鄭衛(wèi)東　陳娟　潘云軍

[摘 要] 目的：探討Sysmex UF-1000i全自動尿中有形成分分析儀檢測胸腹水細(xì)胞的可靠性。方法：使用UF-1000i和顯微鏡手工計數(shù)兩種方法，分別檢測253例胸腹水患者樣本（125例胸水，128例腹水）中的紅細(xì)胞數(shù)（RBC）和白細(xì)胞數(shù)（WBC），進(jìn)行批內(nèi)精密度試驗，并對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：125例胸水患者樣本兩種檢測方法結(jié)果比較，RBC、WBC數(shù)值差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（z=-3.969，P=0.000；z=-2.597，P=0.009）；128例腹水患者樣本兩種檢測方法結(jié)果比較，RBC、WBC數(shù)值差異也均有統(tǒng)計學(xué)意義（z=-2.186，P=0.029；z=-3.780，P=0.000）；批內(nèi)精密度試驗UF1000i檢測各濃度RBC、WBC的CV值≤2.0%， 手工法的CV值9.8%～21.2%，手工法樣本中RBC或WBC濃度越高，CV值越大。結(jié)論：兩種方法檢測胸腹水細(xì)胞結(jié)果存在差異，UF-1000i檢測胸腹水細(xì)胞具有快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好等優(yōu)勢。

[關(guān)鍵詞] 全自動尿中有形成分分析儀；胸水；腹水；紅細(xì)胞數(shù)；白細(xì)胞數(shù)

中圖分類號：R446.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：2095-5200（2015）06-048-03

DOI：10.11876/mimt201506019

胸腹水常規(guī)檢驗，是臨床實驗室常見檢測項目，對于鑒別滲出液和漏出液具有重要參考價值。胸腹水細(xì)胞計數(shù)“金標(biāo)準(zhǔn)”， 至今仍是在顯微鏡下，用改良牛鮑計數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)[1]。但該法存在操作繁瑣、計數(shù)誤差大、重復(fù)性差、人為影響因素較大等諸多弊端[2]。因此，尋找切實可行替代方法一直是實驗室工作者和各儀器廠家努力方向。本研究用Sysmex UF-1000i全自動尿中有形成分分析儀（以下簡稱UF-1000i）和顯微鏡手工計數(shù)法，同時檢測患者胸腹水中紅細(xì)胞數(shù)（RBC）和白細(xì)胞數(shù)（WBC），分析UF-1000i檢測胸腹水細(xì)胞計數(shù)的可靠性。

1 資料與方法

1.1 樣本來源

2013年1～12月125例胸水患者樣本來自本院呼吸內(nèi)科、腫瘤科、感染性疾病科等，患者年齡20～94歲。128例腹水患者樣本主要來自本院感染性疾病科、消化內(nèi)科、腫瘤科等，患者年齡24～74歲?；颊咝馗顾蛟\斷不全或待查，但不影響本研究檢測結(jié)果統(tǒng)計分析。

1.2 儀器和試劑

Sysmex UF-1000i全自動尿中有形成分分析儀，配套試劑和質(zhì)量控制品；改良牛鮑計數(shù)板；日本OLYMPUS CX-1光學(xué)顯微鏡。

1.3 檢測方法

1.3.1 顯微鏡計數(shù)法 所有樣本由兩位有豐富經(jīng)驗檢驗師采用雙盲法，嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第三版[3]要求操作，每份樣本RBC和WBC均計數(shù)兩次，結(jié)果取均值。對于血性樣本，視具體情況用0.85%醫(yī)用生理鹽水適當(dāng)稀釋，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；對于有凝塊樣本，充分混勻后取沒有凝塊樣本充池計數(shù)。所有樣本送檢后均在1h內(nèi)完成檢測。

