張楊，吳順清，魏彥飛 （荊州文物保護(hù)中心技術(shù)研究部，湖北 荊州434020）

吳晶晶，吳剛珂，袁萬(wàn)博 ，李俊立 長(zhǎng)江大學(xué)荊州臨床醫(yī)學(xué)院

荊州市中心醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部，湖北 荊州434020

我國(guó)文物考古工作者1975年在湖北省江陵縣（今荊州市）紀(jì)南城鳳凰山一六八號(hào)墓中發(fā)現(xiàn)的西漢古男尸出土近40年，是當(dāng)時(shí)我國(guó)發(fā)現(xiàn)的時(shí)代最早的一具古尸。古尸出土后長(zhǎng)期浸泡在由福爾馬林配制的保存液中，為了解西漢古尸的血型物質(zhì)保存情況，采集其左上臂肌肉，運(yùn)用抑制凝集試驗(yàn)的方法，對(duì)古尸血型進(jìn)行了驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

抗A、抗B血型定型試劑（單克隆抗體），效價(jià)≥1∶128，上海血液生物有限公司，批號(hào)：20130612，4℃冰箱保存；百分之一紅細(xì)胞懸液，取健康人的A型、B型紅細(xì)胞各3份，用生理鹽水洗滌3次，制成壓積紅細(xì)胞，按1∶100的比例制成紅細(xì)胞懸液；所驗(yàn)證組織取自于西漢古尸左上臂肌肉組織，對(duì)照組織為已知血型為O型的人肝臟組織。一次性使用培養(yǎng)板，浙江拱東醫(yī)用塑料廠，批號(hào)：100607。

1.2 方法

取古尸左上臂肌肉組織及已知O型血人肝臟組織少量，分離成細(xì)絲狀，用生理鹽水洗滌兩次后，分成二等分放入一次性使用培養(yǎng)板的五個(gè)凹孔中。

取5支潔凈玻璃試管，分別標(biāo)記1～5號(hào)，每管加入500μL生理鹽水，再取500μL抗A血型定型試劑加入1號(hào)小試管中混勻后，從1號(hào)試管中吸出500μL加入2號(hào)試管中混勻，依次類推直至5號(hào)試管，最后從5號(hào)試管吸出500μL棄去?？笲血型定型試劑倍比稀釋同上步驟。

向已分成二等分的古尸左上臂肌肉組織及已知O型血人肝臟組織的凹孔中分別滴加不同稀釋倍數(shù)的抗A、抗B血型定型試劑100μL，置室溫中2h，然后放置4℃冰箱72h，接著取出至室溫下平衡。從凹孔中吸出已被吸收的抗A、抗B血型定型試劑各50μL放置另一潔凈凹孔中，用生理鹽水倍比稀釋，再滴加相應(yīng)的已配制好的1∶100紅細(xì)胞懸液50μL，搖勻后室溫放置10min，顯微鏡下觀察是否發(fā)生凝集現(xiàn)象。若發(fā)生凝集現(xiàn)象則說(shuō)明組織中不含相應(yīng)的A、B血型物質(zhì)，若不發(fā)生凝集現(xiàn)象則說(shuō)明組織中含有相應(yīng)的A、B血型物質(zhì)。

2 結(jié)果

將所用抗A、抗B血型定型試劑（單克隆抗體）稀釋成1／2、1／4、1／8、1／16、1／32的倍數(shù)分別進(jìn)行試驗(yàn)，紅細(xì)胞懸液與左上臂肌肉組織浸泡過(guò)的抗A、抗B血型定型試劑均未發(fā)生凝集，與肝臟組織浸泡過(guò)的抗A、抗B血型定型試劑均發(fā)生了凝集，結(jié)果表1，凝集情況分別見(jiàn)圖1、圖2、圖3、圖4。

表1 兩種組織的抑制凝集試驗(yàn)結(jié)果

圖1 古尸組織＋抗A血型定型試劑，紅細(xì)胞不凝集

圖2 古尸組織＋抗B血型定型試劑，紅細(xì)胞不凝集

圖3 肝臟組織＋抗A血型定型試劑，紅細(xì)胞凝集

圖4 肝臟組織＋抗B血型定型試劑，紅細(xì)胞凝集

3 討論

江陵鳳凰山西漢古尸的發(fā)現(xiàn)是我國(guó)考古工作的重大發(fā)現(xiàn)，對(duì)其血型的驗(yàn)證是對(duì)古尸研究的重要課題之一。某些血型抗原以可溶解的形式存在于血清、血漿、唾液、尿液［1～5］等體液中，也可以非溶解性物質(zhì)的形式存在于發(fā)、骨、皮膚等組織中，這些血型物質(zhì)可以中和相應(yīng)的抗體。古尸出土前長(zhǎng)期浸泡在棺液中，而出土后又浸泡在保存液中已經(jīng)長(zhǎng)達(dá)近40年，無(wú)法采取其體液等進(jìn)行試驗(yàn)，故本研究采取了其左上臂肌肉組織進(jìn)行檢測(cè)。

組織中可溶性抗原與特異性抗體一定時(shí)間的接觸而被中和，這些中和抗體的過(guò)程抑制了該抗體對(duì)紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)，按照這種原理，筆者對(duì)古尸組織進(jìn)行了不同滴度特異性抗體的抑制凝集試驗(yàn)，古尸血型物質(zhì)被成功檢出，而且結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定。國(guó)內(nèi)外均有關(guān)于古尸的毛發(fā)、骨組織、肌組織等血型檢測(cè)的報(bào)道［6～8］，也表明保存相對(duì)較好的古尸在千年后仍可檢測(cè)出ABO血型，可能是因?yàn)锳及B血型物質(zhì)是多糖－氨基酸復(fù)合物，由半乳糖和氨基酸（即N－乙酰氨基葡萄糖）聚合而成［3，4，9］，結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，不與含甲醛等化學(xué)物質(zhì)的保存液產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。

就實(shí)驗(yàn)而言，本研究采用的抑制凝集試驗(yàn)方法中，同時(shí)進(jìn)行了已知血型組織作為對(duì)照，且檢出結(jié)果正確，這就保證了對(duì)古尸所檢出血型結(jié)果為AB型的準(zhǔn)確性，且與40年前所鑒定的結(jié)果一致［6］。此方法雖然用材量較多，反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)，但操作易于掌握，結(jié)果可靠。

由此可見(jiàn)，本例西漢古尸的血型檢出，表明其出土近四十年仍保存較好，血型物質(zhì)未被破壞，亦表明ABO血型是人類基因遺傳重要特征之一［10～11］，兩千一百多年前的人類與現(xiàn)在的人類均有ABO血型系統(tǒng)，為人類早已形成的特征。檢出血型結(jié)果與40年前所鑒定結(jié)果一致，也表明了所使用的保存液對(duì)血型物質(zhì)起到了很好的保護(hù)作用。

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