化合物所表現(xiàn)出的清除活性也不同，并呈濃度依賴關(guān)系，見(jiàn)圖2。其中，具有異黃酮和查爾酮類(lèi)結(jié)構(gòu)的化合物1、2、5、6清除DPPH自由基的活性較強(qiáng)，見(jiàn)表2。 3.3 化合物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用 黃酮類(lèi)化合物大部分是競(jìng)爭(zhēng)型抑制劑，一般在結(jié)構(gòu)上與被抑制酶的底物結(jié)構(gòu)完全或部分相似［19］，能與底物競(jìng)爭(zhēng)酶活性部位。因此，不同黃酮類(lèi)化合物對(duì)酪氨酸酶的作用也不同，可能是由于酶活性所催化底物分子結(jié)構(gòu)的差異。由表3可知，化合物1-3對(duì)酪氨酸酶的抑制作用 （即抗氧化活性）較強(qiáng)，IC50分別為60.3、4.9、54.9μg/mL，明顯強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照熊果苷。

圖2 甘草中黃酮類(lèi)化合物對(duì)DPPH自由基的影響Fig.2 Effects of fIavonoids in Glycyrrhiza glabra L.on DPPH·free radicaIs

表2 化合物1～7對(duì)DPPH自由基清除的IC50值n=3）Tab.2 IC50vaIues of compounds 1-7 on scavenging DPPH radica

表2 化合物1～7對(duì)DPPH自由基清除的IC50值n=3）Tab.2 IC50vaIues of compounds 1-7 on scavenging DPPH radica

化合物 IC50/（μg.mL-1） 化合物 IC50/（μg.m L-1）1 27.9±1.7 5 18.2±1.9 2 61.0±1.6 6 26.0±2.0 3 212.9±1.0 7 ＞300 4＞300 維生素C 3.0±0.1

表3 化合物1～7抑制酪氨酸酶的IC50值Tab.3 IC50vaIues of com pounds1-7 on inhibiting tyrosinase

表3 化合物1～7抑制酪氨酸酶的IC50值Tab.3 IC50vaIues of com pounds1-7 on inhibiting tyrosinase

化合物 IC50/（μg.mL-1） 化合物 IC50/（μg.m L-1）1 60.3±2.1 5 ＞200 2 4.9±0.2 6 ＞200 3 54.9±1.9 7 ＞200 4＞200 熊果苷 185.8±2.5

4 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，從甘草藥渣中分離所得的黃酮類(lèi)成分均表現(xiàn)出一定的抗氧化活性，其中化合物1～3、5、6的活性相對(duì)較強(qiáng)。另外，異黃酮類(lèi)化合物5和6對(duì)DPPH自由基的清除作用比其它類(lèi)型成分更強(qiáng)，而且A環(huán)上具有5-OH時(shí)可進(jìn)一步增強(qiáng)活性。更重要的是，若延長(zhǎng)黃酮類(lèi)成分母核的共軛體系，可有利于其結(jié)構(gòu)的共軛平面，使B環(huán)失電子后形成更穩(wěn)定的自由基，從而中斷鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，可顯著增強(qiáng)DPPH自由基清除作用和抗氧化活性。然而，當(dāng)雙鍵被還原時(shí)，會(huì)導(dǎo)致共軛體系縮短，分子平面結(jié)構(gòu)改變，不利于黃酮類(lèi)物質(zhì)的抗氧化活性，如化合物7的C-2、C-3位雙鍵被還原，使其抗氧化作用明顯減弱。

此外，查爾酮類(lèi)化合物1和2對(duì)酪氨酸酶的抑制作用較顯著。研究表明［20-21］，查爾酮屬于開(kāi)鏈黃酮，柔韌性較強(qiáng)，能與不同受體結(jié)合，其中查耳酮母核B環(huán)上的4-OH與底物L(fēng)-酪氨酸芳環(huán)上的-OH相似，從而容易與酶活性中心結(jié)合，對(duì)酶產(chǎn)生抑制。同時(shí)，結(jié)構(gòu)中異戊二烯基取代位置也與抗氧化活性有一定關(guān)系，化合物3中的8位異戊二烯基對(duì)DPPH自由基的清除及酪氨酸酶的抑制效果強(qiáng)于化合物4中的6位，推測(cè)8位含異戊二烯基化合物的空間位阻比6位小，有利于其發(fā)揮抗氧化作用。因此，甘草中黃酮類(lèi)成分可通過(guò)清除自由基和抑制酪氨酸酶活性來(lái)同時(shí)發(fā)揮抗氧化作用，使其效率明顯提高。

甘草藥渣的主要成分是脂溶性黃酮苷元，結(jié)構(gòu)類(lèi)型多樣，活性差異較大，但本實(shí)驗(yàn)所得化合物的種類(lèi)不足，抗氧化活性篩選不夠全面，未能完整地反映黃酮成分的活性。因此，今后將對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行深入研究，并以計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)結(jié)合體內(nèi)外多指標(biāo)對(duì)活性進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，有利于甘草藥渣的精細(xì)化利用開(kāi)發(fā)。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版一部［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］ 鄒艷敏，吳靜波，仰榴青，等.中藥渣的綜合利用研究進(jìn)展［J］.江蘇中醫(yī)藥，2008，40（12）：113-115.

［3］ 趙麗娜，王銀香，羅 鋒，等.三種甘草渣甘草黃酮含量及其抗氧化活性比較研究［J］.塔里木大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，19（4）：14-16.

［4］ 范玉涵，馬全武，王建國(guó)，等.甘草廢渣中有效成分對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013，24（11）：2649-2652.

［5］ 劉 芬，李 寧，倪 慧，等.甘草藥渣的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)現(xiàn)代中藥，2011，13（2）：6-9.

