侯凌波， 喬利軍， 郭建文*

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東廣州510405；2.廣東省中醫(yī)院，廣東廣州510120）

燈盞細(xì)辛注射液對(duì)血瘀型急性腦梗死患者血清VEGF、MM P-9、EPCs水平的影響

侯凌波1， 喬利軍2， 郭建文2*

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東廣州510405；2.廣東省中醫(yī)院，廣東廣州510120）

目的 研究燈盞細(xì)辛注射液對(duì)血瘀型急性腦梗死患者血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 （VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）及內(nèi)皮祖細(xì)胞 （EPCs）水平的影響，了解其促血管新生機(jī)制。方法 采用前瞻性隨機(jī)、對(duì)照試驗(yàn)方案，連續(xù)選取40例住院治療的急性腦梗死患者，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上均分為燈盞細(xì)辛注射液治療組和對(duì)照組，兩組療程均為7 d。治療前和后進(jìn)行中醫(yī)癥征積分 （SSTCM）、血瘀證積分、神經(jīng)功能缺損評(píng)分 （NIHSS）的比較；對(duì)治療前和治療后第1、3、7天的VEGF、MMP-9、EPCs血清學(xué)水平比較。結(jié)果 （1）兩組患者經(jīng)治療后，SSTCM、血瘀證積分、NIHSS均較治療前有改善 （P＜0.05）；治療組與對(duì)照組相比改善更明顯 （P＜0.05）。（2）血清VEGF、MMP-9、EPCs水平隨時(shí)間變化顯著 （P＜0.05）；燈盞細(xì)辛注射液治療組血清VEGF在治療后第3天明顯增高，治療7 d后與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），且治療后第7天VEGF仍呈繼續(xù)上升趨勢(shì)；血清MMP-9在治療3 d后達(dá)到高峰，與對(duì)照組相比，燈盞細(xì)辛注射液治療組明顯抑制血清MMP-9水平增高 （P＜0.05），之后逐漸回落，但仍高于正常水平；隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，治療組、對(duì)照組血清EPCs水平均逐漸升高，但組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P＞0.05）。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血瘀型急性腦梗死患者經(jīng)燈盞細(xì)辛注射液治療后第7天EPCs與VEGF呈線性正相關(guān)（r=0.561，P= 0.010）；EPCs與MMP-9呈線性負(fù)相關(guān)（r=-0.449，P=0.047）。結(jié)論 燈盞細(xì)辛注射液可促進(jìn)VEGF高表達(dá)，降低MMP-9血清學(xué)水平，從而動(dòng)員外周血EPCs，促進(jìn)血管新生，保護(hù)腦組織。

燈盞細(xì)辛注射液；急性腦梗死；血瘀證；VEGF；MMP-9；EPCs；血管新生

腦梗死亦稱缺血性腦血管疾?。–erebrovascular disease，CVD），約占全部腦血管病患者的70%～80%。腦缺血后，由于腦組織缺血、缺氧而引起神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死、凋亡，導(dǎo)致神經(jīng)功能受損。腦血管新生可以明顯改善缺血區(qū)周圍的組織灌注，減輕因血流量不足導(dǎo)致的腦損傷，因此，促進(jìn)血管新生是治療腦缺血的有效方法。燈盞細(xì)辛注射液在治療急性中風(fēng)、中風(fēng)偏癱方面臨床使用率較高，且在治療缺血性中風(fēng)安全有效。本研究通過觀察燈盞細(xì)辛對(duì)急性腦梗死（ACI）患者血清VEGF、MMP-9、EPCs水平的影響，探討其多靶點(diǎn)促血管新生作用，為臨床治療提供理論的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年5月至2013年9月在本院住院治療的急性腦梗死連續(xù)病例40例，發(fā)病時(shí)間均在24 h內(nèi)。采用前瞻性隨機(jī)、對(duì)照試驗(yàn)方案，經(jīng)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為治療組20例，男性12例，女性8例，平均年齡 （65.30±11.94）歲；對(duì)照組20例，男性14例，女性6例，平均年齡（65.05±9.58）歲。兩組患者年齡、性別差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。本課題經(jīng)廣東省中醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有入選病例均征得患者本人或家屬同意并簽署知情同意書。

