紀曉娜，崔振峰，張學偉，陳國軍，張時嘉，李冬媛

（1.長春工程學院理學院；2.吉林省城市污水處理重點實驗室，長春130012；3.北京同仁堂吉林參茸科技開發(fā)有限公司，吉林 白山135200）

0 前言

亞油酸是人體不能合成，但又必需的ω－6系列不飽和脂肪酸，具有降低血液中的過量膽固醇、增強細胞膜的透性、阻止心肌組織和動脈硬化的功能［1］。亞油酸要從膳食中補充，最好的途徑就是食用植物油。食用植物油相對于動物油脂具有更少飽和脂肪酸而更多不飽和脂肪酸的優(yōu)點，更利于健康［2］。食用油中不飽和脂肪酸的定量對于指導人們健康飲食具有重要意義［3］。采用氣相色譜法（GC）可以對不飽和脂肪酸中的亞油酸高效分離、準確定量［4］，盡管質(zhì)譜（MS）是目前先進的檢測器［5］，但氫火焰離子化檢測器（FID）以其33%的市場占有率更具有推廣價值，因此本文選擇了GC－FID的檢測方法。

目前多以籠統(tǒng)的 n－6／n－3 表征食用油的品質(zhì)［6］，本論文以亞油酸為例尋找一種適合推廣使用的檢測植物油中不飽和脂肪酸的方法，將針對確定的不飽和脂肪酸直接定量。同時，不飽和脂肪酸含量也可以作為比較不同種類和產(chǎn)地食用油品質(zhì)的一個指標，通過測試幾種常見植物油中亞油酸的含量，為食用油中營養(yǎng)成分的比較提供數(shù)據(jù)參考。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

Agilent 6820氣相色譜儀（FID檢測器）：美國安捷倫公司；Agilent DB－FFAP聚乙二醇毛細管柱（30m×0.25mm×0.25μm）：使用溫度為40～250℃，美國安捷倫公司；甲醇（色譜純）：山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司；正己烷（色譜純）：天津市光復精細化工研究所；0.4mol／mL氫氧化鉀—甲醇溶液：稱取1.122g氫氧化鉀，用甲醇溶解至50mL容量瓶中；亞油酸甲酯標準溶液（1 000mg）：P.O.Box 295 109West Main St.，Elysian，MN 56028U.S.A.；十一酸甲酯標準溶液（100mg）：P.O.Box 295 109West Main St.，Elysian，MN 56028U.S.A.。

1.2 色譜條件

采用程序升溫：柱溫為100℃，保持1min，再以15℃／min升到200℃ ，保持19min；載氣（氮氣）：1.04mL／min；輔助氣（氮氣）：23.92mL／min；FID的空氣：260mL／min，氫氣：26.08mL／min；不分流進樣。亞油酸甲酯的保留時間19.0min，十一酸甲酯（內(nèi)標）的保留時間7.0min。

1.3 標準曲線的制定

分別取亞油酸甲酯標準溶液10μL，20μL，30 μL，40μL，50μL于10mL容量瓶中，并分別加入100μL十一酸甲酯標準溶液，正己烷定容至刻度。根據(jù)峰面積比值（標準／內(nèi)標）與質(zhì)量濃度的線性關(guān)系，對質(zhì)量濃度 100 μg／mL，200 μg／mL，300 μg／mL，400μg／mL，500μg／mL的混合標準溶液進行測定，采用內(nèi)標法定量，以質(zhì)量濃度為橫坐標（C），亞油酸甲酯／十一酸甲酯的峰面積比為縱坐標（Y）（見表1）。

表1 亞油酸甲酯標樣的回歸方程，相關(guān)系數(shù)和檢出限

1.4 甲酯化條件

準確稱取樣品若干克于10mL具塞比色管中，加入氫氧化鉀—甲醇溶液（濃度為0.4mol／mL）使之甲酯化，40℃，超聲波震蕩，甲酯化反應時間為40 min，。再加入甲苯—正己烷（1︰1）混合溶液4 mL，在一定溫度下超聲振蕩，移入分液漏斗中，比色管用正己烷洗三次，加入2mL二次水，搖勻，靜置分層，重復三次萃取，取上清液于3 000r／min下離心6min，移取上清，并洗滌沉淀3次，一并轉(zhuǎn)移，用正己烷定容到10mL，24h內(nèi)檢測。