［6］ 張 波，官月平，田慶來(lái)，等.烏拉爾甘草中黃酮類(lèi)化學(xué)成分的研究進(jìn)展［J］.中成藥，2006，28（9）：1362-1365.

［7］ Naciye E，Guler A，Erol A.Antioxidant activities of rosemary（Rosmarinus Officinalis L.）extract，blackseed（Nigella sativa

L.）essential oil，carnosic acid，rosmarinic acid and sesamol［J］.Food Ghem，2008，110（1）：76-82.

［8］ 傅博強(qiáng)，李 歡，王小如，等.甘草黃酮類(lèi)化合物對(duì)酪氨酸酶單酚酶的抑制［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2005，17（4）：391-395.

［9］ Kajiyama K，Dcmizu S，Hiraga Y，et al.Two prenylated retrochalcones from Glycyrrhiza inflata［J］.Phytochemistry，1992，31（9）：3229-3232.

［10］ Toshio F.Anti-helicobacter pylori flavonoids from licorice extract［J］.Life Sci，2002，71（12）：1449-1463.

［11］ 白 虹，竇德強(qiáng)，裴玉萍，等.栽培甘草的化學(xué)成分研究［J］.中草藥，2005，36（5）：652-654.

［12］ 楊 琳，車(chē)慶明，畢 誠(chéng)，等.甘草廢渣中黃酮成分的研究［J］.中草藥，2007，38（5）：671-673.

［13］ Saitoh T，Noguchi H，Shibata S.A new isoflavone and the corresponding iso flavanone of licorice root［J］.Ghem Pharm Bull，1978，26（1）：144-147.

［14］ 劉 芬，倪 慧，卿德剛，等.甘草藥渣化學(xué)成分的分離與鑒定［J］.中國(guó)藥物化學(xué)雜志，2011，21（4）：312-314.

［15］ Lee Y S，Kim SH，Jung SH，etal.Aldose reductase inhibitory compounds from Glycyrrhiza uralensis［J］.Biol Pharm Bull，2010，33（5）：917-921.

［16］ 張聿梅，許旭東，胡碧煌，等.黃甘草異黃酮成分的研究［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1997，32（4）：301-304.

［17］ 朱大元，宋國(guó)強(qiáng)，蔣福祥.甘草化學(xué)成分的研究—異甘草黃酮醇及甘草香豆素的結(jié)構(gòu)［J］.化學(xué)學(xué)報(bào)，1984，42（10）：1080-1084.

［18］ 王開(kāi)金，陳列忠，李 寧，等.加拿大一枝黃花黃酮類(lèi)成分及抗氧化與自由基消除活性的研究［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2006，41（7）：493-497.

［19］ 駱從艷，慕春海，王園姬，等.光甘草定抑制酪氨酸酶及體外抗氧化活性的研究［J］.中藥材，2010，33（11）：1776-1780.

［20］ 鄭洪偉，牛新文，朱 君，等.查爾酮類(lèi)化合物生物活性研究進(jìn)展［J］.中國(guó)新藥雜志，2007，16（18）：1445-1449.

［21］ Nerya O，Musa R，Khatib S，et al.Chalcones as potent tyrosinase inhibitors：the effect of hydroxyl positions and numbers［J］.Phytochemistry，2004，65（10）：1389-1395.

FIavonoids and their anti-oxidant activities of the herb residues of Glycyrrhiza glabra L.

FANG Shi-qi1， LENG Kang1， DUAN Jin-ao1，2， LI Cun-yu1，2， WEI Juan-hua1，ZHENG Yun-feng1，2， PENG Guo-ping1，2*

（1.School of Pharmacy，Nanjing University ofGhineseMedicine，Nanjing 210023，Ghina；2.Jiangsu Provincial Gollaborative Innovation Genter ofGhinese Medicinal Resources Industrialization，Nanjing 210023，Ghina）

AIM To study the flavonoids and their anti-oxidant activities of the herb residues of Glycyrrhiza glabra L.for the further application and developmentof them.METHODS Flavonoids from the herb residues of G.glabra were isolated by silica，ODS-C18medium-pressure column and recrystallization and identified by spectral analysis.The anti-oxidantactivities of them were then evaluated by DPPH radical scavenging assay and inhibition of tyrosinase.RESULTS Ten flavonoids were isolated from these herb residues and identified as licochalcone A（1），isoliquiritigenin（2），licoflavone C（3），licoflavone（4），licoisoflavone B（5），glabrone（6），liquiritigenin（7），semilicoisoflavone B（8），licoisoflavone A（9），formononetin（10）.Among them，compounds1，2，5 and 6 showed better DPPH radical scavenging activities，the IC50values ofwhich were 18.2，26.0，27.9 and 60.0 μg/mL，respectively.Compounds 1-3 could also significantly inhibit tyrosinase，the IC50values of which were 4.9，54.9 and 60.3μg/mL，respectively.CONCLUSION The herb residues of Glycyrrhiza glabra L.still contain a variety of flavonoids having anti-oxidant activities for further research.

Glycyrrhiza glabra L.；herb residues；flavonoids；anti-oxidant activities；DPPH radical；tyrosinase

R284.1

A

1001-1528（2015）11-2443-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.11.023

2015-03-25

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目 （81202881）；江蘇省高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目 （ysxk-2013）

方詩(shī)琦 （1991—），女，碩士，研究方向?yàn)橹兴幊煞址蛛x與分析。Tel：（025）86798186，E-mail：fangsq8866@163.com

*通信作者：彭國(guó)平 （1963—），男，博士，研究員，研究方向?yàn)橹兴幊煞址蛛x精制與新藥研究。Tel：（025）86798186，E-mail：guopingpeng@sohu.com