1.2 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)腦血管病學(xué)組撰寫的 《中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2010》中急性腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］，并經(jīng)顱腦CT或MRI確診。

1.3 中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 符合1996年國(guó)家中醫(yī)藥管理局腦病急癥協(xié)作組 《中風(fēng)病診斷與療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》［2］，且同時(shí)滿足國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布的 《中醫(yī)臨床診療術(shù)語.證候部分》（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/ T16751.2-1997）中 “血瘀證”診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) ①不符合以上入選標(biāo)準(zhǔn)的；②發(fā)病24 h內(nèi)發(fā)生腦疝或大面積腦梗死而生命體征未平穩(wěn)者；③合并嚴(yán)重心、肺、肝、腎功能不全；④嚴(yán)重精神疾病、癡呆者。

1.5 治療方法 對(duì)照組采用控制血壓、抗聚、調(diào)脂等常規(guī)治療，治療組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用燈盞細(xì)辛注射液30 m L（含總黃酮90 mg，由云南生物谷燈盞花藥業(yè)有限公司提供，國(guó)藥準(zhǔn)字253021569）于生理鹽水250 mL，靜滴，每天一次，連續(xù)治療7 d。

1.6 試驗(yàn)材料 VEGF（武漢博美生物工程有限公司，CSB-E15022h）；MMP-9（武漢博美生物工程有限公司，CSB-E08006h）；單色熒光標(biāo)記抗體CD309（德國(guó)Miltenyi Biotec，130-093-601）；VEGFR-2/KDR-APC（allophycocyanin）（Clone ES8-20E6，德國(guó)Miltenyi Biotec）；同型對(duì)照mouse IgG1（德國(guó)Miltenyi Biotec，130-092-214）；雙色熒光標(biāo)記抗體CD34-PE/CD45-FITC（美國(guó)Beckman Coulter，IM3630）；同型對(duì)照mouse IgG1/IgG1（德國(guó)Miltenyi Biotec，A07796/6602928）。流式細(xì)胞儀

（美國(guó)貝克曼庫爾特公司，F(xiàn)C-500）；溶血素 （聯(lián)科生物有限公司，3104735）；磷酸緩沖液 （PBS）（羅基北京生物技術(shù)有限公司，CC0010）；流式上樣管 （美國(guó)BD公司，352063）。

1.7 檢測(cè)方法 兩組患者均于治療前及治療后第1、3、7天各采集清晨空腹靜脈血，使用紅色干燥管靜脈采血4 mL，紫色管采血4 mL。采用雙抗體夾心（ELISA）法測(cè)定血清VEGF和MMP-9濃度，流式細(xì)胞儀檢測(cè)陽性細(xì)胞CD34+/CD309+雙陽性細(xì)胞的表達(dá)率，以同時(shí)表達(dá)CD34和CD309的雙陽性表型的細(xì)胞表示EPCs。試劑盒由武漢博美生物工程有限公司和羅基北京生物技術(shù)有限公司提供，操作由專人嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.8 療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 分別在治療前及治療1周后對(duì)SSTCM積分、血瘀證積分、NIHSS做出客觀的評(píng)定。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 正態(tài)分布的連續(xù)變量采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用一般線性模型中重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)資料的單變量方差分析（General Linear Model/Repeated Measures ANOVA）進(jìn)行處理，根據(jù)球形檢驗(yàn)（Mauchly’s Test of Sphericity）的結(jié)果，選擇單因素方差分析（one-way ANOVA）或多元方差分析（Multivariate Tests）。采用Bivariate-Pearson Correlatio分析各指標(biāo)間的相關(guān)性。所有的分析方法采用SPSS 17.0軟件處理，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 總體療效評(píng)價(jià) 由表1可見，治療后兩組患者SSTCM積分、血瘀證積分、NIHSS評(píng)分都有減少，與自身治療前比較，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療組與對(duì)照組相比改善更明顯（P＜0.05）。

