韋志鋒覃勇陸以全秦若甫陶立李軍陳澤祥閉炳芬楊威*

（1，廣西獸醫(yī)研究所 530001；2，廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 530001；3，廣西百色市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 533000；4，廣西隆安縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 532700）

廣西水牛和奶牛寄生蟲感染情況的調(diào)查

韋志鋒1,2覃勇3陸以全4秦若甫1,2陶立1,2李軍1,2陳澤祥1,2閉炳芬1,2楊威1,2*

（1，廣西獸醫(yī)研究所 530001；2，廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 530001；3，廣西百色市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 533000；4，廣西隆安縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 532700）

采用沉淀法、飽和蔗糖溶液漂浮法和全血PCR等方法檢測(cè)廣西13個(gè)市縣的散養(yǎng)水牛新鮮糞樣1120頭份、全血508頭份；圈養(yǎng)奶水牛新鮮糞樣和全血各54頭份；11個(gè)黑白花奶牛規(guī)模場(chǎng)奶牛新鮮糞樣1832頭份、全血628頭份。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，感染廣西水牛和奶牛的主要寄生蟲種類有前后盤吸蟲、肝片形吸蟲、線蟲、艾美耳球蟲和安氏隱孢子蟲。調(diào)查未發(fā)現(xiàn)牛巴貝斯蟲和伊氏錐蟲的感染。表明防控吸蟲病的傳播和發(fā)生是廣西牛寄生蟲病的防治重點(diǎn)。

牛；散養(yǎng)；規(guī)模場(chǎng)；寄生蟲感染；流行病調(diào)查；廣西

廣西素有水牛之鄉(xiāng)的美稱，是全國(guó)養(yǎng)殖水牛最多的地區(qū)，常年保有量達(dá)480萬頭左右，以役用為主，幾乎遍布在廣大的農(nóng)村地區(qū)，以散養(yǎng)和放牧為主要的飼養(yǎng)方式。奶牛也是廣西近幾年來鼓勵(lì)發(fā)展的重點(diǎn)產(chǎn)業(yè)，黑白花奶牛和奶水牛的存欄量也有大幅的提高，但主要以圈養(yǎng)為主。為了確切弄清在不同飼養(yǎng)方式的條件下廣西水牛和奶牛寄生蟲感染的情況，我們于2013～2014年對(duì)廣西水牛和奶牛寄生蟲感染情況進(jìn)行了調(diào)查，并依此為依據(jù)提出了綜合性的防治措施。

1 材料和方法

1.1 材料

（1）隨機(jī)采集廣西13個(gè)不同市縣的散養(yǎng)水牛新鮮糞樣1120頭份、全血508頭份，隨機(jī)采集北海市和來賓皇氏奶牛場(chǎng)圈養(yǎng)奶水牛新鮮糞樣和全血各54頭份，4℃保存送檢。

（2）按10～20%的比例隨機(jī)采集廣西11個(gè)黑白花奶牛規(guī)模場(chǎng)的1832頭份新鮮糞便，每頭份50g左右，分裝于潔凈的塑料袋內(nèi)，編號(hào)和標(biāo)記牛的日齡及自然狀況，置4℃冰箱待檢。采集這11個(gè)黑白花奶牛規(guī)模場(chǎng)奶牛全血628頭份 （柳州1場(chǎng)50頭份，南寧石埠場(chǎng)80頭份，鹿寨奶牛場(chǎng)40頭份，上思奶牛場(chǎng)80頭份，貴港奶牛場(chǎng)60頭份，來賓奶牛場(chǎng)90頭份，南寧紅星場(chǎng)70頭份，柳州2場(chǎng)38頭份，柳州3場(chǎng)20頭份，桂平奶牛場(chǎng)70頭份，金光奶牛場(chǎng)30頭份），置4℃冰箱待檢。

1.2 方法

（1）采用飽和蔗糖液漂浮法和沉淀法檢測(cè)牛吸蟲、線蟲、球蟲和隱孢子蟲；采用片形吸蟲卵計(jì)數(shù)法檢測(cè)牛吸蟲的感染強(qiáng)度。根據(jù)檢測(cè)到的蟲卵或卵囊的形態(tài)和大小，參考《家畜寄生蟲學(xué)》和 《動(dòng)物寄生蟲學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》進(jìn)行鑒定[1,2]。