1.3.2 UF-1000i儀器法 用原廠質(zhì)控品UFⅡ CONTROL-L和UFⅡCONTROL-H 進(jìn)行質(zhì)控操作，各項指標(biāo)在控后，充分混勻樣本，手動進(jìn)樣方式檢測，所有樣本送檢后均在1h內(nèi)完成檢測。UF-1000i RBC和WBC線性范圍均為：（1～5000個/μL），因此，RBC或WBC任何一項超過5000個/μL樣本，用0.85%醫(yī)用生理鹽水適當(dāng)稀釋，使其結(jié)果控制在線性范圍內(nèi)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

1.3.3 批內(nèi)精密度試驗 以UF-1000i計數(shù)RBC和WBC為參考依據(jù)，依據(jù)儀器線性范圍， 隨機選擇高濃度RBC或WBC標(biāo)本（>5000×106/L），中濃度RBC或WBC標(biāo)本（150×106/L～5000×106/L，低濃度RBC或WBC標(biāo)本（<150×106/L）。每份分別使用儀器法和手工鏡檢法連續(xù)計數(shù)11次，各剔除1個最差結(jié)果， 分別統(tǒng)計每組10個結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)差（s）和變異系數(shù)（CV）[4]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件，用兩配對樣本W(wǎng)ilcoxon符號平均秩檢驗法對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

125例胸水患者樣本兩種檢測方法結(jié)果，RBC、WBC差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（z=-3.969，P=0.000；z= -2.597，P=0.009），結(jié)果見表1；128例腹水患者樣本兩種檢測方法結(jié)果比較RBC、WBC差異也均有統(tǒng)計學(xué)意義（z=-2.186，P=0.029；z=-3.780，P=0.000）。

3 討論

3.1 手工法用于胸腹水細(xì)胞計數(shù)可靠性評價

胸腹水常規(guī)檢驗對于判斷積液性質(zhì)和病因具有重要意義。全國臨床檢驗操作規(guī)程第三版推薦顯微鏡手工計數(shù)法。但由于該法存在前文中諸多缺陷，顯然做為“金標(biāo)準(zhǔn)”已經(jīng)無法滿足循證醫(yī)學(xué)要求準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好等基本原則。筆者參考何銀華等[4]方法，進(jìn)行批內(nèi)精密度試驗，結(jié)果表明，手工法CV值均顯著高于儀器法，且樣本中RBC或WBC濃度越高，CV值越大。原因與手工法固有缺陷，如充池不均、計數(shù)池內(nèi)細(xì)胞過多不易準(zhǔn)確計數(shù)等有關(guān)，因此手工法細(xì)胞計數(shù)重復(fù)性較差。

3.2 血細(xì)胞分析儀用于胸腹水細(xì)胞計數(shù)可靠性評價

目前，醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)本科教材《臨床檢驗基礎(chǔ)第四版》[5]，推薦胸腹水細(xì)胞計數(shù)首選血液分析儀法，認(rèn)為該法快速、準(zhǔn)確，但血液分析儀RBC和WBC和胸腹水報告單位不一致（血液分析儀為RBC×1012/L，胸腹水為RBC×106/L，相差10萬倍；血液分析儀為WBC×109/L，胸腹水為WBC×106/L，相差1千倍），結(jié)果需要換算，容易導(dǎo)致?lián)Q算錯誤。筆者曾嘗試用Sysmex XE-2100血液分析儀進(jìn)行胸腹水細(xì)胞計數(shù)，結(jié)果表明：血性標(biāo)本且沒有任何凝塊樣本可以檢出RBC和WBC，并可對WBC進(jìn)行分類，但樣本中低濃度或微量RBC、WBC無法檢出，容易堵孔需反復(fù)沖洗排堵影響血液標(biāo)本檢測。Sysmex XE-2100血液分析儀線性范圍：WBC 0.00～44萬個/μL；RBC：0.00～800萬個/μL，其線性范圍遠(yuǎn)高于UF-1000i（0-5000個/μL），理論上應(yīng)很容易檢出胸腹水中RBC和WBC。但實際上多數(shù)血液分析儀對樣本、抗凝劑、本底均有較高要求，抗干擾能力差。由于各種病因?qū)е滦馗顾煞侄鄻?、?fù)雜，干擾血液分析儀因素眾多，儀器主要針對血液標(biāo)本特點設(shè)計，因此目前并不適宜胸腹水常規(guī)細(xì)胞計數(shù)。隨著技術(shù)進(jìn)步，高端血液分析儀已實現(xiàn)了胸腹水等體液標(biāo)本自動化檢測[6-7]，其主要針對胸腹水等體液特性，增加了“手工進(jìn)樣+體液”檢測模式。王晗等[8]用SYSMEX XT-4000i全自動血細(xì)胞分析儀檢測胸腹水細(xì)胞與手工法比較，認(rèn)為儀器檢測胸腹水細(xì)胞具有準(zhǔn)確、快速特點，可以替代大部分手工法檢測。但高端血球分析儀價格昂貴，檢測成本較高，國內(nèi)也僅在大型三級醫(yī)院使用，其在臨床普及尚需相當(dāng)長時間。