表1 兩組患者SSTCM積分、血瘀證積分、NIHSS評(píng)分比較Tab.1 Com parison of SSTCM，b Iood-stasis pattern and NIHSS scores between two groups

表1 兩組患者SSTCM積分、血瘀證積分、NIHSS評(píng)分比較Tab.1 Com parison of SSTCM，b Iood-stasis pattern and NIHSS scores between two groups

注：與對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；同組治療前后比較，★P＜0.05，★★P＜0.01

評(píng)分治療組 治療前組別 例數(shù) SSTCM積分 血瘀證積分 NIHSS 20 10.10±4.012 35.600±7.500 7.00±2.317治療后 20 5.35±2.412△★★ 12.450±8.482△△★★ 3.00±1.686△★★對(duì)照組 治療前 20 9.35±3.313 36.700±7.814 6.75±2.593治療后 20 7.10±2.900★ 21.000±7.086★★ 4.50±2.782★

2.2 兩組患者治療前后血清VEGF、MMP-9、EPCs水平的比較 不同時(shí)點(diǎn)血清VEGF水平經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，球形檢驗(yàn)Mauchly’s W=0.617，P=0.003，不滿足球形假設(shè)，選用多元方差分析進(jìn)行處理且以ε（Epsilon）校正。血清VEGF水平隨時(shí)間變化顯著 （P=0.000），分組因素在血清VEGF變化中起作用 （P=0.049），組別與時(shí)間的交互效應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P=0.273）。進(jìn)一步分析顯示，治療后第7天與對(duì)照組相比有顯著差異（P＜0.05）。治療組在治療后第3、7天，對(duì)照組在治療后第7天分別與各組治療前相比有顯著性差異（P＜0.01），結(jié)合表2數(shù)據(jù)可知，血清VEGF水平在治療后第7天仍呈上升趨勢(shì)。

表2 兩組患者血清VEGF濃度比較Tab.2 Com parison of the IeveIof VEGF at different time points betw een two groups

表2 兩組患者血清VEGF濃度比較Tab.2 Com parison of the IeveIof VEGF at different time points betw een two groups

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與治療前比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。#表示試驗(yàn)分組主效應(yīng)的F統(tǒng)計(jì)量和P值；##表示時(shí)間因素主效應(yīng)的F統(tǒng)計(jì)量和P值；★表示時(shí)間與組別交互效應(yīng)的F統(tǒng)計(jì)量和P值

組別 例數(shù) 治療前 治療后第1天 治療后第3天 治療后第7天F P治療組 20 289.940±120.142 360.375±119.511 411.235±117.683** 496.255±166.021△**4.152# 0.049#對(duì)照組 20 284.685±118.481 284.685±118.481 356.470±211.779 379.575±105.813 F 17.110##1.321★ 0.273★P 0.000##

不同時(shí)點(diǎn)血清MMP-9水平經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，球形檢驗(yàn)Mauchly’s W=0.847，P=0.296，滿足球形假設(shè)，采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)資料的單變量方差分析。血清MMP-9水平隨時(shí)間變化顯著（P= 0.000），分組因素在血清MMP-9變化中未起作用（P=0.223）。組別與時(shí)間的交互效應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P=0.063）。進(jìn)一步分析顯示，治療后第1、7天時(shí)治療組與對(duì)照組比較MMP-9變化無顯著差異（P＞0.05），至第3天時(shí)兩組比較有顯著差異（P＜0.05）。治療組在治療后第3、7天，對(duì)照組