（2）牛全血檢測(cè)牛伊氏錐蟲和牛巴貝斯蟲的PCR方法。采用石云良等[3]二重PCR快速檢測(cè)牛伊氏錐蟲和牛巴貝斯蟲的方法進(jìn)行檢測(cè)。DNA的提取方法是采用傳統(tǒng)的苯酚、氯仿的抽提方法進(jìn)行。引物合成由上海生工生物工程有限公司進(jìn)行合成。

2 結(jié)果

2.1 廣西水牛寄生蟲感染情況

（1）廣西水牛（散養(yǎng)）吸蟲和球蟲感染情況，見表1。

從表1可知調(diào)查檢測(cè)1120頭份的糞樣發(fā)現(xiàn)感染散養(yǎng)水牛吸蟲有兩種形態(tài)大小的蟲卵，經(jīng)鑒定分別為片形吸蟲和前后盤吸蟲，它們的感染率各地不盡相同，其中片形吸蟲全區(qū)平均感染率為39.6%，從檢測(cè)的感染強(qiáng)度來看，感染強(qiáng)度在10～178個(gè)蟲卵/克糞便之間，其中34頭份每克糞便含蟲卵數(shù)超100個(gè)，占陽性糞樣的7.7% （34/443）；前后盤吸蟲全區(qū)平均感染率為45.5%，感染強(qiáng)度在8～274個(gè)蟲卵/克糞便之間，其中77頭份每克糞便含蟲卵數(shù)超100個(gè)，占陽性糞樣的15.1% （77/510）；線蟲的感染率很低，全區(qū)在1.3～9%間，平均4.1%，且陽性牛中感染強(qiáng)度也很低，每克糞便在8～56個(gè)卵囊之間，根據(jù)蟲卵的形態(tài)和大小線蟲鑒定為毛首線蟲和圓線目的其他線蟲。

球蟲感染的平均陽性率為37.9%，雖然各地的感染率都非常高，但感染強(qiáng)度卻非常低，每個(gè)視野 （400×）見卵囊在0～3個(gè)之間，屬于正常的帶蟲現(xiàn)象。在所有檢測(cè)的散養(yǎng)水牛糞樣中未發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲的感染。

（2）所有送檢水牛（散養(yǎng)）的新鮮糞樣和全血，經(jīng)檢測(cè)未檢測(cè)到隱孢子蟲、牛巴貝斯蟲和伊氏錐蟲的感染，全部為陰性。

表1 廣西水牛（散養(yǎng)）寄生蟲檢測(cè)報(bào)告表

表2 廣西黑白花奶牛糞檢牛吸蟲、線蟲、球蟲和隱孢子蟲感染情況

（3）圈養(yǎng)的奶水牛的新鮮糞樣和全血，經(jīng)檢測(cè)沒有發(fā)現(xiàn)吸蟲、線蟲、隱孢子蟲、牛巴貝斯蟲和伊氏錐蟲的感染。但圈養(yǎng)的奶水牛球蟲感染的平均陽性率為38.89% （21/54），感染強(qiáng)度也都非常低，每個(gè)視野 （400×）見卵囊在0～3個(gè)之間，屬于正常的帶蟲現(xiàn)象。

2.2 廣西黑白花奶牛寄生蟲感染情況

（1）廣西黑白花奶牛糞檢牛吸蟲、線蟲、球蟲和隱孢子蟲感染情況，見表2。

結(jié)果表明，廣西黑白花奶牛吸蟲的感染率為0；線蟲的感染也非常低，僅平均為0.4%，也就是南寧石埠場(chǎng)、鹿寨奶牛場(chǎng)、桂平奶牛場(chǎng)和金光奶牛場(chǎng)個(gè)別牛有感染，感染強(qiáng)度很低，每克糞便在26～78個(gè)卵囊之間，線蟲為毛首線蟲和圓線目的其他線蟲；球蟲感染的平均陽性率為14.9%，感染強(qiáng)度在每個(gè)視野 （400×）見卵囊在0～3個(gè)之間，屬于正常的帶蟲現(xiàn)象；隱孢子蟲的平均感染率為10.8%，其卵囊經(jīng)形態(tài)、大小和PCR鑒定為安氏隱孢子蟲。