3.3 UF-1000i用于胸腹水細(xì)胞計數(shù)可靠性評價

Sysmex UF-1000i全自動尿中有形成分分析儀主要用于檢測尿液中RBC、WBC、細(xì)菌、上皮細(xì)胞、管型等主要指標(biāo)，已基本在二級和三級醫(yī)院普及。其原理為：利用流式細(xì)胞術(shù)和電阻抗原理用紅色半導(dǎo)體激光束照射經(jīng)過核酸熒光染色后，在鞘流貫流分析池中形成鞘流樣本，并通過對各粒子產(chǎn)生前向散射光、側(cè)向散射光以及側(cè)向熒光信號轉(zhuǎn)換成光電信號進(jìn)行分析，從而對各個粒子進(jìn)行識別[9]，全自動尿液有形成分分析儀對紅細(xì)胞和白細(xì)胞檢測結(jié)果較準(zhǔn)確[10]， 具有重復(fù)性好、線性寬優(yōu)點[11]。用UF-1000i對胸腹水常規(guī)進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，國內(nèi)不少學(xué)者已做過有益嘗試，但其結(jié)論幾乎均報告UF-1000i與顯微鏡計數(shù)法無統(tǒng)計學(xué)意義[2，12-14]。本研究125例胸水患者樣本，128例腹水患者樣本中RBC、WBC差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，從表1、表2中可以看出兩種方法檢測結(jié)果中位數(shù)、四分位數(shù)均存在較大差異；表3批內(nèi)精密度試驗表明，儀器法重復(fù)性明顯優(yōu)于手工法。顯微鏡手工計數(shù)方法中多個步驟均可導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果不精確性和不準(zhǔn)確性。因此該“金標(biāo)準(zhǔn)”檢測結(jié)果，不能作為否定UF-1000i計數(shù)準(zhǔn)確性依據(jù)。但儀器法存在線性檢測范圍窄、凝塊易堵塞儀器通道等缺陷，必要時可用手工法復(fù)檢確認(rèn)，相互驗證，至少目前儀器法尚未普及前，手工法仍有其存在必要。

尿液中RBC、WBC與胸腹水中RBC、WBC在形態(tài)、大小等方面均極為相似，且尿液中結(jié)晶干擾RBC[15-16]、小圓上皮細(xì)胞干擾WBC[17]等影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性因素在胸腹水中均不存在。因此，UF-1000i更可對胸腹水常規(guī)中RBC和WBC進(jìn)行精確定量，且RBC和WBC檢測結(jié)果為（個/μL）， 無需換算直接報告， 同時WBC準(zhǔn)確定量也可以極大提高白細(xì)胞染色分類幾率（WBC>150×106/L均需分類），能夠更好地發(fā)現(xiàn)胸腹水中有意義細(xì)胞，為臨床提供更有診斷價值信息。

綜上所述，用UF-1000i對胸腹水中細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，方法簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，雖然亦存在胸腹水中凝塊易堵塞儀器、檢測成本甚至高于收費標(biāo)準(zhǔn)等不利因素，但在目前沒有更好方法情況下，可以替代大部分手工法檢測。

參 考 文 獻(xiàn)

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