以我國(guó)某一農(nóng)村為例，對(duì)農(nóng)村人畜飲水安全的影響因素進(jìn)行分析，該地區(qū)主要是利用雨水與泉水進(jìn)行供水，主要水源來自該縣的一水庫，飲水問題基本得到解決，其水質(zhì)受人為因素、環(huán)境因素、地理位置等影響極易出現(xiàn)污染，水質(zhì)不能滿足國(guó)家對(duì)生活飲水的安全標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，且因使用受污染的水導(dǎo)致許多村民都出現(xiàn)了骨質(zhì)疏松、糞便呈血、牙齒變黃等癥狀，嚴(yán)重威脅著村民的身體安全。通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該地區(qū)的農(nóng)村人畜飲水安全影響因素主要體現(xiàn)在以下幾方面。

在治療后第1、3天分別與各組治療前相比有顯著性差異 （P＜0.01），表3數(shù)據(jù)同時(shí)提示，血清

MMP-9水平在治療后第3天達(dá)到高峰。

表3 兩組患者血清MMP-9濃度比較Tab.3 Com parison of the IeveIof MM P-9 at different time poin ts between two groups

表3 兩組患者血清MMP-9濃度比較Tab.3 Com parison of the IeveIof MM P-9 at different time poin ts between two groups

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與治療前比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。#表示試驗(yàn)分組主效應(yīng)的F統(tǒng)計(jì)量和P值；##表示時(shí)間因素主效應(yīng)的F統(tǒng)計(jì)量和P值；★表示時(shí)間與組別交互效應(yīng)的F統(tǒng)計(jì)量和P值

F P治療組 20 152.479±61.977 202.141±105.425 206.911±93.093*△ 187.360±89.527△ 1.537# 0.223組別 例數(shù) 治療前 治療后第1天 治療后第3天 治療后第7天#對(duì)照組 20 148.441±53.796 250.355±143.978△△ 287.548±143.965△△ 194.107±129.676 F 11.848##2.499★ 0.063★P 0.000##

不同時(shí)點(diǎn)血清EPCs水平經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，球形檢驗(yàn)Mauchly’s W=0.368，P=0.000，不滿足球形假設(shè)，選用方法同 “VEGF”分析中所述。結(jié)果顯示，血清EPCs水平隨時(shí)間變化顯著（P=0.001），分組因素在血清EPCs變化中不起作用 （P=0.647），組別與時(shí)間的交互效應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P=0.582）。進(jìn)一步分析顯示，急性腦梗死發(fā)病7 d內(nèi)，治療組EPCs水平雖較對(duì)照組升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），兩組各時(shí)間點(diǎn)與治療前相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），見表4。

表4 兩組患者血清EPCs水平比較Tab.4 Com parison of the IeveIof EPCs at different tim e points between two groups

表4 兩組患者血清EPCs水平比較Tab.4 Com parison of the IeveIof EPCs at different tim e points between two groups

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與治療前比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。#表示試驗(yàn)分組主效應(yīng)的F統(tǒng)計(jì)量和P值；##表示時(shí)間因素主效應(yīng)的F統(tǒng)計(jì)量和P值；★表示時(shí)間與組別交互效應(yīng)的F統(tǒng)計(jì)量和P值

F P治療組 20 13 970.000±8 244.490 14 571.000±10 096.915 21 958.500±18 219.921 25 191.500±26 891.644 0.214# 0.647組別 例數(shù) 治療前 治療后第1天 治療后第3天 治療后第7天#對(duì)照組 20 9 867.000±4 848.273 16 582.500±14 184.575 18 371.000±15 079.190 23 154.000±24 654.102 F 7.690##0.517★ 0.582★P 0.001##

2.3 急性腦梗死患者血清EPCs與VEGF、MMP-9相關(guān)性分析 對(duì)治療組20例急性腦梗死患者治療后第7天血清EPCs與VEGF進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，兩者呈顯著線性正相關(guān) （r=0.561，P=0.010）；EPCs與MMP-9呈線性負(fù)相關(guān)（r=-0.449，P= 0.047）。