2 結(jié)果與討論

2.1 甲酯化條件的選擇

由于亞油酸具有熱不穩(wěn)定性，所以在測定前要進行甲酯化。

甲酯化方法：準確稱取樣品于10mL具塞比色管中，加入催化劑和甲醇使之甲酯化，再加入甲苯—正己烷（1︰1）混合溶液4mL，在一定溫度下超聲振蕩，移入分液漏斗中，比色管用正己烷洗3次，加入2mL2次水，搖勻，靜置分層，重復3次萃取，取上清液于3 000r／min下離心6min，移取上清，并洗滌沉淀3次，一并轉(zhuǎn)移，用正己烷定容到10mL，經(jīng)微孔過濾（0.45μm）后待測。

2.1.1 甲酯化試劑的選擇

分別使用氫氧化鉀—甲醇溶液和硫酸—甲醇溶液作為亞油酸的甲酯化試劑（見表2和表3）。

表2 硫酸—甲醇的條件選擇

表3 氫氧化鉀—甲醇的條件選擇

表2和表3表明，響應值越高說明甲酯化越完全，用0.4mol／mL氫氧化鉀—甲醇溶液的甲酯化效果更好。因此本實驗采用0.4mol／mL氫氧化鉀—甲醇溶液作甲酯化試劑。

2.1.2 甲酯化時間的選擇

甲酯化時間太短，亞油酸甲酯化不完全；時間太長，使酯化產(chǎn)物發(fā)生水解，則影響甲酯化效率。因此本實驗對不同反應時間進行了比較（見表4）。

表4 甲酯化時間對甲酯化效率的影響

表4表明，40min的響應值最大，說明亞油酸甲酯化效率最高，因此本實驗甲酯化時間用40min。

2.1.3 甲酯化后穩(wěn)定性實驗

取甲酯化后的溶液，分別在0、2、6、24h測試（見表5）。

表5 亞油酸甲酯的穩(wěn)定性試驗

表5表明，甲酯化后的溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

綜上所述：本實驗采用0.4mol／L氫氧化鉀—甲醇溶液為甲酯化試劑，甲酯化時間為40min，甲酯化后盡快完成測試（24h內(nèi)）。

2.2 植物油中亞油酸含量的測定

在超市內(nèi)購得四種植物油：大豆油、花生油、玉米油和葵花仁油，經(jīng)甲酯化前處理后進行測定，色譜圖以花生油為例（見圖1）。

圖1 花生油樣品譜圖

4種樣品中亞油酸含量見表6。

表6 植物油中亞油酸的含量

結(jié)果顯示，大豆油中亞油酸的含量最高，達到了267.54mg／g。

2.3 精密度的測定

連續(xù)5次檢測樣品得到亞油酸甲酯／十一酸甲酯的峰面積比值，計算相對標準偏差（見表7）。

2.4 回收率的測定

通過對各植物油樣品中加入相當濃度的標準溶液進行加標回收實驗考察方法的準確度（樣品回收率見表8）。

表7 測得油樣品的亞油酸甲酯峰面積／十一酸甲酯峰面積的相對標準偏差

表8 植物油中亞油酸加標回收率

2.5 檢出限

取100μg·mL－1的混合標準溶液進行多次稀釋，至信噪比（S／N）為3，對應亞油酸甲酯的進樣含量為0.001pg，因此該方法的最低檢出限為0.001 pg（S／N＝3）（見表1）。

3 結(jié)語

本論文確定了食用植物油中亞油酸甲酯化條件，并測定了目前市場出售的花生油﹑玉米油﹑葵花仁油和大豆油4種食用植物油中亞油酸的含量，其中以大豆油中亞油酸含量為最高，而葵花仁油含量最低，花生油和玉米油居中。該方法的檢測范圍寬、線性良好，相對標準偏差（RSD＜1%）和回收率（96%～110%）均能滿足檢測要求。綜上，該方法對儀器和實驗條件要求不高，定量準確、精密度高，操作方便快捷，適合推廣用于大批量樣品的快速監(jiān)督檢測。

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