（2）上述11個(gè)黑白花奶牛規(guī)模場(chǎng)奶牛全血628頭份，經(jīng)PCR方法檢測(cè)牛伊氏錐蟲和焦蟲全部為陰性。

3 討論

3.1 調(diào)查結(jié)果

3.2 防治措施

由于散養(yǎng)水牛長(zhǎng)年放牧的特點(diǎn)而使前后盤吸蟲、肝片形吸蟲的平均感染率高達(dá)45.5%和39.6%，說明廣西散養(yǎng)水牛幾近一半感染有吸蟲病，有些地方的感染率達(dá)到100%，從檢測(cè)的感染強(qiáng)度來看，肝片形吸蟲有7.7%的陽性牛，前后盤吸蟲有15.1%的陽性牛每克糞便含蟲卵數(shù)超100個(gè)，達(dá)致要用藥物驅(qū)殺的程度。理論上講無論是少數(shù)蟲卵的 “帶蟲現(xiàn)象”或還是大強(qiáng)度 （≥100個(gè)蟲卵/克糞便）的感染都會(huì)對(duì)牛體造成損害，而且由于不斷地向體外排出蟲卵，污染環(huán)境和牧地，更有利于該病的傳播和擴(kuò)散。根據(jù)該病流行病學(xué)的特點(diǎn)，為更好地防控該病，我們建議應(yīng)采取綜合性的防治措施。

（1）定期驅(qū)蟲：本區(qū)水牛因全年放牧，每年要進(jìn)行2～3次驅(qū)蟲，一次在冬季，一次在春季，嚴(yán)重感染的地區(qū)中間可加強(qiáng)一次。對(duì)于急性的病例或表現(xiàn)有臨床癥狀的病?？呻S時(shí)驅(qū)蟲。同一自然村或同一牧地放牧的牛最好同時(shí)驅(qū)蟲，以減少感染源。牛的糞便，特別是驅(qū)蟲后的糞便應(yīng)堆積發(fā)酵處理。

（2）消滅中間宿主：許多淡水螺是肝片形吸蟲的中間宿主，因此滅螺是預(yù)防水牛肝片形吸蟲病的重要措施?？梢圆扇「牧寄恋兀钇綗o用低洼水潭等措施，改變螺的孳生條件，同時(shí)還可以采取化學(xué)藥物和生物滅螺的辦法，消滅中間宿主。

（3）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理：注意選擇在高燥處放牧，最好飲用井水或流動(dòng)的河水，保持水的清潔，以防感染。對(duì)收割來的牧草須經(jīng)處理，方可用于飼喂。

3.3 分析說明

本次調(diào)查圈養(yǎng)的奶水牛和黑白花奶牛沒有發(fā)現(xiàn)吸蟲的感染，且線蟲的感染也明顯比散養(yǎng)牛低，說明舍飼能有效防控牛吸蟲的感染和疾病的發(fā)生，這種飼養(yǎng)方式值得大力推廣。

從牛寄生蟲病檢測(cè)發(fā)現(xiàn)線蟲在奶水牛中感染為陰性，在散養(yǎng)水牛、黑白花奶牛中感染率也很低，平均分別為4.1%與0.4%，其感染的強(qiáng)度也是非常低，說明在現(xiàn)有飼養(yǎng)管理的條件下，線蟲不是牛寄生蟲的優(yōu)勢(shì)種類。