3 討論

急性腦梗死 （ACI）患者由于動(dòng)脈粥樣硬化等原因造成局部動(dòng)脈管腔狹窄或者堵塞，腦部血液供應(yīng)障礙，發(fā)生缺血缺氧壞死。急性梗死灶區(qū)的新生血管可以明顯改善缺血區(qū)周圍的組織灌注，減輕因血流量不足導(dǎo)致的腦損傷，縮小梗死體積，重塑神經(jīng)結(jié)構(gòu)，使神經(jīng)功能盡可能恢復(fù)。因此，盡快恢復(fù)缺血區(qū)的血液供應(yīng)，促進(jìn)缺血區(qū)血管新生，重建損傷區(qū)血運(yùn)成為ACI治療的關(guān)鍵。血管新生即新的血管形成，包括血管再生、動(dòng)脈形成和血管生成三個(gè)過程，而血管生成因子和血管再生相關(guān)細(xì)胞是新的血管形成兩個(gè)必不可少的因素。

目前中醫(yī)藥對(duì)血管新生的研究逐漸展開，中醫(yī)的 “生脈”法、活血化瘀法可以促進(jìn)腦缺血組織區(qū)周圍的血管新生。清代唐容川在 《血證論》中指出祛瘀與生新是同時(shí)進(jìn)行的，“祛瘀”可以 “生新”，“生新”可以 “祛瘀”，二者不可分割，不可偏廢，中醫(yī)學(xué)稱之為 “祛瘀生新”，中醫(yī)理論指導(dǎo)的血管新生為 “生脈”、 “生血”、 “生肌”。吳以嶺等［4］指出血管新生應(yīng)屬于中醫(yī)學(xué) “生新、生脈”范疇，提出 “脈絡(luò)—血管系統(tǒng)病”同一性，認(rèn)為中醫(yī)學(xué)脈在解剖形態(tài)上與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)血管具有同一性，絡(luò)則與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的小血管、微血管及微循環(huán)相吻合，而中醫(yī)治療腦梗死的關(guān)鍵在于活血通絡(luò)，基礎(chǔ)與臨床研究表明活血通絡(luò)方藥可促進(jìn)毛細(xì)血管新生、有效側(cè)支循環(huán)建立，從而發(fā)揮保護(hù)腦組織的作用。燈盞細(xì)辛注射液是活血化瘀代表藥燈盞細(xì)辛提取酚酸類成分制成的注射液，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)燈盞細(xì)辛具有舒張腦血管，增加腦血流量，改善微循環(huán)，提高心腦供血等作用，在急性中風(fēng)、中風(fēng)偏癱等疾病中應(yīng)用廣泛，且安全有效［5-6］，本研究結(jié)果顯示，經(jīng)燈盞細(xì)辛注射液治療后，治療組患者SSTCM積分、血瘀證積分、NIHSS評(píng)分較對(duì)照組改善明顯，表明燈盞細(xì)辛注射液改善急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損癥狀療效確切，但其具體腦保護(hù)作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

EPCs血管損傷區(qū)里唯一自體修復(fù)干細(xì)胞，被動(dòng)員至腦缺血區(qū)后，參與修復(fù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血管新生。Moubarik等［7］研究發(fā)現(xiàn)循環(huán)中EPCs生長(zhǎng)速度較為緩慢，在腦梗死發(fā)病第15天達(dá)到高峰。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，燈盞細(xì)辛注射液治療組患者血清EPCs水平雖較對(duì)照組升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），在急性腦梗死發(fā)病7 d內(nèi)，各時(shí)點(diǎn)EPCs水平與治療前相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P＞0.05），但重復(fù)測(cè)量方差分析結(jié)果顯示時(shí)間因素在血清EPCs變化中作用明顯（F=7.690，P= 0.001），恰恰證實(shí)了循環(huán)中EPCs生長(zhǎng)速度的緩慢，今后的研究中進(jìn)一步延長(zhǎng)觀察時(shí)間或可獲得有益的結(jié)論。

