高飛云 李充璧

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué) 內(nèi)蒙呼和浩特 010110; 2.肇慶學(xué)院 廣東肇慶 526061)

葛花是豆科植物野葛[Pueraria Lobata(Willd)Ohwi]的干燥花蕾,葛花在歷代本草中均有記載,其主要用于解酒醒脾,其余療效較為廣泛,如:抗腫瘤、降糖、護(hù)肝等功效,是中藥中具有標(biāo)志性的解酒藥。起主要有效成分為黃酮類化合物[1-3]。本實(shí)驗是通過葛花提取物對酒精誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型的作用,提示葛花提取物對此類損傷具有的保護(hù)和預(yù)防的作用。酒精性肝病(alcoholicliver disease,ALD)是由于長期大量飲酒所致的肝臟疾病,初期通常表現(xiàn)為脂肪肝,進(jìn)而可發(fā)展成酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化,嚴(yán)重酗酒時可誘發(fā)廣泛肝細(xì)胞壞死甚或肝功能衰竭。至今臨床上還沒有有效防治其發(fā)生發(fā)展的理想藥物。本試驗旨在觀察葛花提取物對小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要儀器和試劑

主要儀器 臺式多功能凍干機(jī)(heto power dry LL3000);RE-3000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠); Waters高效液相色譜系統(tǒng)(含Waters 1525泵,Waters 2487雙通道紫外檢測器,Waters 717plus自動進(jìn)樣器, Breeze色譜工作站,美國Waters公司);

3-1 小鼠ALT測定結(jié)果

主要試劑 葛花(肇慶學(xué)院自購);冰醋酸、石油醚、乙酸乙酯、鄰苯三酚、甲醇、乙醇等均為分析純,購置于廣州化學(xué)試劑廠;ALT/AST試劑盒,購自上海生物工程科技有限公司。

1.2 實(shí)驗方法

葛花提取物的制備 稱取葛花10克,準(zhǔn)確稱取100ml 70%的乙醇,浸泡1小時后,連續(xù)回流3次,每次均有70%的乙醇100ml,每次提取1h,收集3次的濾液,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收乙醇,冷凍干燥。

1.3 小鼠急性酒精肝模型的制備

方法參照周瓊在《小鼠急性肝損傷模型的建立及GSTA1分析》中提到的乙醇至小鼠急性肝損傷模型的復(fù)制。

小鼠在隔夜禁食后,以15ml/ml的劑量灌胃56度紅星二鍋頭,每日灌胃一次,連續(xù)7d。末次染毒后處死小鼠,檢測肝功能指標(biāo)后發(fā)現(xiàn)小鼠出現(xiàn)肝功能損傷,并出現(xiàn)肝臟細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。

1.4 葛花提取物對小鼠急性酒精性肝損傷的治療作用

1.4.1 取制作好的小鼠急性酒精肝模型90只,隨機(jī)分為3組。分別為1組對照組、2組治療組、3組空白組。

1.4.2 1組對照組每天以0.02g/kg的劑量灌胃三也真品舒肝片,每天2次。2組治療組以0.005g/kg的劑量灌胃葛花提取物,每天次。3組空白組灌胃同樣劑量的生理鹽水,每天2次。其他實(shí)驗條件保持一致。

1.4.3 連續(xù)灌胃一周后,末次灌胃后8小時處死小鼠,取小鼠肝臟,研磨勻漿后,利用ALT/AST試劑盒測試小鼠的ALT/AST指標(biāo),并與空白組及對照組做對比。

1.5 葛花提取物對小鼠急性酒精性肝損傷的預(yù)防作用

1.5.1 取正常小鼠90只,隨機(jī)分為3組。分別為1組對照組、2組治療組、3組空白組。

1.5.2 1組對照組每天以0.02g/kg的劑量灌胃三也真品舒肝片,每天2次。2組治療組以0.005g/kg的劑量灌胃葛花提取物,每天次。3組空白組灌胃同樣劑量的生理鹽水,每天2次。其他實(shí)驗條件保持一致。

1.5.3 連續(xù)灌胃一周后,采用小鼠急性酒精肝模型的制備方法,以15ml/ml的劑量灌胃56度紅星二鍋頭,每日灌胃一次,連續(xù)7d。末次染毒后處死小鼠,取小鼠肝臟,研磨勻漿后,利用ALT/AST試劑盒測試小鼠的ALT/AST指標(biāo),并與空白組及對照組做對比。

2 統(tǒng)計學(xué)分析

用SPSS13.0版統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,實(shí)驗所得數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(± S)表示,顯著性檢驗采用T檢驗,P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。

3 實(shí)驗結(jié)果

3.1.葛花提取物對小鼠急性酒精性肝損傷的治療作用

提示葛花提取物對小鼠急性酒精性肝損傷有治療作用,在小鼠ALT/AST指標(biāo)的測定中,治療組與對照組及空白組比較,P值均<0.05,具有統(tǒng)計學(xué)意義。故認(rèn)為葛花提取物對小鼠急性酒精性肝損傷有效。

與空白相比,*P<0·05,**P<0·01,對照組與治療組均有效

討論:

ALD發(fā)病機(jī)制可能與乙醇及其代謝產(chǎn)物對肝臟的毒理作用、氧應(yīng)激、免疫誘導(dǎo)和細(xì)胞因子、細(xì)胞凋亡、遺傳、病毒的疊加作用等有關(guān)[4]。對于葛花的研究,其藥理作用研究的非常之多,而對于急性酒精性肝損傷,研究也相對較多?，F(xiàn)在已經(jīng)有較多的針對急性酒精性肝損傷治療和預(yù)防的藥物問世,像柴胡、咖啡因等。但迄今為止,臨床上還沒有有效防止急性酒精性肝損傷發(fā)生發(fā)展的有效藥物。近年來,有許多研究提示飲用咖啡因(caffeine)為基礎(chǔ)的飲料可以減少肝臟患病的幾率,尤其對嗜酒者效果更加明顯[5-6]。也有學(xué)者指出梔子京尼平苷對小鼠急性酒精性肝損傷有保護(hù)作用[7]。中醫(yī)本草記載葛花有護(hù)肝作用,但葛花對急性酒精性肝損傷的效果還研究較淺。血清的ALT和AST是反映肝細(xì)胞受損的重要指標(biāo),在葛花提取物對小鼠急性酒精性肝損傷的研究中發(fā)現(xiàn),ALT的變化是較為明顯的,AST的變化不是很明顯。由此可以說明,姜黃素對小鼠肝臟的保護(hù)是有局限性的。如果搭配其他藥物,效果應(yīng)該會進(jìn)一步提升。

[1]尹俊亭,仲英,孫敬勇,等. 葛花的研究進(jìn)展[J]．中草藥,2005,36(12):1905-1906.

[2]Shin J E,Bae E A,Lee Y C,et al. Estrogenic effect of main compo－nents kakkalide and tectoridin of Puerariae Flos and their metabo－lites[J]. Biol Pharm Bull, 2006,29(6):1202-1206.

[3]Lee M K,Cho S Y,Jang J Y,et al. Effects of puerariae flos and puer－ariae radix extracts on antioxidant enzymes in ethanol-treated rats[J]. Am J Chin Med,2001,29(2):343-354.