3.4 調(diào)查分析

無論是散養(yǎng)水牛還是黑白花奶牛通過采集全血以PCR方法檢測(cè)，表明牛巴貝斯蟲和伊氏錐蟲全部為陰性。但據(jù)1990年廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)防疫檢疫站編 “廣西1987～1990畜禽疫病普查資料匯編”的記載，調(diào)查30個(gè)縣市和1個(gè)種畜場(chǎng)，牛焦蟲用血片鏡檢，伊氏錐蟲用間接血凝試驗(yàn)，結(jié)果牛焦蟲感染陽性縣率10% （3/30），牛焦蟲感染陽性率在2～5.38%之間，種畜場(chǎng)為陰性，牛伊氏錐蟲感染陽性縣率100% （30/30），平均陽性率為13.5% （421/3121），種畜場(chǎng)的陽性率為（29.97%）[6]。造成檢測(cè)結(jié)果的差異，可能與采樣時(shí)間，采集樣本的個(gè)體有很大關(guān)系。由于該病在寒冷的冬天和枯草的季節(jié)容易發(fā)作，而且臨床上時(shí)有發(fā)病報(bào)道[7-9]，所以也要特別注意對(duì)該病的診治和預(yù)防。

3.5 結(jié)論

調(diào)查發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲僅感染黑白花奶牛，且感染率為10.8%，從卵囊形態(tài)、大小和PCR方法檢測(cè)鑒定為安氏隱孢子蟲，但由于該蟲寄生在瘤胃，并不引起牛的拉稀和其他異常的變化，對(duì)產(chǎn)奶量是否有影響還在觀察之中，治療沒有很好的藥物，預(yù)防重在及時(shí)清理糞便，搞好環(huán)境衛(wèi)生、注重滅鼠和滅蚊工作。

本次調(diào)查的結(jié)果表明，感染廣西水牛和奶牛的主要寄生蟲種類有前后盤吸蟲、肝片形吸蟲、線蟲、艾美耳球蟲和安氏隱孢子蟲。其中前后盤吸蟲與肝片形吸蟲主要感染廣西散養(yǎng)水牛，平均感染率分別達(dá)45.5%和39.6%。肝片形吸蟲的感染率和王冬英等 （2006）報(bào)道的53.94%、R.S.Law son.Dope.Passi等（2009）報(bào)道的51.70%的結(jié)果有一定的差異[4,5]，應(yīng)該是采樣個(gè)體和檢測(cè)方法的不同而引起。線蟲的感染率散養(yǎng)水牛為4.1%，黑白花奶牛為0.4%，而且感染強(qiáng)度均在8～78個(gè)蟲卵/克糞便，是一種正常的帶蟲免疫狀態(tài)；安氏隱孢子蟲僅在黑白花奶牛中發(fā)現(xiàn)，安氏隱孢子蟲的感染率為10.8%，但安氏隱孢子蟲對(duì)牛的致病性很弱，單獨(dú)感染不會(huì)引起拉稀和生長(zhǎng)障礙；球蟲對(duì)所有牛感染的陽性率都很高，散養(yǎng)水牛為35.04% （178/508），圈養(yǎng)的奶水牛為38.89%（21/54），黑白花奶牛14.9%，但感染的強(qiáng)度都非常低，每個(gè)視野 （400×）見卵囊在0～3個(gè)之間，屬于正常的帶蟲現(xiàn)象，調(diào)查未發(fā)現(xiàn)對(duì)牛造成大的危害。因此防控牛前后盤吸蟲、肝片形吸蟲病的傳播和發(fā)生是廣西牛尤其是散養(yǎng)水牛寄生蟲病的防治重點(diǎn)。而對(duì)圈養(yǎng)奶水牛的調(diào)查，未發(fā)現(xiàn)任何寄生蟲感染，可能與飼養(yǎng)環(huán)境和采集樣本數(shù)量較少有關(guān)。

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[2]許金俊.動(dòng)物寄生蟲學(xué)實(shí)驗(yàn)教程[M].南京:河海大學(xué)出版社,2007.

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廣西水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局資助項(xiàng)目 （桂漁牧財(cái) [2011]52號(hào)）資助。

韋志鋒 （1963-），男，助理研究員，本科，主要從事動(dòng)物疫病防治工作。

楊威 （1957-），研究員，本科，主要從事動(dòng)物疫病防治工作。