VEGF為至今發(fā)現(xiàn)的唯一作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，是血管再生的關(guān)鍵因子［8］。本研究發(fā)現(xiàn)，血清VEGF水平隨時(shí)間變化顯著（P＜0.01），提示隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，血清VEGF濃度逐漸增高，第7天達(dá)高峰，表明血清VEGF的高表達(dá)，在血管形成過程中發(fā)揮重要作用。在各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，燈盞細(xì)辛注射液治療組血清VEGF水平的表達(dá)均較對(duì)照組高，說明燈盞細(xì)辛注射液的促血管新生作用是通過VEGF的高表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。巫祖強(qiáng)等［9］研究同樣表明燈盞細(xì)辛可通過促進(jìn)VEGF高表達(dá)發(fā)揮腦保護(hù)作用。

MMP-9是在腦卒中發(fā)病機(jī)理中有雙重介導(dǎo)作用的細(xì)胞因子，一方面是血腦屏障的瓦解、神經(jīng)細(xì)胞死亡及造成腦卒中后出血；另一方面是在組織修復(fù)期血管再生和重建中的愈合作用。有研究表明在急性腦梗死發(fā)病2 h后MMP-9水平就會(huì)升高，在發(fā)病第6天時(shí)MMP-9水平基本恢復(fù)正常，病程在7 d以內(nèi)，MMP-9主要是降解細(xì)胞外基質(zhì)，使血腦屏障通透性增加，引起腦水腫，加重梗死，在發(fā)病第7～14天時(shí)MMP-9開始發(fā)揮血管新生和重建功能［10］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，急性腦梗死后第1天開始MMP-9水平逐漸上升，第3天達(dá)到高峰，至第7天時(shí)雖已回落，但仍維持在一個(gè)稍高濃度。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9在急性腦梗死初期即出現(xiàn)升高，燈盞細(xì)辛治療可降低MMP-9的表達(dá)。提示在急性腦梗死初期MMP-9主要作用為促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解、增加血腦屏障通透性，抑制MMP-9的表達(dá)有助于減輕神經(jīng)功能損傷，而在發(fā)病后7 d維持MMP-9的稍高水平，則有助于其血管新生和重建功能的發(fā)揮。

血管生成不僅需要EPCs歸巢到缺血部位參與血管內(nèi)皮化和血管新生，而且需要促進(jìn)血管新生的細(xì)胞因子參與，而VEGF和MMP-9就是其中最主要的調(diào)控因子。He等［11］研究發(fā)現(xiàn)，隨著血清VEGF表達(dá)水平增高，外周血中EPCs明顯增加。Morancho等［12］指出局灶性腦缺血觸發(fā)EPCs的血管生成反應(yīng)，而MMP-9則在新生血管網(wǎng)絡(luò)的形成中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。我們的研究結(jié)果顯示，燈盞細(xì)辛注射液治療組VEGF的量一直處于較高水平；MMP-9呈現(xiàn)先高后低的變化趨勢(shì)，燈盞細(xì)辛注射液治療組MMP-9水平低于對(duì)照組；而燈盞細(xì)辛注射液治療組外周血EPCs則呈逐漸升高的變化趨勢(shì)，且相關(guān)性研究結(jié)果顯示血瘀型急性腦梗死患者經(jīng)燈盞細(xì)辛注射液治療后第7天EPCs與VEGF呈線性正相關(guān)（r=0.561，P=0.010），與MMP-9呈線性負(fù)相關(guān)（r=-0.449，P=0.047），據(jù)此我們推測(cè)，燈盞細(xì)辛不僅促進(jìn)VEGF的高表達(dá)介導(dǎo)EPCs動(dòng)員，同時(shí)抑制了MMP-9的過表達(dá)，削弱其早期降解細(xì)胞外基質(zhì)，破壞血腦屏障的作用，VEGF和MMP-9兩者相互作用，最終介導(dǎo)EPCs歸巢到缺血部位參與血管新生。

本研究以細(xì)胞因子變化的角度揭示了燈盞細(xì)辛多靶點(diǎn)促進(jìn)血管新生的作用，為中醫(yī)藥治療急性腦梗死提供了一條新的研究思路。同時(shí)本研究也存在一定的局限，本研究是單中心研究，樣本量尚不夠大，觀察時(shí)間不夠長(zhǎng)，可能對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生一定影響。

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Effect of Erigeron Breviscapus Injection on VEGF，MMP-9 and EPCs in patientswith acute cerebraIinfarction of bIood-stasis pattern

HOU Ling-bo1， QIAO Li-jun2， GUO Jian-wen2*

（1.Guangzhou University of Traditional GhineseMedicine，Guangzhou 510405，Ghina；2.Guangdong Provincial Hospital of Ghinese Medicine，Guangzhou 510120，Ghina）

AIM To observe the effect of Erigeron Breviscapus Injection（EBl）on serum of vascular endothelial growth factor（VEGF），matrixmetalloproteinase-9（MMP-9）and endothelial progenitor cells（EPCs）in patientswith acute cerebral infarction（ACI）presenting blood stasis and understand the agent’smulti-targetmechanism in promoting angiogenesis.M ETHODS With a scheme of prospective，randomized and controlled trial design，forty hospitalized patientswith ACIpresenting blood stasiswere divided into the trial group（n=20）and control group（n=20）.Conventional treatmentwas applied to both groups，and 30 mL/d EBIwas given additionally

Erigeron breviscapus Injection；acute cerebral infarction；blood-stasis pattern；vascularendothelial growth factor（VEGF）；matrixmetalloproteinase-9（MMP-9）；endothelial progenitor cells（EPCs）；angiogenesis

R287

A

1001-1528（2015）11-2373-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.11.008

2014-11-10

國(guó)家中醫(yī)臨床研究基地業(yè)務(wù)建設(shè)科研專項(xiàng) （JDZX2012074）；廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院聯(lián)合科研專項(xiàng) （20110326）

侯凌波 （1987—），女，博士生，從事中醫(yī)藥治療腦血管病的研究。Tel：13711271952，E-mail：1098893276@qq.com

*通信作者：郭建文 （1975—），男，碩士生導(dǎo)師，從事中醫(yī)藥治療腦血管病的研究。E-mail：306247680@qq.com

to the trial group，the treatment in both groups went on for seven days.The expressions of VEGF，MMP-9 and EPCs were determined with flow cytometric（FCM）and ELISA techniques respectively prior to the treatment at the time of 1st，3rd，and 7thday.RESULTS （1）Stroke Scale of traditional Chinesemedicine（SSTCM），scores of blood stasis syndrome and scores of NIHSSwere improved after treatment in both groups.Moreover，the results in the treatmentgroup were better than those in the controlgroup（P＜0.05）.（2）The levels of VEGF，MMP-9 and EPCs changed significantly over time（P＜0.05）.And the alteration of VEGF levelwas significant（P＜0.05）on the third day of the treatment，while the same change occured in the control group on the 7thday.VEGF was still rose after the7thday.On the3rdday of the treatment，the level ofMMP-9 reached the peak，but the rising trend in the treatmentgroup was significantly curbed（P＜0.05）and then fell gradually，but still stayed higher than the normal level.With the extension of treatment time，both groupswere found increased levels of EPCs.However，the changes between the two groups were not significant（P＞0.05）.The proliferation of EPCs was linear positively correlated to VEGF（r=0.561，P=0.010）after being treated with EBl for7 days in patientswith ACIand linear negatively correlated to MMP-9（r=-0.449，P=0.047）.CONCLUSIONS EBI can promote the high expression of VEGF and reduce the level of MMP-9，so as to mobilize the proliferation of EPCs in peripheral blood，enhance angiogenesis and improve the brain function.